肉桂水提液對(duì)大鼠全腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

黃宏妙， 郭占京， 羅佩卓， 梁曉艷， 周麗霞

(廣西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西南寧530001)

腦缺血再灌注損傷是一個(gè)復(fù)雜的病理過(guò)程，其中自由基連鎖反應(yīng)是腦缺血再灌注損傷的核心環(huán)節(jié)［1］。通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體內(nèi)抗氧化物酶活性、清除氧自由基來(lái)減輕缺血再灌注造成的損傷已成為治療缺血性腦血管病的主要途徑。肉桂為樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥樹(shù)皮，是我國(guó)傳統(tǒng)中藥，具有補(bǔ)火助陽(yáng)、引火歸元、散寒止痛、溫通經(jīng)脈的功能［2］。大量研究表明肉桂具有很強(qiáng)的抗氧化作用，且毒副作用低，但是從目前文獻(xiàn)來(lái)看肉桂在抗氧化作用方面的研究只是體外實(shí)驗(yàn)［3-6］，對(duì)于其體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究尚很少報(bào)道。本研究考察了肉桂水提液對(duì)全腦缺血再灌注損傷后大鼠腦水腫的影響，并測(cè)定了腦組織中丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活性的變化，初步確定了肉桂對(duì)急性腦損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1．1 藥物與試劑 雙縮尿試劑、丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)活力測(cè)定試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活力測(cè)定試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品(批號(hào)20090416);肉桂藥材(板桂)購(gòu)于廣西萬(wàn)壽堂藥業(yè)有限公司(生產(chǎn)日期200812011，產(chǎn)地 廣西平南縣)，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院劉壽養(yǎng)教授鑒定為樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥樹(shù)皮。

1．2 動(dòng)物 健康SD大白鼠，雌性，體質(zhì)量(200±10)g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK(桂)2009-0002。

1．3 主要儀器 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)UV-160(日本shimadzu公司);江彎-Ⅰ型C通用立體定向器(第二軍醫(yī)大學(xué))。

1．4 肉桂水提液的制備 將干燥肉桂捶碎，分別稱取干燥碎塊150、300、600 g，用8 倍量純凈水浸泡 3 h，文火加熱煮沸30 min，濾出水煎液，繼續(xù)分別加6倍量純凈水再煮1次，合并2次水煎液，濃縮至150 mL(相當(dāng)于生藥1、2、4 g/mL)，給藥量為10 m L/kg(各劑量相當(dāng)于肉桂質(zhì)量/大鼠質(zhì)量:10、20、40 g/kg)。

1．5 動(dòng)物分組與全腦缺血再灌注模型的建立 取健康SD雌性大白鼠50只，隨機(jī)平均分5組:正常組、模型組和低劑量給藥組(10 g/kg)、中劑量給藥組(20 g/kg)和高劑量給藥組(40 g/kg)。給藥組按低、中、高各劑量肉桂水提液灌胃給藥;正常組和模型組按等量生理鹽水(水量/大鼠質(zhì)量:10 mL/kg)灌胃。灌胃1周后模型組和給藥組采用改良的Pulsineli4-血管阻斷(4-VO)方法［7］建立全腦缺血模型，正常組不做手術(shù)。動(dòng)物模型具體操作及組織勻漿制備按文獻(xiàn)［8］方法進(jìn)行。

1．6 干濕重法測(cè)定大鼠腦水腫［9］大鼠再灌注24 h后，將大鼠斷頭取出全腦，左右腦分開(kāi)，取缺血側(cè)大腦，去除小腦、低位腦干和嗅球，立即稱濕質(zhì)量。然后將腦組織烘干(105℃，24 h)，再稱干質(zhì)量。按干濕重法求出腦組織含水量，腦組織含水量計(jì)算公式:腦組織含水量(%)=(腦濕質(zhì)量－腦干質(zhì)量)/腦濕質(zhì)量×100% 。

1．7 蛋白質(zhì)、MDA、SOD、GSH-PX的測(cè)定 分別參照蛋白定量(考馬斯亮蘭法)測(cè)試盒、MDA測(cè)試盒、SOD測(cè)試盒、GSHPX測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果

