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    均勻設(shè)計法在雞血紅素吸時提取中的應(yīng)用

    2011-10-09 02:47:00區(qū)子弁何淑儀
    食品工業(yè)科技 2011年6期
    關(guān)鍵詞:雞血血紅素回歸方程

    區(qū)子弁,王 琴,何淑儀

    (仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院輕工食品學(xué)院,廣東廣州510225)

    均勻設(shè)計法在雞血紅素吸時提取中的應(yīng)用

    區(qū)子弁,王 琴*,何淑儀

    (仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院輕工食品學(xué)院,廣東廣州510225)

    目的:借助均勻設(shè)計,確立雞血紅素吸附提取的最優(yōu)工藝。方法:以新鮮抗凝雞血為原料,經(jīng)超聲波溶血后,比較了pH、吸附時間、吸附劑添加量、吸附劑種類對雞血中血紅素提取的影響。結(jié)果:以血紅素得率為指標(biāo),實驗的最優(yōu)條件為pH為5.2,吸附劑添加量2.4%(w/v),吸附時間8h,選用CMC作吸附劑時,血紅素得率可達(dá)最大值2.848%(w/v);以血紅素純度為指標(biāo),實驗的最優(yōu)條件為pH為4.8,吸附劑添加量3.1%(w/v),吸附時間5h,選用CMC作吸附劑時,血紅素純度可達(dá)最大值3.04%(w/v)。

    雞血紅素,均勻設(shè)計,吸附提取

    血紅素為一種含鐵的卟啉類化合物,作為血紅蛋白的輔基,大量存在于人和哺乳動物血液的紅細(xì)胞中,起著運輸氧的重要功能。20世紀(jì)80年代初,人們開始應(yīng)用血紅素治療缺鐵性貧血,收到比傳統(tǒng)鐵制劑諸如硫酸亞鐵、富馬酸鐵、葡萄糖酸亞鐵等更顯著的療效[1]。同時開始對牲畜血中提取血紅素的方法進(jìn)行多方面的改進(jìn)[2-3]。血紅素作為預(yù)防和治療缺鐵性貧血的有效制劑,探索一種經(jīng)濟(jì)、簡便而高效的提取制備方法,一直被相關(guān)專業(yè)工作者所重視[4-5]。考慮到一些增稠劑具有獨特的吸附作用,且在吸附血紅素的同時其自身亦能作為食品的賦形劑,本文采用吸附法提取雞血紅素,并借助均勻設(shè)計優(yōu)化提取工藝,以求為雞血的深加工提供一種方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    雞血 購自廣州市遠(yuǎn)安路市場;血紅素標(biāo)準(zhǔn)品南京奧多福尼生物科技有限公司,純度≥98%;其他常規(guī)試劑 均為分析純。

    TU-1810PC紫外-可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;PHS-3C精密pH計 上海精密儀器儀表有限公司;TDL-5-A離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;DZF-250真空干燥機(jī) 鄭州長城科工貿(mào)有限公司。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 血紅素制備 新鮮雞血加8g/L檸檬酸鈉做抗凝劑,攪拌均勻,3600r/min離心15min,傾出上清液,收集紅細(xì)胞,再用9g/L的生理鹽水洗滌紅細(xì)胞2次,離心取濃縮紅細(xì)胞。將干凈的紅細(xì)胞加入一定量的去離子水和乙醇,超聲波處理溶血后,過濾,沉淀部分用酸攪拌抽提,抽濾,濾液用NaOH溶液調(diào)pH至析出沉淀,加入吸附劑,靜置抽提,3600r/min離心,取沉淀,用等體積去離子水和無水乙醚分別洗滌2次,離心,真空干燥得粗品血紅素。

    1.2.2 血紅素含量測定

    1.2.2.1 血紅素最大吸收波長的測定 精確稱取血紅素標(biāo)準(zhǔn)品0.0200g,置于50mL燒杯中,用0.1mol·L-1NaOH溶解后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,另用同濃度的NaOH溶液分3次洗滌燒杯,洗滌液合并至容量瓶并稀釋至刻度,即成血紅素標(biāo)準(zhǔn)貯備液。精密量取血紅素標(biāo)準(zhǔn)貯備液2.0mL,置于10mL比色管中,用0.1mol·L-1NaOH定容,搖勻,即成血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試液。設(shè)定紫外-可見分光光度計的波長范圍為300~540nm,掃描間距0.5nm。以0.1mol·L-1NaOH 溶液為空白,校正基線后向同一比色皿加入血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試液,測定血紅素的最大吸收波長[6]。本標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)測定其最大吸收波長為396nm。

