甲狀腺顯像患者的淋巴細胞中誘導放射性適應反應研究

李明浩

（延邊大學附屬醫(yī)院核醫(yī)學科，吉林 延吉 133000）

初始小劑量（＜20cGy）照射的人體淋巴細胞，在隨后大劑量照射時其染色體的損傷比未曾經(jīng)小劑量照射的人體淋巴細胞少。這個現(xiàn)象是適應反應的主要表現(xiàn)。適應反應主要是因[3H]thymidine[1-9]X-射線[3-9]或γ-射線[10]而誘導。Olivieri等[1]報道被小劑量[3H]thymidine照射過的人體淋巴細胞，當在受到大劑量照射時其染色體的損傷相對較少，Wang等[4]在末梢血進行20cGyX-射線后誘導了適應反應，隨后雖然大劑量3Gy照射，其染色體的損傷相對較少。Tc-99m是核醫(yī)學最常使用的甲狀腺顯像劑，常用劑量是5mCi這個程度的小劑量能否誘導適應反應，國內(nèi)尚無詳細的報道。研究中在甲狀腺顯像患者在注射Tc-99m前后各，采血后進行大劑量照射，通過細胞分裂中期染色體分析方法，查出異常染色體數(shù)目，進而判斷在做骨顯像的患者中適應反應的誘導。

1 對象與方法

1.1 對 象

21例甲狀腺顯像患者，男8例，女13例；平均年齡（45±14）歲；在注射甲狀腺顯像顯像劑Tc-99m前后各，采血5mL進行培養(yǎng)。本研究是經(jīng)過患者同意后才采血的，注射Tc-99m的劑量是5mCi。作為對照組選擇了沒有伴染色體異常的遺傳病病史的健康成年人10例，男6例，女4例，平均年齡（43±7）歲。對照組，患者組分注射Tc-99m前采血組和注射Tc-99m后采血組，每組再分為放射性照射2Gy組和未照射組，分別查出異常染色體數(shù)目后做了比較分析。

1.2 培養(yǎng)及放射性照射

RPMI1640培養(yǎng)基6mL加15%小?；蛱ヅＱ?mL，青霉素、100unite/mL鏈霉素、100μg/mL和3%植物血球凝集素（PHA）溶液0.2mL（100μg/mL），然后再加0.5mL血后放置在37℃，5%CO2培養(yǎng)箱。

進行大劑量照射是在培養(yǎng)到第46h用Cs-137照射儀（central dose rate=654Gy/h，Gamamacell 3000 Elan，Nordion，Canada）進行2Gy照射。注射Tc-99m-MIBI后采血組中取一部分是在培養(yǎng)到第44h先加蛋白合成抑制劑cycloheximide10μg/mL培養(yǎng)，洗滌2次后在進行2Gy照射。

培養(yǎng)到第46h加20μg/mL秋水仙素溶液0.2mL使細胞停止在分裂相中期，獲得染色體中期分裂組相將收集的細胞經(jīng)過0.075mol氯化鉀溶液低滲處理、用固定液[甲醇：冰醋酸=3∶1]固定、滴片，然后斜放靜置，待其自然干燥再經(jīng)過Giemsa stain solution溶液染色，最后進行鏡檢分析。

顯微鏡檢查及計：染色體的標本在鏡下100倍的倍率尋找核分裂中期細胞，放大到1000倍確認每個細胞都含有46個染色體后才觀察.異常染色體主要觀察了環(huán)狀（rings）（R）有雙中心的（dicentric）（D）染色體數(shù)計數(shù)的總?cè)旧w中異常染色體的比率命為異常染色體出現(xiàn)頻率（Ydr）=（D+R）/total scored cells。

1.3 資料處理

用SPSS 10.0統(tǒng)計學軟件對資料進行統(tǒng)計學處理，用t檢驗比較組織間差異，數(shù)據(jù)均以±s均數(shù)±標準偏差表示。

2 結(jié) 果

對照組和患者組未經(jīng)放射性照射時異常染色體出現(xiàn)頻率各為（0.05±0.02）和（0.06±0.04），二者無顯著性差異（t=1.2，P＞0.05）。而注射Tc-99m 4h后查異常染色體出現(xiàn)頻率為（0.07±0.03），與未經(jīng)Tc-99m-MIBI注射者相比無明顯增加（t=1.2，P＞0.05）（表1）。

?

對照組和患者組單純放射性照射2Gy時異常染色體出現(xiàn)頻率各為（0.19±0.04）和（0.18±0.03），二者無顯著性差異（t=1.4，P＞0.05）（表2）。

?