2．1 肉桂水提液對(duì)大鼠腦水腫的影響 大鼠腦缺血再灌注后，缺血側(cè)腦組織中的含水量明顯增加(P＜0．01)，各劑量給藥組大鼠腦組織中的含水量與模型組比較顯著降低(P＜0．05或 P ＜0．01)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 肉桂水提液對(duì)大鼠腦水腫的影響 ( ± s)

表1 肉桂水提液對(duì)大鼠腦水腫的影響 ( ± s)

注:與正常組比較，#P ＜0．05或##P ＜0．01;與模型組比較，*P ＜0．05或＊＊P ＜0．01(下表同)。

組別 正常組 模型組 給藥組劑量/(g/kg)10 20 40腦組織含水量/% 78．59 ±0．65 81．32 ±0．60## 80．45 ±0．55* 79．51 ±0．38＊＊ 78．99 ±0．41＊＊

2．2 肉桂水提液對(duì)大鼠腦組織中MDA、SOD和GSH-PX的影響 MDA是氧自由基引起脂質(zhì)過(guò)氧化的終產(chǎn)物，是反映氧自由基損害程度的重要指標(biāo);SOD和GSH-PX是機(jī)體中重要的抗氧化酶，是自由基清除系統(tǒng)的重要組成成分。從表2可知，大鼠全腦缺血再灌注手術(shù)后，腦組織中MDA水平均明顯增大(P＜0．01)，提示腦缺血再灌注后使自由基增加而導(dǎo)致機(jī)體過(guò)氧化脂質(zhì)增高;而各劑量給藥組的MDA水平均顯著低于模型組(P＜0．01)，說(shuō)明肉桂水提液對(duì)機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化物的產(chǎn)生有一定抑制作用。與正常組比較，模型組的SOD和GSH-PX活性明顯降低(P＜0．05或 P＜0．01)，表明腦缺血再灌注損傷后大鼠腦組織中的SOD和GSH-PX活性顯著降低;而肉桂水提液各劑量給藥組的SOD活性比模型組明顯升高(P＜0．05或 P＜0．01)，其中以低劑量組的效果最好;中劑量和高劑量給藥組GSH-PX活性比模型組升高具有一定的顯著性差異(P＜0．05)。

表2 肉桂水提液對(duì)大鼠腦組織勻漿MDA、SOD和GSHPX的影響 ( ± s)

表2 肉桂水提液對(duì)大鼠腦組織勻漿MDA、SOD和GSHPX的影響 ( ± s)

組別 劑量/(g/kg)MDA/(nmoL/mgprot)SOD/(U/gprot)GSH-PX/(1×103U/gProt )正常組 － 38．42 ±0．59 106．27 ±3．15 166．61 ±40．70模型組 － 81．27 ±1．22## 96．26 ±3．38# 63．80 ±55．88#給藥組10 16．39 ±0．46＊＊ 219．10 ±1．15＊＊ 77．11 ±30．54 20 41．52 ±0．08＊＊ 163．06 ±2．86＊＊183．90 ±1．18*40 55．49 ±2．22＊＊ 129．1 ±31．24*142．94 ±2．79*

3 討論

腦水腫是缺血性損傷的主要病理變化之一，因而減輕腦水腫是改善缺血性腦損傷的重要標(biāo)志之一［10］。研究證實(shí)，肉桂水提液通過(guò)減輕缺血區(qū)腦組織水腫而明顯降低腦含水量，與模型組比較有顯著性差異(P＜0．05或P＜0．01)，從而對(duì)缺血性腦損傷具有一定的保護(hù)作用。

缺血再灌注損傷的機(jī)制，與氧自由基關(guān)系密切。大量研究已證實(shí)腦缺血再灌注后產(chǎn)生大量自由基，大量自由基氧化細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸，可引起細(xì)胞的損傷和死亡，所以自由基的作用是缺血再灌注損傷的重要發(fā)病學(xué)環(huán)節(jié)［11-12］。本研究發(fā)現(xiàn)，肉桂水提液能顯著減低大鼠腦組織中MDA的水平(P＜0．01)，并同時(shí)顯著提高 SOD(P＜0．05或 P＜0．01)和GSH-PX(P＜0．05)的活性，對(duì)缺血性腦損傷具有一定的保護(hù)作用。

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