吉林省部分地區(qū)豬偽狂犬病監(jiān)測及凈化

李曉慧 袁 陸 呼延含蓉 楊 木 宮 江 王玉福 溫 偉 孫 躍

（1.吉林省畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院，吉林長春，130062；

2.吉林省動物衛(wèi)生監(jiān)督所，吉林長春，130062；

3.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，吉林長春，130118

4.吉林省動物疫病預(yù)防控制中心，吉林長春，130062）

豬偽狂犬?。≒seudoribies，PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的家畜和多種野生動物共患的一種傳染病。其對養(yǎng)豬業(yè)的危害程度不亞于口蹄疫和豬瘟。臨床上主要表現(xiàn)為母豬繁殖障礙和仔豬的高死亡率，同時也是豬呼吸系統(tǒng)疾病綜合征的重要原發(fā)性病原。

我國首次發(fā)現(xiàn)該病是1947年，劉永純從貓體內(nèi)首次分離出PRV。目前已有20多個省市報道該病的發(fā)生。自豬偽狂犬病傳入我國后，一直被視為災(zāi)難性的烈性傳染病，它的肆意橫行，已經(jīng)嚴重影響了我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。每次爆發(fā)，都給我國的畜牧業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。徹底控制并凈化偽狂犬病意義重大。

從2001年開始，本課題組就著手進行吉林省內(nèi)部分規(guī)模化豬場的豬偽狂犬病流行病學(xué)的調(diào)查工作，并在2004年將調(diào)查規(guī)模由商品豬場擴大到種豬場，并首次確定吉林省內(nèi)豬偽狂犬病的血清學(xué)陽性率為21.17%。

1 概況

1.1 病原體

偽狂犬病病毒（PRV）屬皰疹病毒科（Herpesviridae），甲型皰疹病毒亞科（Alphaherpesvirinae），水痘病毒屬（Varicellovirus）的成員。該病毒為雙股線性DNA病毒，有囊膜，囊膜上有纖突。病毒粒子大小為150～180 nm。PRV是皰疹病毒科中抵抗力較強的一種，在37℃下的半衰期為7 h，8 ℃可存活46 d，而在25 ℃干草、樹枝和食物上可存活10～30 d。病毒在pH 4～9之間保持穩(wěn)定，用0.5%～1%氫氧化鈉可迅速使其滅活；5%石炭酸經(jīng)過2 min可使其滅活，但0.5%石炭酸處理32 d后仍具有感染性。PRV對乙醚、氯仿等脂溶劑以及福爾馬林和紫外線照射敏感。目前已知該病毒血清型只有一個。

1.2 流行病學(xué)

各種家畜如牛、羊、犬等可自然感染，許多野生動物也易感，但人對PRV無易感性。豬是PRV的貯存宿主和傳染源，其對PRV的易感性與病毒的毒力、感染數(shù)量、感染途徑、 動物種類、個體狀態(tài)及應(yīng)激情況等因素有關(guān)。該病無明顯季節(jié)性，一年四季均可發(fā)生。發(fā)病豬多為2周齡左右仔豬，且死亡率高。成年豬也可發(fā)病，但多呈一過性，很少死亡。發(fā)病后存活下來的豬均為隱性感染者，終身帶毒，受到一定條件的刺激會使病毒激活，在豬群中傳播。PRV可通過直接接觸傳播，也可通過間接接觸傳播，目前要徹底消滅PRV應(yīng)依靠監(jiān)測與凈化并行的技術(shù)手段。

1.3 臨床癥狀

患病豬的臨床癥狀會隨年齡的變化而產(chǎn)生差異。出生仔豬患病后會全身顫抖，無力或停止吸乳，體溫升高至41℃～41.5℃，精神萎靡，食欲不振。部分病豬出現(xiàn)叫聲嘶啞、口角流涎，眼瞼紅腫；部分病豬出現(xiàn)共濟失調(diào)，頭歪向一側(cè)，做圓圈運動；個別病豬出現(xiàn)嘔吐或產(chǎn)后癱瘓；還有的患病仔豬表現(xiàn)出犬坐姿勢，不時倒地，四肢劃動，數(shù)分鐘又恢復(fù)正常，經(jīng)1～2h口吐白沫而死。死亡率高達95%以上。斷奶仔豬在感染PRV時，發(fā)病率在30%左右，死亡率可達10%左右，主要表現(xiàn)為嘔吐拉稀，也有病豬偶發(fā)神經(jīng)癥狀。而成年豬一般為隱性感染，出現(xiàn)癥狀一般都很輕微，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、腹瀉，4～8d即可完全恢復(fù)。懷孕母豬則會發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎或死胎，產(chǎn)后數(shù)月配種成功率低。公豬在感染PRV后，則表現(xiàn)出睪丸腫脹、萎縮，喪失種用能力。

1.4 病理變化

病豬一般表現(xiàn)為腦膜出血，扁桃體腫大，全身淋巴結(jié)腫大、出血或壞死。心房肌柔軟，冠狀溝有白色黏液附著，心肌肥厚并附有點狀出血。氣管內(nèi)有大量泡沫狀黏液。腎皮質(zhì)部布滿粟粒大小的出血點。膀胱黏膜有大小不等的出血點。仔公豬附睪腫脹或輕微出血。

