田秀娟,宋晶淼,曹 璐,冷維春,劉俊寶
(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院婦產(chǎn)科,吉林長春130033)
KAI1基因是1995年Dong等[1]發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因,KAI1基因是四次跨膜超家族TM4SF(Transmembrance 4 Superfamily)成員之一,參與細(xì)胞增殖、粘附和運(yùn)動調(diào)節(jié)[2],KAI1基因表達(dá)缺失和人類許多上皮細(xì)胞惡化、侵襲、轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)[3,4]?,F(xiàn)已在多種惡性腫瘤如乳腺癌、胰腺、結(jié)直腸癌、肝癌、肺癌、食管癌等癌組織及其轉(zhuǎn)移灶中均證實(shí)了伴有KAI1基因表達(dá)的下降或缺失。本研究檢測KAI1在宮頸鱗癌中的表達(dá)及其臨床意義。
選取大慶龍南醫(yī)院2009年1月-2010年10月間婦科門診宮頸錐切術(shù)后10例正常宮頸組織、40例宮頸上皮內(nèi)瘤變組織。36例宮頸鱗癌組織為住院患者且病例病理資料完整的手術(shù)切除標(biāo)本,所有標(biāo)本術(shù)前均未放療、化療和激素治療。CINI8例,CINII15例,CINIII17例,其中36例宮頸鱗癌中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者21例,占58.3%。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者15例,占41.7%。年齡分布25歲-65歲,平均年齡45歲。宮頸癌標(biāo)本根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO,International Federation of Gynecology and Obstetrics)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期,其中Ⅰ期28例,Ⅱa期8例,細(xì)胞分化程度高-中分化19例,低分化17例。所有標(biāo)本均在新鮮取材后,用福爾馬林固定,石蠟包埋。所有切片均經(jīng)兩位病理學(xué)專家盲法認(rèn)定。
KAI1兔抗人單克隆抗體(濃縮型)購于北京博奧森生物技術(shù)有限公司,KAI1抗體工作濃度為1:100。SP免疫組化檢測試劑盒、DAB顯色液均購福州邁新生物技術(shù)有限公司。按試劑盒說明書嚴(yán)格操作,以PBS代替一抗設(shè)立陰性空白對照。
KAI1表達(dá)是在細(xì)胞膜和(或)漿內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性標(biāo)準(zhǔn),每例鏡下隨機(jī)觀察10個高倍視野(×200),進(jìn)行雙盲半定量積分判斷結(jié)果[5]。根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行評分:陽性細(xì)胞百分率≤10%為1分;11%≤陽性細(xì)胞百分率≤50%為2分;51%≤陽性細(xì)胞百分率≤75%為3分;陽性細(xì)胞百分率≥75%為4分。細(xì)胞染色強(qiáng)度分4個等級,無色為0分;弱陽性(淡黃色)為 1分;中度陽性(棕黃色)為2分;強(qiáng)陽性(棕褐色)為3分。通過對細(xì)胞著色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞百分率結(jié)果進(jìn)行分析,兩者評分相加,結(jié)果≥3分為陽性,<3分判為陰性。
顯著性檢驗(yàn)采用 χ2檢驗(yàn),當(dāng)T<1或 n<40采用精確概率法,求 P值。所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計都在SPSS17.0軟件上進(jìn)行。
KAI1蛋白陽性顆粒呈棕黃色,主要在細(xì)胞漿或細(xì)胞膜中表達(dá),(見圖1-圖3),在正常宮頸組織、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ和宮頸癌鱗組織中,KAI1陽性表達(dá)率呈遞減趨勢。依次為100%、87.5%、73.3%、63.1%、19.4%。正常宮頸組與宮頸鱗癌組比較有統(tǒng)計學(xué)意義,P<0.05(χ2=21.79,P=0.000)。CIN組與宮頸鱗癌比較有統(tǒng)計學(xué)意義,P<0.05(CINI與宮頸鱗癌比較 χ2=13.97,P=0.001;CINⅡ與宮頸鱗癌比較 χ2=13.46,P=0.000;CINⅢ與宮頸鱗癌比較 χ2=13.13,P=0.000)。正常宮頸組與CIN組比較無統(tǒng)計學(xué)意義P>0.05(正常宮頸組與CINI比較P=0.444;正常宮頸組與CINII比較P=0.108;正常宮頸組與CINⅢ比較P=0.77)。CIN組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義P>0.05(CINI與CINⅡ比較P=0.414;CINⅠ與CINⅢ比較P=0.349;CINⅡ與CINⅢ比較P=0.589),見表 1。
表1 KAI1蛋白在不同卵巢組織中的表達(dá)
圖1 KAI1在正常宮頸組織中的陽性表達(dá)(SP×200)
圖2 KAI1宮頸 CINII中弱陽性表達(dá)(SP×200)
圖3 KAI1在宮頸鱗癌中陰性表達(dá)(SP×100)
KAI1在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌組織中的陽性表達(dá)率為40%(6/15),在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌組織中的陽性表達(dá)率則降低至4.8%(1/21),兩組表達(dá)之間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。KAI1在細(xì)胞高-中分化組中的陽性表達(dá)率為36.8%(7/19),在細(xì)胞低分化組無陽性表達(dá)(0/17),兩組表達(dá)之間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。KAI1在宮頸鱗癌中的表達(dá)與細(xì)胞分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),而與組織浸潤深度、臨床分期、年齡、癌灶大小無關(guān),(P>0.05)見表2。
