制作血液涂片的技術(shù)改進(jìn)

陳學(xué)軍 劉孝武 王 英

血液涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查是血常規(guī)檢驗(yàn)的主要內(nèi)容，是檢驗(yàn)學(xué)科最基本的技能，也是臨床實(shí)驗(yàn)室診斷最簡便、最快捷、最特異和最經(jīng)濟(jì)實(shí)用的常規(guī)檢驗(yàn)方法[1]。近年來的實(shí)踐證明血細(xì)胞分析儀容易引起臨床上漏診和誤診，并且這一問題已經(jīng)引起專家的關(guān)注，應(yīng)重視血涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查[2]。傳統(tǒng)制作血液涂片技術(shù)，絕大多數(shù)醫(yī)院用載物片作推片，涂片角度在30o～45o之間不固定，做出的血液涂片大小不等、厚薄不均、長短不齊、細(xì)胞分布不均，無法進(jìn)行質(zhì)量控制，給疾病的診斷帶來了很多困難[3]。針對(duì)這一情況，經(jīng)過反復(fù)制片研究，從13o～30o固定角度推片中篩出17o或18o推片，用血量固定在5 uL制作血液涂片，排除了一些影響因素，該涂片符合標(biāo)準(zhǔn)血液涂片(厚薄適宜，頭、體、尾顯明，細(xì)胞分布均勻，血膜邊緣整齊，兩邊和兩端空隙各0.3 cm和1.5 cm，血膜長約4 cm)的要求。

1 材料與方法

1.1 材料

正常人EDTA抗凝靜脈全血、2 cm厚的有機(jī)玻璃片、載物玻片。

1.2 方法

用有機(jī)玻璃扳分別切割和磨制成一銳角10o～30o直角三角形各兩個(gè)，去除推片兩角各0.3 cm，裝制推片21個(gè)。

取正常人EDTA抗凝靜脈全血5 uL，加之于清潔干燥的載玻片離右側(cè)1.5 cm中間處，左手持載玻片的兩端，迅速用右手拿一固定角度推片的一端放于血滴前方，輕輕向后移動(dòng)接觸血滴，使血滴沿推片與載物片均勻散開成一直線，保持一定角度由前向后平穩(wěn)推進(jìn)，即制備出血液涂片。用13o～30o固定角度的推片各制作出50張血液涂片，比較血膜的厚薄、形態(tài)及細(xì)胞分布情況(見表1)。

選擇17o固定角度推片和傳統(tǒng)推片各制作血液涂片各50張，經(jīng)瑞氏染色后用顯微鏡進(jìn)行白細(xì)胞分類(見表2)。

2 結(jié)果

用13o～30o不同固定角度的推片，血量固定在5 uL，各制備50張血液涂片，經(jīng)比對(duì)，17o或18o固定推片所制備血液涂片，血膜長度x和s為4.081，3.987；0.015，0.0103；細(xì)胞分布均勻區(qū)x和s為3.033，2.971；0.015，0.0101，100%符合標(biāo)準(zhǔn)血液涂片要求。

選擇17o固定角度推片和傳統(tǒng)推片各制作血液涂片各50張，經(jīng)瑞氏染色后用顯微鏡進(jìn)行白細(xì)胞分類比較，中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞P＜0.001，有顯著性差異，嗜酸性粒細(xì)胞P＞0.05，無顯著性差異。

17o或18o固定推片所制備血液涂片與傳統(tǒng)法制備的血液涂片相比，制片質(zhì)量明顯提高，100%符合標(biāo)準(zhǔn)血液涂片要求，它在細(xì)胞形態(tài)檢查中能有效進(jìn)行質(zhì)量控制，加大了對(duì)疾病診斷的準(zhǔn)確率。

表1 10 o～30 o角度推片制作50張血涂片血膜長度(cm)比較表

表2 17 o固定角度推片和傳統(tǒng)推片各50張瑞氏染色后用顯微鏡分類比較

3 討論

傳統(tǒng)制作血液涂片不能有效控制推片角度及血量，做出的血液涂片大小不等、厚薄不均、長短不齊、細(xì)胞分布不均，僅有20%～30%符合標(biāo)準(zhǔn)血液涂片，無法進(jìn)行質(zhì)量控制，給疾病的診斷帶來了很多困難。為此我們進(jìn)行反復(fù)制片研究，改進(jìn)傳統(tǒng)血液涂片制片技術(shù)，使其統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)化。1986年張紹林主編的全國中等衛(wèi)生學(xué)校教材《臨床檢驗(yàn)》關(guān)于血液涂片制作中提出：一張良好的血片，厚薄適宜，頭體尾顯明，細(xì)胞分布均勻，兩邊和兩端留有空隙各0.3 cm和1.5 cm，血膜長約4 cm，血膜邊緣整齊[4]。我們用17o或18o固定角度推片，血量固定在5 uL所制備血液涂片符合良好的血片要求。良好標(biāo)準(zhǔn)的血涂片厚薄適宜，頭體分明，細(xì)胞分布均勻，血膜邊緣整齊，能更好地反映血液中細(xì)胞的分布情況，較普通血涂片有不可比擬的優(yōu)勢(shì)[5]。

