野生參中多糖含量的測定及其抗氧化活性的研究

郭豫梅

(陜西理工學(xué)院化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，陜西漢中723001)

野生參中多糖含量的測定及其抗氧化活性的研究

郭豫梅

(陜西理工學(xué)院化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，陜西漢中723001)

測定石參中多糖含量，并對其抗氧化活性進行了研究。采用水提醇沉法從石參中提取多糖，采用分光光度計法，測得石參中多糖含量為14.93%。此外，還對石參中多糖的抗氧化活性進行了初步探究，石參中多糖對自由基及亞硝酸鹽的清除作用隨著多糖濃度的增大而表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系。

石參，多糖，抗氧化活性

石參又名石蒜苔、崖參，屬百合科獨尾草屬的獨尾草［Eremurus chinensis］，為多年生草本植物，其根肉質(zhì)，柔軟，黃色或深褐色，為其食用部分，其干制加工產(chǎn)品呈金黃色，味甘甜，是陜西南部山區(qū)稀見的一種山野菜。然而這一寶貴資源并未被充分地開發(fā)利用，只是被當(dāng)?shù)氐木用癫墒郴蚝唵蔚募庸?。石參中含有豐富的蛋白質(zhì)和纖維素等，我國有4種，一種產(chǎn)自西南，三種產(chǎn)自新疆。其在陜西最近幾年才發(fā)現(xiàn)，據(jù)調(diào)查其在陜西的分布僅見于略陽縣境內(nèi)西淮壩鄉(xiāng)的西淮壩村、張家山等幾個狹窄地帶，目前野生獨尾草已非常少見。據(jù)陜西省資源生物重點實驗室初步測定，其含有豐富的蛋白質(zhì)和纖維素，蛋白質(zhì)幾乎接近于大米中的含量［1－2］。但對于石參化學(xué)成分的研究目前少見報道，目前這一寶貴資源并未被充分地開發(fā)利用，沒有被作為一種特色產(chǎn)品走向國內(nèi)外市場，只是被當(dāng)?shù)氐木用癫墒郴蚝唵蔚募庸?。本文以野生石參為材料，對其所含多糖進行了測定，然后對石參多糖的體外抗氧化活性進行了測定，并與維生素C進行了對比，為更好地開發(fā)利用石參資源提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

石參 市售，產(chǎn)地漢中略陽;乙醇、蒽酮、硫酸、葡萄糖、鄰苯三酚、抗壞血酸、三羥基氨基甲烷(Tris)、鹽酸、鄰二氮菲、硫酸亞鐵、對氨基苯磺酸溶液、鹽酸萘乙二胺溶液 均為分析純。

TG328電子天平 上海天平儀器廠;722型可見分光光度計 上海精密科學(xué)儀器有限公司;101型電熱鼓風(fēng)干燥箱 北京科偉永興儀器有限公司;恒溫水浴鍋，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，真空泵。

1.2 實驗方法

精確稱取8.2g預(yù)處理過的石參粉末，加入蒸餾水，煮沸2h，過濾，濾液80℃下減壓濃縮至一定體積，然后加入四倍體積的95%乙醇，4℃靜置過夜，離心20min，收集沉淀。然后再用少量蒸餾水溶解，離心，除去不溶物，上清液干燥后稱重。蒽酮－硫酸法［3］測多糖的含量。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:取0.1g/L葡萄糖溶液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL，用蒸餾水補到2.00mL，然后分別加入4.00mL蒽酮試劑，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加蓋玻璃球，以防蒸發(fā)，自水浴重新計算起，準(zhǔn)確煮沸10min取出，用蒸餾水冷卻，室溫放置10min左右，于620nm下比色。以蒸餾水為空白，以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(如圖1所示)。

1.4 抗氧化活性的測定

1.4.1 對超氧自由基(O－2·)的清除作用 采用鄰苯三酚自氧化法［4－6］。取0.05mol·L－1，pH8.2的Tris－HCl緩沖液4.5mL加入盛有4.2mL蒸餾水的試管中，置于25℃水浴中預(yù)熱20min。分別加入不同的試樣水提物溶液0.1mL，立即加入在25℃水浴中預(yù)熱的3mmol·L－1鄰苯三酚(由10mmol·L－1HCl配制)0.3mL，混勻后25℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)4min，立即加入8mol·L－1HCl 2滴終止反應(yīng)，在420nm處測定吸光度(樣品管以同濃度的試樣水提物溶液做參比)。模型組以0.1mL蒸餾水代替樣品試液(以蒸餾水做參比)。用抗壞血酸(VC)做對照，臨用前以濃度為50mmol·L－1的Tris－HCl緩沖液(pH8.0)配制。超氧自由基(O－2·)按以下公式計算清除率。

