痛寧膠囊對硝酸甘油型偏頭痛大鼠血漿NO和5－HT濃度的影響1）

付秋菊，楊德功，黃厚才，王志國，姚盛名，朱婉華，田耀洲

偏頭痛是由于發(fā)作性血管舒縮功能障礙以及某些物質(zhì)暫時(shí)性改變所致的一種伴有腦及自主神經(jīng)系統(tǒng)功能暫時(shí)性障礙的頭痛[1]。世界衛(wèi)生組織指出嚴(yán)重的偏頭痛將與癱瘓一同位居人類疾病致殘率之首，但其發(fā)病機(jī)制仍不明確，存在多種學(xué)說，其中血管學(xué)說、神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)說仍是各國學(xué)者比較公認(rèn)的學(xué)說。研究表明[2]，一氧化氮（NO）可引發(fā)神經(jīng)源性炎癥，激活傷害感覺神經(jīng)元的敏感性，介導(dǎo)機(jī)體內(nèi)痛覺信號的傳導(dǎo)，從而放大其生物學(xué)作用，致使痛覺的發(fā)生[3]。另外在偏頭痛患者中存在一系列的生化改變，在已進(jìn)行的所有偏頭痛生化研究中，5－羥色胺（5－HT）含量變化最恒定，并具有相對特異性，是公認(rèn)的在偏頭痛發(fā)病中起重要作用的神經(jīng)遞質(zhì)。

為闡明痛寧膠囊治療偏頭痛的作用機(jī)制，以硝酸甘油型偏頭痛大鼠為研究對象，以血漿NO和5－HT濃度變化為偏頭痛發(fā)作時(shí)的觀察指標(biāo)，研究痛寧膠囊對上述指標(biāo)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物與分組 SD大鼠60只，上海西普爾－必凱實(shí)驗(yàn)動物有限公司，許可證號：SCXK（滬）：2008－0016，雌雄各半，體重283g±23g。隨機(jī)分為空白對照組及偏頭痛模型對照組、陽性藥物對照組及痛寧膠囊藥液高、中、低劑量組，每組8只。

1.1.2 主要藥物、試劑及儀器 痛寧膠囊，南通良春風(fēng)濕病醫(yī)院院內(nèi)制劑，批準(zhǔn)文號：蘇藥制字Z04001376；產(chǎn)品批號：091208。硝酸甘油注射液，5mg／mL，北京益民藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字 H11020289，生產(chǎn)批號：20100911；琥珀酸舒馬普坦片，天津華津制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20040700，生產(chǎn)批號：006909T，用蒸餾水配制成濃度為1 mg／mL的舒馬普坦藥液備用；NO試劑盒，南京建成生物工程研究所，生產(chǎn)批號：20100726；大鼠5－HT試劑盒，上海江萊生物科技有限公司，LOT：10－05；分光光度計(jì)721；全自動酶免分析儀等。

1.2 方法

1.2.1 偏頭痛模型建立及藥物干預(yù) 根據(jù)Cristina等[4]方法，除空白對照組不作處理，其余各組動物予以大鼠皮下注射硝酸甘油10mL／kg，制作偏頭痛模型。30min后按組灌胃給藥?？瞻讓φ战M和模型對照組灌胃等容積的蒸餾水，陽性藥物對照組灌胃琥珀酸舒馬普坦藥液6mL／kg，研究藥物組痛寧膠囊藥液高、中、低劑量組分別以8.64g／kg、4.32g／kg、2.16g／kg灌胃。1.2.2 NO、5－HT檢測 大鼠造模后4h，予以用10%水合氯醛300mg／kg腹腔麻醉動物，腹主動脈采血約4mL加入肝素鋰的真空采血管中，混勻后3 000r／min離心10min，分離血漿，提取上清，于－20℃保存樣品。NO以硝酸還原酶法測定其濃度。5－HT采用ELISA法測定。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠血漿NO濃度比較（見表1） 模型對照組大鼠血漿NO濃度較空白對照組顯著升高（P＜0.01）。陽性藥物對照組，痛寧膠囊高、中劑量組均能顯著降低血漿NO濃度，與模型對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。痛寧膠囊高劑量組與陽性藥物對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 痛寧膠囊對硝酸甘油型偏頭痛大鼠NO的影響（±s）

表1 痛寧膠囊對硝酸甘油型偏頭痛大鼠NO的影響（±s）

組別 動物（只） 劑量 NO（μmol／L）空白對照組 8 等容積蒸餾水119.38±4.71模型對照組 8 等容積蒸餾水 153.24±9.761）陽性藥物對照組 8 6mL／kg 135.87±7.862）痛寧膠囊高劑量組 8 8.64g／kg 137.20±12.472）痛寧膠囊中劑量組 8 4.32g／kg 142.10±8.992）痛寧膠囊低劑量組 8 2.16g／kg 154.58±14.14與空白對照組比較，1）P＜0.01；與模型對照組比較，2）P＜0.05

2.2 各組大鼠血漿5－HT濃度比較（見表2） 與空白對照組比較，模型對照組大鼠血漿5－HT濃度顯著降低（P＜0.01）。與模型對照組比較，陽性藥物對照組，痛寧膠囊高劑量能顯著升高血漿5－HT濃度（P＜0.05）。痛寧膠囊高劑量組與陽性藥物對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，高劑量痛寧膠囊與舒馬普坦升高血漿5－HT濃度作用強(qiáng)度相當(dāng)。