    1.2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 血紅素標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備如1.2.2.1所述。然后精密量取血紅素標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL,分別置于 6 個 10mL 比色管中,用0.1mol·L-1NaOH 定容,搖勻,即成血紅素標(biāo)準(zhǔn)系列供試液。以0.1mol·L-1NaOH溶液為空白,在最大吸收波長下測定各自的吸光度。得回歸方程 y=0.01328x-0.00961,R2=0.9991。

    1.2.2.3 血紅素樣品濃度的測定 精確稱取血紅素樣品約1g,置于50mL燒杯中,用0.1mol·L-1NaOH溶解后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,另用同濃度的NaOH溶液分3次洗滌燒杯,洗滌液合并至容量瓶并稀釋至刻度,即成血紅素樣品貯備液。精密量取血紅素樣品貯備液2.0mL,置于10mL比色管中,用0.1mol·L-1NaOH定容,搖勻,離心后取上層清液測定吸光度(以0.1mol·L-1NaOH 溶液做空白)。

    1.2.2.4 血紅素提取工藝的均勻?qū)嶒炘O(shè)計 根據(jù)血紅素提取工藝的影響因素與水平,將按照U6(63×3)混合水平均勻設(shè)計表安排實驗,如表1所示。

    表1 血紅素提取工藝的均勻設(shè)計實驗安排[U6(63×3)]

    1.2.2.5 檢測指標(biāo) 考慮到最終產(chǎn)物血紅素的得率和純度均較為重要,故實驗的檢測指標(biāo)有兩個——血紅素得率和血紅素純度,其計算公式分別如下所示。在稱量吸附劑質(zhì)量變化前應(yīng)把沉淀物用等體積的無水乙醚、去離子水分別洗2次,離心后待無水乙醚完全揮發(fā),再置于真空干燥箱內(nèi)烘干。

    血紅素得率(%)=Δ(吸附劑吸附前后質(zhì)量變化)/樣品提取液初始體積×100%

    2 結(jié)果與分析

    2.1 血紅素提取工藝的均勻設(shè)計實驗結(jié)果

    按照表1的安排,所得實驗結(jié)果如表2所示。

    表2 均勻設(shè)計實驗結(jié)果

    2.2 均勻設(shè)計實驗結(jié)果分析

    2.2.1 以血紅素得率為指標(biāo) 采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件中的多因子及互作項逐步回歸分析,結(jié)果如表3所示。得出回歸模型優(yōu)化表達(dá)式:y=-8.44617351+1.9005105425x1+7.391266004x2-1.2809120271x1x2-0.11691808024x2x4

    此回歸方程相關(guān)系數(shù)R=0.999972,調(diào)整后的相關(guān)系數(shù) Ra=0.999862,總體顯著性檢驗值 F=4531.9904,顯著水平達(dá)到p=0.0095,剩余標(biāo)準(zhǔn)差SSE=0.0142,因此該方程的可信度較高。同時根據(jù)方程對血紅素得率進(jìn)行預(yù)測,當(dāng)x1(pH)為5.2,x2(吸附劑添加量)=2.4%,x3(吸附時間)=8h,x4(吸附劑種類)為CMC時,得到y(tǒng)(血紅素得率)最大預(yù)測值為2.91%。

    表3 均勻設(shè)計逐步回歸分析結(jié)果(以血紅素得率為指標(biāo))

    根據(jù)回歸分析所得出的上述4個因素的最優(yōu)值重新組合并進(jìn)行優(yōu)化實驗,結(jié)果如表4所示。

    表4 優(yōu)化實驗結(jié)果(以血紅素得率為指標(biāo))

    由表4優(yōu)化實驗結(jié)果可知,實測平均值為2.848%,與模型預(yù)測值2.91%相差不大。通過t檢驗分析可知,t=-0.421 <t0.05(4)=2.776,p=0.695,因此,可知實測平均值與模型預(yù)測值沒有顯著差異,這進(jìn)一步說明回歸方程可信度較高。

    因此,當(dāng)以血紅素得率為指標(biāo),實驗的最優(yōu)條件為pH為5.2,吸附劑添加量2.4%(w/v),吸附時間8h,選用CMC作吸附劑時,血紅素得率可達(dá)最大值2.848%(w/v)。

    2.2.2 以血紅素純度為指標(biāo) 采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件中的多因子及互作項逐步回歸分析,結(jié)果如表5所示。

