497株腸桿菌科細(xì)菌耐藥性分析

谷 巍,尚 峨,張曉靜,姚興偉*,劉百歌*

(1.吉林公安邊防總隊(duì)通化支隊(duì)衛(wèi)生隊(duì),吉林通化 134000;2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院;3.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院）

革蘭陰性桿菌尤其是腸桿菌科細(xì)菌目前是臨床感染中最重要的病原菌,也是醫(yī)院感染中較為常見的病原菌。為了解臨床腸桿菌科菌耐藥性,我們對2009年10月-2010年9月間我院臨床標(biāo)本中分離出的497株腸桿菌科細(xì)菌進(jìn)行了分析,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源無菌方法采集標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)獲得2009年10月-2010年9月我院臨床標(biāo)本中分離出的腸桿菌科細(xì)菌497株。

1.2 細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行,培養(yǎng)分離得到的純種菌在生物梅里埃公司的VITEK-32細(xì)菌鑒定儀上進(jìn)行菌種鑒定。

1.3 藥物敏感性試驗(yàn)藥敏試驗(yàn) 按CLSI推薦的紙片擴(kuò)散法(K-B法）,判斷標(biāo)準(zhǔn)按CLSI2009年版。

1.4 超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測(1）雙紙片協(xié)同法檢測超廣譜β-內(nèi)酰胺酶:選用阿莫西林/克拉維酸、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢噻肟、氨曲南藥敏紙片。將初篩可疑菌株按K-B法操作,將阿莫西林/克拉維酸紙片貼于M-H瓊脂平皿中央,周圍分別貼頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢噻肟、氨曲南藥敏紙片,每種紙片于中央紙片間距20 mm。經(jīng)35℃培養(yǎng)18-24小時(shí)觀察結(jié)果,如發(fā)現(xiàn)任意一個紙片和阿莫西林/克拉維酸紙片間出現(xiàn)協(xié)同效應(yīng),即判斷為產(chǎn)ESBLs菌株。(2）ESBL確證試驗(yàn)[1]:按CLSI確證試驗(yàn),將初篩可疑菌株用頭孢他啶、頭孢他啶/克拉維酸、頭孢噻肟、頭孢噻肟/克拉維酸紙片作紙片法藥敏試驗(yàn)。經(jīng)35℃,18-24小時(shí)觀察結(jié)果,含克拉維酸和不含克拉維酸的抗生素紙片間的抑菌環(huán)直徑相差≥5 mm可證實(shí)產(chǎn)ESBLs。

1.5 質(zhì)量控制以金黃色葡萄球菌ATCC25923和大腸埃希菌ATCC25922為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用WHONET5.4進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 臨床分離的常見腸桿菌構(gòu)成由表1可以看出,2009年10月-2010年9月從我院臨床標(biāo)本中共分離出497株常見的革蘭陰性腸桿菌,構(gòu)成比占前三位的分別是大腸埃希菌198株(39.8%）,肺炎克雷伯菌115株(23.1%）,陰溝腸桿菌110株(22.1%）其他腸桿菌科細(xì)菌74株(15.0%）。

表1 常見腸桿菌分離情況

2.2 臨床分離腸桿菌在各種標(biāo)本中的分布我院臨床分離出的腸桿菌科細(xì)菌主要來自尿液標(biāo)本(275株）見表2。

表2 497株腸桿菌在不同標(biāo)本中的分布情況

2.3 腸桿菌對常用抗菌藥物的耐藥性腸桿菌科細(xì)菌對15種常用抗菌藥物的耐藥率見表3。大腸埃希菌和克雷伯菌對抗菌藥物的耐藥率,見表4。

3 討論

在我院2009年-2010年間檢出的腸桿菌科細(xì)菌中檢出率排在前三位的分別為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和陰溝腸桿菌。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs的菌株為100株(20.1%）,ESBLs可以通過接合、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)等形式使耐藥基因在細(xì)菌間擴(kuò)散,從而造成嚴(yán)重的醫(yī)院交叉感染和院外耐藥菌的擴(kuò)散[2]。同時(shí),隨著三代頭孢菌素的廣泛應(yīng)用,在藥物的選擇性壓力下也促進(jìn)了產(chǎn)ESBLs菌株的產(chǎn)生。

表3 腸桿菌科細(xì)菌對抗菌藥物的耐藥率

從表4可以看出,產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐藥率明顯高于非產(chǎn)ESBLs株。產(chǎn)ESBLs菌不僅對頭孢菌素和氨曲南耐藥,而且對氨基糖苷類、喹諾酮類和磺胺類交叉耐藥[3]。根據(jù)CLSI2009年規(guī)定[1],對于產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌,即使體外試驗(yàn)對青霉素類、頭孢菌素類、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物敏感,也應(yīng)報(bào)告耐藥。在我們的資料中,產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對這些藥物也有一定的敏感率,這會誤導(dǎo)臨床治療。因此,加強(qiáng)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室對產(chǎn)ESBLs菌株的檢測及其藥敏結(jié)果的正確報(bào)告,對指導(dǎo)臨床用藥具有十分重要的意義。

表4 大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對抗菌藥物的耐藥率

碳青霉烯類抗菌藥亞胺培南和美羅培南對產(chǎn)ESBLs和非產(chǎn)ESBLs菌株的敏感率為100%,這與碳青霉烯類抗菌藥物特殊的空間構(gòu)象有關(guān)[4],因此目前碳青霉烯類抗菌藥物是治療產(chǎn)ESBLs菌感染的首選藥物。但國內(nèi)外已有報(bào)道指出[5],已經(jīng)分離出耐碳青霉烯類抗菌藥的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌,這可能由于碳青霉烯類抗菌藥物的廣泛應(yīng)用,造成其耐藥菌株逐漸產(chǎn)生,因此,應(yīng)引起足夠的重視。

[1]Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing:Nineteenth informational supplement

[2]徐加勤,朱紅國,曹娟,等.肺炎克雷伯菌AmpC酶和超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的檢測及耐藥分析[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2008,24(10）:1817.

[3]Jacoby GA,Han P.detection of extended-spectrum beta-lactamases in clinical isolates of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli[J].J Clin Microbiol,1996,34(7）:908.

[4]Jacoby GA,Archer GL.New mechanisms of bacterial resistance to antimicrobial agents[J].N Engl J Med,1991,324(9）:601.

[5]蒯守剛,邵海楓,王衛(wèi)萍,等.肺炎克雷伯菌介導(dǎo)碳青霉烯類耐藥的基因型檢測[J].2008,5.