表2 痛寧膠囊對硝酸甘油偏頭痛大鼠5－HT濃度的影響（±s）

表2 痛寧膠囊對硝酸甘油偏頭痛大鼠5－HT濃度的影響（±s）

組別 動物（只） 劑量 5－HT（ng／mL）空白對照組 8 等容積蒸餾水83.6±2.5模型對照組 8 等容積蒸餾水 39.4±1.71）陽性藥物對照組 8 6mL／kg 58.7±2.02）痛寧膠囊高劑量組 8 8.64g／kg 56.3±2.42）痛寧膠囊中劑量組 8 4.32g／kg 42.0±2.0痛寧膠囊低劑量組 8 2.16g／kg 40.5±1.3與空白對照組比較，1）P＜0.01；與模型對照組比較，2）P＜0.05

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)所選造模方法簡單、經(jīng)濟(jì)、機(jī)制單一，可在短期內(nèi)復(fù)制[5]。該模型具有表面效度，能夠在活體清醒狀態(tài)下觀察大鼠的行為學(xué)特征，可用于中藥治療作用的研究[6]。

舒馬普坦作為經(jīng)典的抗偏頭痛藥物，通過激動5－HT1B／1D受體發(fā)揮其藥理作用，是目前已知具有確切作用機(jī)制的治療偏頭痛藥物[7]。

偏頭痛發(fā)作期間，發(fā)現(xiàn)全血中硝酸鹽類升高[8]，而近年來使用NOS抑制劑（L－NMMA）能夠有效治療偏頭痛、緊張型頭痛以及叢集性頭痛[9]，更加證實(shí)NO在偏頭痛和其他頭痛產(chǎn)生中是一個(gè)十分關(guān)鍵的因子[10]。如激活NO引發(fā)偏頭痛的可能機(jī)制是：通過擴(kuò)張腦及腦以外的血管，或直接作用于血管周圍感覺神經(jīng)引發(fā)頭痛[10]；調(diào)整三叉神經(jīng)元降鈣素相關(guān)基因肽（CGRP）基因的表達(dá)[11]，引起CGRP的釋放[12]；增強(qiáng)三叉神經(jīng)脊束核內(nèi)第一突觸中對有害刺激的反應(yīng)[13]；激活NO－環(huán)單磷酸鳥苷（cGMP）途徑進(jìn)一步引發(fā)瀑布反應(yīng)[9]；通過作用于核轉(zhuǎn)錄因子（NF－κB）引 AP－I的亞單位c－fos和junB的表達(dá)增加[1]，參與機(jī)體內(nèi)痛覺信號的傳導(dǎo)，提示NO誘發(fā)偏頭痛存在一系列的級聯(lián)反應(yīng)。

本實(shí)驗(yàn)中亦發(fā)現(xiàn)模型組大鼠血漿NO濃度升高，可能是硝酸甘油作為NO的前藥[9]，使得其向NO的轉(zhuǎn)化率升高[1]，通過導(dǎo)致腦膜血管擴(kuò)張、神經(jīng)源性炎癥形成及激活下丘腦、腦干及脊髓節(jié)段神經(jīng)元功能等作用，引起三叉神經(jīng)纖維的超敏性，誘發(fā)頭痛[14]。而痛寧膠囊能顯著降低硝酸甘油誘導(dǎo)的偏頭痛大鼠血漿NO的濃度，提示抑制NO的合成，或者減少其釋放，或者加速其分解代謝可能是痛寧膠囊治療偏頭痛的作用機(jī)制之一。

5－HT是一種神經(jīng)遞質(zhì)，可加重偏頭痛相關(guān)癥狀[15]。無論是有無先兆的偏頭痛患者頭痛發(fā)作期間中均發(fā)現(xiàn)，低血漿5－HT和高5－羥吲哚乙酸（5－HIAA）水平，且在腦脊液亦有5－HIAA的升高，這種水平的改變不僅是血小板功能障礙更主要是腦功能障礙的反應(yīng)[16]。應(yīng)用5－HT耗竭藥物致低5－HT狀態(tài)的大鼠皮質(zhì)擴(kuò)散抑布波增強(qiáng)，三叉神經(jīng)血管感受傷害途徑的激活[17]。應(yīng)用單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)體層成像技術(shù)亦發(fā)現(xiàn)，偏頭痛發(fā)作期間腦干5－羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（5－HTT）的升高，這種改變與突出間隙5－HT水平的下降相吻合[18]。而曲坦類選擇性抗偏頭痛藥物起作用與三叉神經(jīng)與背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元5－HT1B／1D／1F受體表達(dá)有關(guān)[19]?？蛇M(jìn)一步導(dǎo)致大腦微血管對NO反應(yīng)的敏感性增高[20]，部分5－HT漏出到血管周圍的細(xì)胞外液中，與組胺、緩激肽、血管遲緩激肽等神經(jīng)肽類物質(zhì)一起使血管壁痛閾降低，并造成動脈的“無菌性炎癥”[21]。

本實(shí)驗(yàn)就痛寧膠囊對5－HT的濃度是否有影響進(jìn)行研究，觀察到皮下注射硝酸甘油可明顯引起偏頭痛大鼠血漿5－HT濃度的顯著降低，而予以痛寧膠囊干預(yù)后，能夠顯著升高其血漿濃度，提示痛寧膠囊通過升高5－HT的濃度途徑治療偏頭痛，而具體通過何種機(jī)制升高5－HT，目前尚不清楚，有待進(jìn)一步的研究。

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