    表5 均勻設(shè)計逐步回歸分析結(jié)果(以血紅素純度為指標(biāo))

    得出回歸模型優(yōu)化表達(dá)式:y=2.328358804+1.5881594684x2-0.25747698149x1x2+0.018732162632x2x3-0.05806423034x3x4

    此回歸方程相關(guān)系數(shù)R=0.999994,調(diào)整后的相關(guān)系數(shù) Ra=0.999972,總體顯著性檢驗值 F=22479.8477,顯著水平達(dá)到 p=0.0050,剩余標(biāo)準(zhǔn)差SSE=0.0039,因此該方程的可信度較高。同時根據(jù)方程對血紅素得率進(jìn)行預(yù)測,當(dāng)x1(pH)為4.8,x2(吸附劑添加量)=3.1%,x3(吸附時間)=5h,x4(吸附劑種類)為CMC時,得到y(tǒng)(血紅素純度)的最大預(yù)測值為3.13%。

    根據(jù)回歸分析所得出的上述4個因素的最優(yōu)值重新組合并進(jìn)行優(yōu)化實驗,結(jié)果如表6所示。

    表6 優(yōu)化實驗結(jié)果(以血紅素得率為指標(biāo))

    由表6優(yōu)化實驗結(jié)果可知,實測平均值為3.04%,與模型預(yù)測值3.13%很接近。通過t檢驗分析可知,t=-1.083 <t0.05(4)=2.776,p=0.340,因此,可知實測平均值與模型預(yù)測值沒有顯著差異,這進(jìn)一步說明回歸方程可信度較高。

    因此,當(dāng)以血紅素純度為指標(biāo),實驗的最優(yōu)條件:pH為4.8,吸附劑添加量3.1%(w/v),吸附時間5h,選用CMC作吸附劑時,血紅素純度可達(dá)最大值3.04%(w/v)。

    3 結(jié)論

    確定用CMC-Na完成提取工藝階段的氯化血紅素提取。最佳工藝參數(shù)為:以血紅素得率為指標(biāo),實驗的最優(yōu)條件為pH為5.2,吸附劑添加量2.4%,吸附時間8h;以血紅素純度為指標(biāo),實驗的最優(yōu)條件為pH為4.8,吸附劑添加量3.1%,吸附時間5h。整個工藝過程成本低廉,且通過均勻設(shè)計準(zhǔn)確找出雞血紅素提取的最優(yōu)工藝,這最終為雞血的綜合深加工開辟一條可行之路。

    [1]Autio K,Mietsch F.Heat induced gelation of myofibrillar proteins and sausages:Effect of blood plasma and globin[J].Journal Food Science,1990,55:1494-1496.

    [2]劉任民,范萬東,王搖風(fēng),等.豬血中高純度血紅素的提取工藝[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2007,23(18):2687-2689.

    [3]李晨光,莊紅,呂學(xué)舉,等.動物血液血紅素鐵提取方法研究[J].食品工業(yè)科技,2008(1):308-310.

    [4]李秀玲,余蓉,楊繼虞,等.高純度血紅素制備工藝的改進(jìn)[J].四川大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2004,35(5):738-744.

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    [6]王光亞.保健食品功效成分檢測方法[M].北京:中國輕工業(yè)出版社,2002:129-131.

    Application of uniform design on adsorbing extraction of chicken hemin

    OU Zi-bian,WANG Qin*,HE Shu-yi
    (College of Light Industry and Food,Zhongkai University of Agriculture and Engineering,Guangzhou 510225,China)

    Objective:The optimal process of adsorbing extraction of chicken hemin was determined by uniform design.Methods:The fresh chicken blood added sodium citrate was used for extracting of heme.The parameters of extraction by pH,adsorbing time,types and additions of sorbent were compared.Results:Index by yield and purity of hemin,the optimal conditions were pH5.2 and 4.8,addition of sorbent were 2.4%and 3.1%,time of sorbent were 8h and 5h,respectively,and both of the type of sorbent was CMC.The yield of hemin was up to 2.848%(w/v)and the purity was 3.04%(w/v).

    chicken hemin;uniform design;adsorbing extraction

    TS201.2

    B

    1002-0306(2011)06-0304-03

    2010-06-18 *通訊聯(lián)系人

    區(qū)子弁(1985-),男,在讀研究生,主要從事天然產(chǎn)物的研究與開發(fā)。

    校創(chuàng)新基金項目(H1409008)。

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