表2 KAI1在不同臨床病理特征宮頸癌中的表達(dá)
宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤,占女性癌的第二位。嚴(yán)重威脅著婦女的健康和生命。我國每年新發(fā)病例13.15萬,約占世界宮頸癌新發(fā)病例的28.8%,宮頸癌我國發(fā)病年齡以40-50最多,60-70又一個高峰。20歲以下少見。隨著近些年宮頸癌早期篩查的開展。使宮頸癌的發(fā)病率及死亡率有所降低。但仍存在很多病例,早期診斷時繼已經(jīng)出現(xiàn)侵襲和轉(zhuǎn)移。浸襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的生物學(xué)特征,是影響腫瘤治療及復(fù)發(fā)的主要因素,也是導(dǎo)致病人死亡的主要原因,而侵襲和轉(zhuǎn)移又是一個多因素參與的極其復(fù)雜的病理過程。因此探尋宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制,早期判斷宮頸癌轉(zhuǎn)移在指導(dǎo)治療及預(yù)后判斷中有重要意義。
自從KAI1作為一個新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因被發(fā)現(xiàn)以來,它抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制就成為人們研究的重點(diǎn)。Schindl等[16]研究了KAI1在宮頸癌中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示CINI級KAI1高表達(dá),CINII級CINIII級45%表達(dá)下調(diào),而在浸潤性宮頸鱗癌組織中KAI1表達(dá)29.3%強(qiáng)陽性,56%表達(dá)下調(diào),14.7%不表達(dá)。認(rèn)為KAI1表達(dá)下調(diào)是宮頸癌早期發(fā)生事件。Zhang等[7]采用PT-PCR技術(shù)檢測宮頸癌織KAI1的表達(dá),結(jié)果表明在宮頸鱗癌組織中KAI1表達(dá)減少,其表達(dá)與細(xì)胞分化及轉(zhuǎn)移有關(guān),提示KAI1參與了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展,可能在一定程度上具有預(yù)測宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移的潛能。Liu等[6]對宮頸癌KAI1表達(dá)與其分化的關(guān)系結(jié)果顯示,低分化的宮頸癌更易發(fā)生轉(zhuǎn)移。在王國慶[9]的研究中強(qiáng)調(diào)KAI1低表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。
本組研究結(jié)果顯示,在正常宮頸、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸鱗癌中,KAI1陽性表達(dá)率呈遞減趨勢。統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)表明KAI1在宮頸鱗癌中的表達(dá)率明顯低于正常組織和CIN組,這一研究結(jié)果與Schindl等[6]、Zhang等[7]結(jié)果一致,提示宮頸癌發(fā)生的過程伴隨著KAI1表達(dá)的下降。本組研究結(jié)果還顯示,KAI1在正常宮頸組及CIN組的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義,并且與CIN分級無關(guān)。提示KAI1可能在細(xì)胞惡變早期的作用小于惡變晚期。這一結(jié)果與耿曉星等[10]研究結(jié)果一致。
關(guān)于KAI1表達(dá)和惡性腫瘤臨床病理特性之間的關(guān)系,多數(shù)研究表明KAI1表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、組織浸潤深度、細(xì)胞分化程度、臨床分期、預(yù)后之間有顯著性相關(guān),而與年齡、腫瘤大小、浸潤方式之間無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)[11,12]。本組研究顯示,KAI1在宮頸鱗癌中的表達(dá)與細(xì)胞分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)而與臨床分期、浸潤深度、癌灶大小、年齡等無關(guān)。為了研究KAI1在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌組織中表達(dá)的差異,我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測了36例宮頸鱗癌組織中KAI1的表達(dá)。結(jié)果表明,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌組織中KAI1的表達(dá)率顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌,提示宮頸鱗癌在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的過程中伴隨著KAI1蛋白表達(dá)水平的下降,與這一結(jié)果與王國慶[9]束曉明[13]在宮頸癌中研究的一致。說明宮頸鱗癌中KAI1表達(dá)下調(diào)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),可用來預(yù)測淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移狀況。本組研究還顯示,KAI1在宮頸鱗癌的低分化組陽性表達(dá)明顯低于高-中分化組,提示KAI1與細(xì)胞分化有關(guān),隨著分化程度降低,KAI1陽性表達(dá)減少或消失。這一結(jié)果與Zhang等[7]Liu等[8]研究一致。由此可見KAI1的低表達(dá)與宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān),其低表達(dá)可能預(yù)示著該腫瘤更具有侵襲性,預(yù)后差,并可作為判斷宮頸鱗癌的惡變程度指標(biāo)之一。
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