1.5 診斷

根據(jù)疾病的臨床癥狀和病理變化，結(jié)合流行病學(xué)，可做出初步診斷，確診需進行實驗室診斷，常用ELISA、血清中和試驗和PCR進行檢測。

2 血清學(xué)調(diào)查

2.1 材料與方法

實驗材料 血清：吉林省內(nèi)各縣市豬場內(nèi)未注射PR疫苗的豬血清共895份，-20 ℃保存；試劑盒：偽狂犬病膠乳凝集試驗試劑盒（購自武漢科前動物生物制品有限責任公司）；滅菌木質(zhì)牙簽、載玻片。

2.2 方法

取被檢血清、陽性血清、陰性血清各1滴分置于載玻片上，分別加入乳膠抗原各1滴，用滅菌木質(zhì)牙簽攪拌混勻，靜置5min后觀察結(jié)果。

2.3 結(jié)果

血清學(xué)調(diào)查結(jié)果詳見表1、表2。

表1 吉林省內(nèi)部分豬場豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查結(jié)果

表2 吉林省內(nèi)各地市豬場豬偽狂犬病陽性率統(tǒng)計

3 控制與凈化

3.1 材料與方法

3.1.1 主要試劑與儀器 偽狂犬病膠乳凝集試驗試劑盒（購自武漢科前動物生物制品有限公司）；豬偽狂犬病Tk/gI雙基因缺失弱毒疫苗（購自哈藥集團生物制品有限公司）；豬偽狂犬病gI-ELISA檢測試劑盒（購自武漢科前動物生物制品有限責任公司）。

3.1.2 方法

3.1.2 .1 血清學(xué)監(jiān)測 以豬場為單位，在豬場內(nèi)進行普遍的血清學(xué)檢查。本課題組首先對吉林省內(nèi)部分豬場通過偽狂犬病膠乳凝集試驗對所有豬血清進行檢測，初步了解我省豬偽狂犬病流行情況，最終選擇九臺、四平、東豐、農(nóng)安的4個豬場（3個輕度感染場，1個中度感染場）千余頭豬作為重點凈化對象實施凈化方案。

3.1.2 .2 淘汰陽性豬 將通過偽狂犬病膠乳凝集試驗得到的陽性豬和陰性豬分群飼養(yǎng)，陽性豬建議隔離飼養(yǎng)或撲殺。為避免感染面擴大，期間將豬場進行徹底消毒。

3.1.2 .3 采用基因缺失疫苗注射免疫 將全部豬注射豬偽狂犬病Tk/gI雙基因缺失弱毒疫苗，注苗間隔4周再進行1次加強免疫，以后每4個月進行1次重復(fù)注射。

3.1.2 .4 血清學(xué)鑒別檢查 首免1個月后采用gI-ELISA試劑盒對豬群進行檢測，之后每隔半年進行1次血清學(xué)鑒別檢查，將注射疫苗血清學(xué)陽性的豬歸為健康群，將野毒感染血清學(xué)陽性的豬歸為感染群，對檢出陽性豬進行淘汰，采取隔離飼養(yǎng)或撲殺。

3.1.2 .5 復(fù)查 半年后再次采用鑒別ELISA診斷方法進行檢測，對這4個豬場1年來凈化情況進行總結(jié)。

3.2 結(jié)果

（1）通過偽狂犬病膠乳凝集試驗進行了血清學(xué)監(jiān)測，監(jiān)測對象為整個豬場所有公豬（包括種豬和后備公豬）和母豬（包括生產(chǎn)母豬和后備母豬），以及所有哺乳仔豬、生長豬和育肥豬。其中公豬和母豬部分，九臺豬場共采血清169份，檢出陽性3份，陽性檢出率1.78%；四平豬場共采血清178份，檢出陽性4份，陽性檢出率2.25%；東豐豬場共采血清163份，檢出陽性17份，陽性檢出率10.43%；農(nóng)安豬場共采血清197份，檢出陽性5份，陽性檢出率2.54%。對所有檢出陽性豬均進行了撲殺處理。哺乳仔豬、生長豬和育肥豬部分見表3。

（2）注射豬偽狂犬病Tk/gI雙基因缺失弱毒疫苗1個月后，通過gI-ELISA診斷方法進行血清學(xué)鑒別檢查。結(jié)果公豬和母豬部分，九臺豬場共采血清164份、四平豬場共采血清170份、農(nóng)安豬場共采血清194份，經(jīng)檢測試驗樣品孔OD630值均低于標陰值，結(jié)果均為陰性。東豐豬場共采血清138份，經(jīng)檢測檢出陽性4份，陽性檢出率3.13%，其余均為陰性。哺乳仔豬、生長豬和育肥豬部分見表4。