1.4.2 對羥基自由基(·OH)的清除作用 用鄰二氮菲－Fe2+氧化法［7－8］測定 Fe2+/H2O2體系中產(chǎn)生的羥基自由基。依次加入鄰二氮菲1.5mL，pH7.4的PBS溶液3.8mL及試樣總黃酮溶液1mL(損傷管及未損傷管不加試樣多糖溶液)混勻，再加 FeSO4溶液1.5mL，立即混勻，最后加 H2O21mL(未損傷管不加)。最終濃度鄰二氮菲 0.75mmol·L－1、FeSO40.75mmol·L－1、H2O20.01%，總體積9mL(不足用蒸餾水補足)。各管置于37℃恒溫水浴箱保溫60min，分別測定各管A536值(樣品管以同濃度的試樣水提物溶液做參比，損傷管及未損傷管以蒸餾水做參比)。用抗壞血酸(VC)做對照，臨用前以蒸餾水配制。羥基自由基按以下公式計算清除率。

1.4.3 對亞硝酸鹽的清除作用［9］取已知濃度的提取液2mL于25mL容量瓶，加入5μg/mL的NaNO2標(biāo)準(zhǔn)溶液3mL，加入檸檬酸－磷酸緩沖溶液(pH3.0)5mL，37℃下反應(yīng)15min，立即加入2mL 0.4%對氨基苯磺酸溶液，混勻，靜置3～5min后，加入1mL 0.2%鹽酸萘乙二胺溶液，加蒸餾水至刻度，混勻，靜置15min，以5mL提取液為空白，在544nm處測吸光度。用抗壞血酸(VC)做對照。按下式計算的清除率。式中的溶液吸光度;A－樣品的吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 石參多糖含量的測定

繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，由圖1得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程:Y=37.357X+0.0348(R=0.9975)，將測定的吸光度值代入回歸方程，得到石參中粗多糖濃度，再計算求得樣品中多糖的含量為14.93%。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 抗氧化性的研究

圖2 石參多糖對超氧自由基(·)的清除率

圖3 VC對超氧自由基(·)的清除率

2.2.2 對羥基自由基(·OH)的清除作用 根據(jù)方法1.4.2，配制五種不同濃度的樣品溶液，測定其吸光度，并計算其對·OH的清除率，見圖4。以抗壞血酸為對照，同法測定其吸光度，并計算其對·OH的清除率，見圖5。

圖4 石參多糖對羥基自由基(·OH)的清除率

2.2.3 對亞硝酸鹽(NO2－)清除作用 根據(jù)方法

1.4.3 ，配制五種不同濃度的樣品溶液，測定其吸光度，并計算其對NO的清除率，見圖6。以抗壞血酸為對照，同法測定其吸光度，并計算其對NO的清除率，見圖7。

圖5 VC對羥基自由基(·OH)的清除率

圖6 石參多糖對亞硝酸鹽(NO－2)清除率

圖7 VC對亞硝酸鹽(NO－2)清除率

測得石參中多糖含量為14.93%;石參多糖濃度為3.760g/L時，對超氧自由基(O·)的清除率為29.87%;石參多糖濃度為0.3040g/L時，對羥基自由基(·OH)的清除率為39.61%;石參多糖濃度為0.1640g/L時，亞硝酸鹽的清除率為37.56%。

3 結(jié)論

通過對石參多糖清除自由基能力的測定，確定其具有較強的清除超氧自由基(O·)、羥基自由基(·OH)及亞硝酸鹽(NO)的能力，可將其作為抗氧化劑應(yīng)用到食品和藥品行業(yè)中，這也將為進一步地促進天然抗氧化劑的研究與開發(fā)提供一定的理論依據(jù)。

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Determination of polysaccharide in Eremurus chinensis and its antioxidition activity

GUO Yu－mei
(School of Chemistry＆Environmental Sciences，Shaanxi University of Technology，Hanzhong 723001，China)

The aim was to determine polysaccharide in Eremurus chinens and study its antioxidant.The polysaccharide in Eremurus chinens were obtained by extraction，ethanol precipitation，removing protein by the ultrasonic method.It was demonstrated that the content of polysaccharide was 14.93%by spectrophotometer.The antioxidant activities of polysaccharide were studied.With the increasing of polysaccharide，the removal effect on free radical and nitrite became increasingly obvious.

Eremurus chinensis;polysaccharide;antioxidant activity

TS201.1

A

1002－0306(2011)06－0093－03

2010－04－07

郭豫梅(1975－)，女，研究生，講師，主要從事綜合化學(xué)實驗教學(xué)和研究工作。

陜西理工學(xué)院專項科研基金項目(SLGQD0711)。