培養(yǎng)料對姬松茸子實體多糖含量及抗氧化性的影響

李斌斌 ，李 慧 ，郭 珺 ，王 琪 ，韓建榮

（1.山西大學生物技術研究所，山西太原030006；2.山西省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)環(huán)境與資源研究所，山西太原030006；3.山西大學生命科學學院，山西太原030006）

姬松茸（Agaricus blazei Murill）又名巴西蘑菇，屬傘菌目蘑菇科蘑菇屬，原產(chǎn)于美國佛羅里達州海邊草地、加利福尼亞州南部和巴西、秘魯?shù)葒鳾1]。姬松茸是一種藥食兼用的珍稀食用菌，其調(diào)節(jié)免疫力、抗腫瘤等藥用功效來源于其含有的多種生理活性物質(zhì)，如多糖、糖蛋白、核酸、甾醇類物質(zhì)等。姬松茸多糖和多糖蛋白復合體是目前研究的重點[2]。

蘑菇長期以來受到人們喜愛的原因是其特有的風味和質(zhì)地，而今已被認為是高營養(yǎng)食物和重要的藥用生物活性物質(zhì)來源，其在生長過程中積累了酚類化合物、聚酮化合物、萜烯烴和類固醇等多種次級代謝產(chǎn)物。有研究發(fā)現(xiàn)，蘑菇酚類化合物是優(yōu)越的抗氧化劑和抗氧化增效劑[3]。但目前尚未見關于培養(yǎng)料對姬松茸多糖含量及抗氧化性影響方面的研究報道。

山西是世界最大的蘆筍產(chǎn)區(qū)[4]，食醋行業(yè)每年生產(chǎn)產(chǎn)生的醋糟達300萬t左右[5]，因此，山西具有豐富的蘆筍老莖和醋糟資源。本試驗對用蘆筍老莖、醋糟等栽培料栽培得到的姬松茸子實體多糖含量和抗氧化性進行了比較分析，旨在為蘆筍老莖、醋糟等栽培料的配方篩選和優(yōu)化提供依據(jù)，促進姬松茸在山西的發(fā)展，亦可為姬松茸多糖和抗氧化劑產(chǎn)品的開發(fā)奠定一定的基礎。

1 材料和方法

1.1 菌種

姬松茸（Agaricus blazei Murill）BJ菌株來自上海市農(nóng)業(yè)科學院食用菌研究所。

1.2 栽培原料

選用4種配方栽培料栽培姬松茸，即配方1：主料醋糟，輔料棉籽殼；配方2：主料醋糟，輔料豆秸；配方3：主料醋糟，輔料玉米秸稈；配方4：主料蘆筍老莖，輔料棉籽殼。4種配方栽培料均按常規(guī)方法堆制處理。

1.3 試劑

β-胡蘿卜素和 1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）由Sigma公司生產(chǎn)；2，6-叔丁基-4-甲基酚（BHT）由英國的Avocado research chemicals公司生產(chǎn)；其他化學試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.4 樣品處理

在配方1～4栽培料上得到的子實體樣品編號為樣品1～4。將姬松茸子實體樣品60℃烘干至恒質(zhì)量，然后粉碎過0.250 mm篩，得到姬松茸子實體干粉，放于密封瓶中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 粗多糖的提取

粗多糖參照文獻[6]進行提取。

1.6 多糖含量的測定

用苯酚-硫酸法測定姬松茸總糖含量，DNS比色法[7]測定姬松茸還原糖含量。

多糖含量=總糖含量－還原糖含量

1.7 抗氧化性物質(zhì)的提取

準確稱取5 g姬松茸子實體干粉，分別加入100 mL80%的乙醇，在室溫（25℃左右）130 r/min的搖床上提取24 h，用濾紙過濾，取濾液，濾渣再進行復提，然后合并2次濾液；濾渣烘干后稱其質(zhì)量，濾液在40℃下旋轉蒸發(fā)濃縮，得濃縮液，然后稀釋定容待測。

1.8 抗氧化性測定

1.8.1 DPPH自由基的清除測定 按文獻 [8]進行測定：200 μL樣品液中加入 3.8 mL DPPH（0.08 mmol/L），充分搖勻后在室溫下避光放置24 h，在517 nm處測吸光值。用提取溶劑代替樣品液作為對照。EC50根據(jù)DPPH清除作用和樣品液濃度圖來計算，BHT作為標準。