表3 各個豬場哺乳仔豬、生長豬和育肥豬血清學(xué)監(jiān)測情況

表4 各個豬場哺乳仔豬、生長豬和育肥豬gE-ELISA血清學(xué)鑒別檢查情況

（3）半年后，不分公豬和母豬再次進行血清學(xué)鑒別檢查。九臺豬場共采血清163份、四平豬場共采165份、東豐豬場共采128份、農(nóng)安豬場共采189份，檢測結(jié)果均為陰性；哺乳仔豬、生長豬和育肥豬部分，九臺豬場共采血清1134份、四平豬場共采血清1017份、東豐豬場共采933份、農(nóng)安豬場共采1228份，經(jīng)檢測結(jié)果也均為陰性，說明凈化成功，效果明顯。

4 討論

（1）本課題組通過偽狂犬病膠乳凝集試驗對吉林省內(nèi)各縣市部分豬場進行血清學(xué)調(diào)查，此次調(diào)查范圍覆蓋吉林省大部分地區(qū)，共包括28個縣市內(nèi)的51個豬場。調(diào)查總數(shù)為895頭，其中有77頭檢查呈陽性，占檢查總數(shù)的8.60%。這個結(jié)果相對于2004年本課題組的調(diào)查結(jié)論而言（2004年吉林省豬偽狂犬病的血清學(xué)陽性率21.17%），已經(jīng)有了顯著的下降，說明各個豬場無論從管理模式、生產(chǎn)水平還是防疫措施都有所加強。但我們不能掉以輕心，豬偽狂犬病還有隨時發(fā)生暴發(fā)的可能，控制和凈化豬偽狂犬病仍勢在必行。

（2）血清學(xué)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)陽性豬達50%以上的種豬場，建議全群淘汰；陽性率超過1%未超過50%的，建議淘汰陽性豬。

（3）通過本課題組1年多來的實際研究發(fā)現(xiàn)，合理地利用基因缺失弱毒疫苗進行免疫、長期科學(xué)地監(jiān)測以及制定嚴密規(guī)范的免疫程序和生物安全措施可以有效地控制PR，并逐步達到凈化PR。

①本課題組選用了豬偽狂犬病Tk/gI雙基因缺失弱毒疫苗，該弱毒疫苗具有良好的免疫效果，避免了其他疫苗免疫效果差的風險；另外缺失的gI基因可以做為一個“標記”基因，用來區(qū)分感染動物和接種動物，通過鑒別ELISA的方法即可篩選出陽性的野毒感染動物，從而為根除豬偽狂犬病打下基礎(chǔ)。

②每隔半年，本課題組便對實施了凈化程序的4個豬場進行偽狂犬病的監(jiān)測，首先通過偽狂犬病膠乳凝集試驗方法將豬場內(nèi)感染豬偽狂犬病的陽性豬和陰性豬進行初步篩查，隨后注射TK/gI雙基因缺失弱毒疫苗，過1個月利用gI-ELISA診斷方法對豬場的送檢血清進行監(jiān)測，這樣就可以動態(tài)追蹤在實施豬場的凈化程序后豬群中野毒陽性率的變化。

③接種時，妊娠母豬于分娩前21～28 d注苗為宜，其所生仔豬的母源抗體可持續(xù)21～28 d，此后的乳豬或斷乳豬仍需接種；因某些原因而未用本疫苗免疫的母豬，其所生仔豬，可在生后7 d內(nèi)進行接種，并在斷乳后仍需接種。本實驗中，4個豬場內(nèi)未滿7日齡的仔豬在7日齡之后統(tǒng)一進行接種，7日齡以上的1次性接種；母豬及妊娠母豬均進行1次性接種。

④這4個豬場在實驗階段均未引進新的種豬，并且將檢出的陽性豬均進行了撲殺；實驗階段4個豬場均嚴格遵守本課題組制定的免疫程序，這或許也是他們沒有受到豬偽狂犬病野毒侵襲的原因之一。

⑤對新引進的種豬，要進行嚴格的檢疫，要引進偽狂犬病抗體陰性豬。若引進種豬未進行檢疫，則在引到本場后進行隔離飼養(yǎng)，2個月后抽血樣檢查，抗體或野毒感染抗體為陰性者方可與本場其他豬混群飼養(yǎng)。與其他豬群一樣，每隔半年應(yīng)作一次血清學(xué)鑒別檢查，對于檢測出的野毒感染陽性豬要嚴格隔離，最好是將其淘汰不作種豬用或進行撲殺。

⑥對健康豬場而言，每3個月應(yīng)進行1次血清學(xué)抽查，同時抽查的母豬數(shù)量不得少于25%。如檢測出血清學(xué)陽性豬，應(yīng)立即淘汰并給陰性豬注射疫苗，并加強監(jiān)測。

⑦豬場要進行定期嚴格的消毒管理措施及滅鼠措施，同時禁止飼養(yǎng)貓狗等其他動物，防止疾病傳播；同時嚴格控制外來人員及車輛進入豬場，避免外來人員和機械傳播疾??；同時由于豬偽狂犬病病毒可在空氣中傳播，對周邊豬場最好采取統(tǒng)一的管理措施。