Tc-99m-MIBI注射后放射性照射2Gy時異常染色體出現(xiàn)頻率為（0.15±0.03），比單純放射性照射2Gy時（0.18±0.03）明顯減少（t=3.5，P＜0.01）（表2）。

Tc-99m注射后加蛋白合成抑制劑cycloheximide 10μg/mL培養(yǎng)進行2Gy照射時異常染色體出現(xiàn)頻率為（0.19±0.02），明顯高于未加cycloheximide時的（0.15±0.03）（t=5.1，P＜0.001），與Tc-99m注射前單純放射性照射2Gy時（0.18±0.03）者相比無明顯差異（t=1.5，P＞0.05）（表2）。

3 討 論

甲狀腺顯像作為核醫(yī)學科最常用的檢查方法之一，為臨床醫(yī)師提供重要的情報。在本研究中探討了甲狀腺顯像使用的顯像劑Tc-99m所放射的射線，對人體淋巴細胞帶來損害還是誘導適應反應產(chǎn)生有益的反應。利用做甲狀腺顯像患者的淋巴細胞，比較其檢查前后，及大劑量照射前后的異常染色體數(shù)，來判斷誘導放射性適應反應與否。結(jié)果Tc-99mI注射后放射性照射2Gy的異常染色體數(shù)較Tc-99m注射前放射性照射2Gy時明顯減少，提示已誘導了適應反應，并且得到了誘導適應性反應過程有蛋白質(zhì)參與的事實。也就是說，做甲狀腺顯像的患者沒有受到因注射放射性藥物引起的障礙反而誘導適應反應對將來的放射性障礙產(chǎn)生抵抗力量。在人體淋巴細胞低劑量放射線能誘導適應反應的事實起初是在1984年Olivieri等[1]報道被小劑量[3H]thymidine照射過的人體淋巴細胞，當在受到150cGy的X線照射時其染色體的損傷較單純被150cGy的X線照射時其染色體的損傷相對較少。Shadley和Wolff等[9]也報道與單純被150cGy的X線照射時時相比先經(jīng)0.5～1cGy照射后再受到150cGy的X線照射時人體淋巴細胞染色體的損傷相對較少。

小劑量照射過的人體淋巴細胞，在隨后大劑量照射時其染色體的損傷比未曾經(jīng)小劑量照射的人體淋巴細胞少這種個現(xiàn)象是適應反應的主要表現(xiàn)。它是因誘導修補蛋白或防御蛋白而產(chǎn)生。Youngblom等[6]先照射1cGy X線照射后再行150cGy的X線照射確認適應反應的產(chǎn)生后使用蛋白合成抑制劑cycloheximide觀察了適應反應的變化。結(jié)果小劑量照射后經(jīng)過4～6h后再加cycloheximide不在產(chǎn)生適應反應了。也就是說在誘導適應反應的過程中有蛋白質(zhì)參與，而這種蛋白質(zhì)是在被小劑量照射后經(jīng)過一定小時間隔后誘導。Cai等[8]報道在小劑量照射6h后再加cycloheximide結(jié)果，遇到大劑量照射時沒有誘導適應反應。Shadley等[3]因為小劑量照射后4～6h之間產(chǎn)生DNA修補反應，所以小劑量照射4h后才能誘導適應反應。Ikushima等[11]報道小劑量照射后4h以前不能誘導適應反應。本研究中注射Tc-99m-MIBI后第46h進行了放射性照射2Gy，這為誘導適應反應提供了充分的時間，這也與適應反應維持三個細胞周期的Shanley等[9]的報道相符。

Shadley等[5]報道誘導適應反應X線照射的初始劑量要超高0.005Gy，其范圍是0.005～0.2Gy而在本研究中初始劑量的范圍小于此范圍。但在本研究的初始劑量的照射方法是內(nèi)照射，不能與初始劑量的照射方法是外照射時的誘導適應反應范圍一致。Bai等[12]報道90Co γ-線0.005Gy一次照射不能誘導適應反應，但對同樣的細胞進行0.005Gy兩次照射時就能誘導適應反應，也就是說小劑量多次照射放射性累積產(chǎn)生適應反應，那么內(nèi)照射時如本研究小劑量多次照射放射性累積可不能誘導適應反應是值得探討的課題。初始小劑量照射而誘導適應反應的內(nèi)容很多，但放射性核素顯像后可否誘導適應，幾乎沒有報道。通過本研究我們了解到放射性核素甲狀腺顯像不僅不給患者帶來放射性障礙反而誘導適應反應。進一步探討上述效應的發(fā)生機制及其生物學意義將對輻射防護的理論和實踐具有重要的價值。

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