1.8.2 還原能力測定 還原能力采用普魯士藍法測定[9-10]。

1.8.3 脂質(zhì)過氧化（LPO）抑制分析 LPO采用β-胡蘿卜素-亞油酸體系進行分析[11]。

2 結果與分析

2.1 不同配方培養(yǎng)料對姬松茸子實體多糖含量的影響

從表1可以看出，栽培原料對姬松茸的多糖含量有一定的影響。用醋糟為主料（樣品1～3）栽培得到的姬松茸子實體的多糖含量明顯高于用蘆筍老莖為主料（樣品4）栽培得到的姬松茸子實體的多糖含量。在主料同為醋糟的情況下，比較豆秸、棉籽殼和玉米秸稈3種輔料，豆秸更有利于子實體多糖的合成。

表1 不同培養(yǎng)料的姬松茸子實體多糖含量比較（n=3）

2.2 不同配方培養(yǎng)料對姬松茸子實體抗氧化性的影響

2.2.1 DPPH的清除測定結果 DPPH是一種穩(wěn)定的以氮為中心的質(zhì)子自由基，其乙醇溶液呈紫色，在517 nm處有強烈吸收。在有自由基清除劑存在時，自由基清除劑提供一個電子與DPPH的孤對電子配對，使其褪色，在517 nm處的吸光度變小，即自由基清除劑的清除能力越強，吸光度越小。

由圖1可知，在4種不同配方栽培料上得到的姬松茸子實體樣品的乙醇提取物對DPPH都具有一定的清除能力。在提取物濃度為3 mg/mL時，樣品1～4對DPPH清除率分別為72.5%，51.0%，59.7%和84.0%。由此可以得出，用蘆筍老莖為主料栽培得到的姬松茸子實體（樣品4）的乙醇提取物對DPPH清除能力明顯高于用醋糟為主料栽培得到的姬松茸子實體（樣品1～3）的乙醇提取物。在主料同為醋糟的情況下，3種輔料豆秸、棉籽殼和玉米秸稈栽培得到的姬松茸子實體的乙醇提取物對DPPH清除能力有較大的影響，棉籽殼更有利于提高子實體的乙醇提取物對DPPH的清除能力。

2.2.2 還原能力測定結果 還原劑的存在會使Fe3+和鐵氰化物復合物轉化為亞鐵形式的化合物，從而使黃色的溶液變成各種不同程度的綠色和藍色溶液。通過在700 nm處測定普魯士藍的吸光度可以測定亞鐵離子的濃度。在圖2中，各樣品乙醇提取物濃度與其還原能力呈良好的線性關系，隨著提取物濃度的增加，還原能力逐漸增強。用蘆筍老莖為主料栽培得到的姬松茸子實體（樣品4）的還原能力明顯高于用醋糟為主料栽培得到的姬松茸子實體（樣品1～3）。在主料同為醋糟的情況下，3種輔料豆秸、棉籽殼和玉米秸稈對子實體的乙醇提取物的還原能力有較大的影響，棉籽殼更有利于提高子實體的還原能力。

2.2.3 LPO抑制分析結果 依靠β-胡蘿卜素-亞油酸體系的漂白作用可以測定該蘑菇提取物的抗氧化能力。不同抗氧化劑的存在可以中和在系統(tǒng)中形成的亞油酸自由基和其他自由基，以阻礙β-胡蘿卜素的褪色，使顏色維持很長時間。本試驗4個樣品的乙醇提取物都具有一定的LPO抑制作用（圖3），但各樣品間的抑制作用差別不大。以豆秸為輔料栽培得到的子實體（樣品2）的LPO抑制能力較弱。

2.2.4 EC50值比較 EC50值是指LPO抑制率達到50%、吸光值0.5時的還原力和DPPH清除率達到50%時提取液的有效濃度，EC50值越小，表明抗氧化能力越強。綜合抗氧化性的3個指標可以看出（表2），用蘆筍老莖為主料栽培得到的姬松茸子實體（樣品4）的抗氧化性最強，4個樣品的抗氧化性強弱排序為樣品4＞樣品1＞樣品3＞樣品2。

表2 姬松茸子實體乙醇提取物EC50值比較

3 結論與討論

多糖的測定方法很多，本試驗運用堿提法提取姬松茸多糖，用苯酚-硫酸法測定其多糖含量，簡便、快速、靈敏、重復性好，對每種糖僅制作一條標準曲線，顏色持久。本試驗在精密度和準確度上也取得了令人滿意的效果，對今后的姬松茸多糖提取測定具有一定的參考價值。

本試驗用稀堿提取測得的多糖含量比文獻[12]熱水提取的多糖含量3.62%和2.07%高出不少。

姬松茸子實體80%乙醇提取物對于DPPH有機自由基有很好的清除作用，對β-胡蘿卜素-亞油酸氧化體系也有較好的抑制作用，有很高的還原力以及亞鐵離子螯合能力，表明其在抗衰老、抗炎癥等方面有一定作用，可進一步開發(fā)天然抗氧化劑來代替化學合成抗氧化劑。

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