固定角度17o或18o的推片制作出的血液涂片，血膜長度x和s為4.081，3.987；0.015，0.0103。用17o固定角度推片和傳統(tǒng)的推片比較：中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞P＜0.001有顯著性差別；在制作推片時(shí)己經(jīng)去除推片的兩角各0.3 cm，在涂片時(shí)自然留有0.3 cm邊緣，因此，17o或18o固定角度的推片，血量固定在5 μL，制作出的血液涂片100%符合標(biāo)準(zhǔn)血涂片要求。該制片法改變了傳統(tǒng)制備血液涂片30o～45o的錯(cuò)誤概念，同時(shí)通過制作血涂片的推片，使新老檢驗(yàn)人員均可制備標(biāo)準(zhǔn)化的血液涂片，大大提高了制片質(zhì)量，也提高了對(duì)細(xì)胞分類的準(zhǔn)確性，降低了誤差，加大了對(duì)疾病診斷的準(zhǔn)確率。

目前，各地普遍采用自動(dòng)化血液分析儀，大大提高了工作效率，但各類儀器仍有不足，不能對(duì)單個(gè)細(xì)胞完全識(shí)別，必要時(shí)仍需顯微鏡涂片檢查復(fù)檢[6]。因此，任何先進(jìn)的血液分析儀，都無法完全準(zhǔn)確地識(shí)別血液中所有細(xì)胞，尤其是異常細(xì)胞，要解決這一問題，必須依靠血細(xì)胞涂片形態(tài)學(xué)檢查[7]。自動(dòng)分析技術(shù)是目前血細(xì)胞常規(guī)檢查的主要手段，有很多研究結(jié)果顯示，常規(guī)的血細(xì)胞分析，自動(dòng)檢測(cè)技術(shù)不能完全取代手工血涂片鏡檢分析[8]。血涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查是觀察血液病的一個(gè)及其重要、無法替代、必不可少的檢查手段，沒有血涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)的檢查，很多血液系統(tǒng)的疾病難以確診[9]。血液涂片顯微鏡檢查是白細(xì)胞分類的金標(biāo)準(zhǔn)，血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類結(jié)果僅供參考[10]。

血液涂片檢查是細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的基礎(chǔ)，在疾病的診斷中發(fā)揮著不可替代的作用，有著極其重要的臨床意義，而標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一的血液涂片能夠給臨床應(yīng)用帶來廣闊前景。

[1]李順義.血細(xì)胞形態(tài)學(xué)漏診分析與對(duì)策[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，28(2)：140-141.

[2]盧興國，叢玉隆.應(yīng)重視和提升傳統(tǒng)血液形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)診斷水平[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，29(6)：481-482.

[3]劉孝武，趙會(huì)芹，賀信祥，等.制作標(biāo)準(zhǔn)化血液涂片建議與研究[J].中國血液流變學(xué)雜志，2007，17(1)：130-131.

[4]張紹林.臨床檢驗(yàn)[M].成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，1986：26-27.

[5]劉孝武，陳學(xué)軍，王英.血液分析儀異常細(xì)胞報(bào)警與標(biāo)準(zhǔn)血涂片檢驗(yàn)結(jié)果分析[J].中國健康月刊，2011，30(6)：16-17.

[6]叢玉隆，王淑娟.今日臨床檢驗(yàn)[M].北京：中國科學(xué)技術(shù)出版社，1998：14-15.

[7]朱忠勇.使用血液分析儀后復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)的商榷[C].全國血液體液學(xué)質(zhì)量保證學(xué)術(shù)會(huì)議專題報(bào)告資料，2005：40.

[8]中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)全國血液學(xué)復(fù)檢專家小組，中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志編輯委員會(huì).全國血液學(xué)復(fù)檢專家小組工作會(huì)議紀(jì)要暨血細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)釋義[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，30(4)：380-382.

[9]姬美容，謝毅.臨床疑難血液病細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷精要[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2002：56.

[10]許文榮，谷俊俠.臨床血液學(xué)檢驗(yàn)[M].南京：東南大學(xué)出版社，2001：197.