Survivin、Ki-67核抗原在宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)意義

田 琦,呂勝軍

(1.吉林省腫瘤醫(yī)院 放療科,吉林 長(zhǎng)春 130012;2.吉林省肝膽病醫(yī)院 電診科,吉林 長(zhǎng)春 130062）

Survivin是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)細(xì)胞凋亡抑制因子,其主要的生物學(xué)功能是抑制凋亡,參與細(xì)胞周期的調(diào)控以及參與血管的生成[1-3]。Ki-67是一種非組蛋白核抗原,參與細(xì)胞有絲分裂,檢測(cè)Ki-67表達(dá),反映腫瘤細(xì)胞的增殖狀態(tài)。本研究采用免疫組化S-P法,在蛋白水平檢測(cè)Survivin、Ki-67的表達(dá),旨在探討二者與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源

選擇2009年5月-2010年8月吉林省腫瘤醫(yī)院病理科存檔的手術(shù)切除宮頸鱗癌26例,患者年齡28-71歲,平均年齡46歲,術(shù)前未接受過(guò)其它治療,另外收集活檢或手術(shù)切除的宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN）標(biāo)本78例,其中CINⅠ28例,CINⅡ23例,CINⅢ27例,患者年齡23-75歲,平均年齡41歲,因子宮急性病變行子宮切除手術(shù)的正常宮頸12例作為對(duì)照。

1.2 主要試劑

Survivin兔抗人多克隆抗體購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司,Ki-67為ZM-0166單抗,工作液,由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 方法

所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋后連續(xù)切片,每例標(biāo)本行HE染色及S-P免疫組化染色,光鏡下觀察。免疫組化步驟按照S-P試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行,一抗?jié)舛葹?∶100,由福州邁新技術(shù)有限公司及北京中杉金橋技術(shù)有限公司提供的陽(yáng)性對(duì)照片作陽(yáng)性對(duì)照,以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

Survivin陽(yáng)性表達(dá)判定標(biāo)準(zhǔn):Survivin陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞漿,偶見(jiàn)于細(xì)胞核,細(xì)胞漿或細(xì)胞核呈現(xiàn)淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性,隨機(jī)觀察5個(gè)高倍鏡下視野,陽(yáng)性細(xì)胞≤5%為0分,6-25%為1分,26-50%為2分,51-75%為3分,＞75%為4分,陽(yáng)性強(qiáng)度黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分,兩項(xiàng)積分相乘,0分為陰性(-）,1-4分為弱陽(yáng)性(+）,5-8分為中度陽(yáng)性(++）,9-12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++）。

Ki-67陽(yáng)性表達(dá)判定標(biāo)準(zhǔn):Ki-67陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞核,呈現(xiàn)棕黃色顆粒,或細(xì)胞核、細(xì)胞漿同時(shí)呈現(xiàn)棕黃色,于40倍光鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,每例標(biāo)本計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞,Ki-67指數(shù)=陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)總和/1 000×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用卡方檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)及相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌、各期別CIN以及正常宮頸組織中Survivin的表達(dá)情況

Survivin在宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中有著豐富的表達(dá),陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞漿,偶見(jiàn)于細(xì)胞核,在正常宮頸組織中不表達(dá)。Survivin表達(dá)陽(yáng)性程度:宮頸癌高于CIN(χ2=6.42,P＜0.05）,CIN高于正常宮頸組織(χ2=12.52,P＜0.05）,各期別CIN中Survivin的表達(dá)隨CIN級(jí)別的升高而提高,CINⅢ高于CINⅡ(χ2=4.52,P＜0.05）,CINⅡ高于CINⅠ(χ2=4.26,P＜0.05）,正常宮頸組織與CINⅠ間及CINⅢ與宮頸癌間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。

表1 宮頸癌、各期別CIN以及正常宮頸組織中Survivin的表達(dá)情況

2.2 宮頸癌、各期別CIN以及正常宮頸組織中Ki-67指數(shù)

Ki-67陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞核,呈現(xiàn)棕黃色顆粒,在宮頸癌及CIN中有豐富的表達(dá),在正常宮頸組織中呈弱陽(yáng)性表達(dá)。Ki-67指數(shù):宮頸癌高于CIN(t=6.13,P＜0.05）,CIN高于正常宮頸組織(t=5.82,P＜0.05）,CINⅢ高于CINⅡ(t=6.42,P＜0.05）,CINⅡ高于CINⅠ(t=2.35,P＜0.05）,宮頸癌、各期別CIN的Ki-67指數(shù)較正常宮頸明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。

表2 宮頸癌、各期別CIN以及正常

2.3 宮頸癌及各期別CIN中Survivin的表達(dá)強(qiáng)度與Ki-67指數(shù)間呈正相關(guān)(P1＜0.05,r1=0.92;P2＜0.05,r2=0.96）。

3 討論

宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)逐步演變、進(jìn)展的復(fù)雜而連續(xù)的過(guò)程,與多種癌基因和抑癌基因的表達(dá)、調(diào)控及細(xì)胞凋亡密切相關(guān),宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia CIN）是宮頸癌的癌前病變,發(fā)展為宮頸癌是一連續(xù)而漫長(zhǎng)的過(guò)程,大約需要10年左右的時(shí)間,尋找并發(fā)現(xiàn)宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中相關(guān)的敏感指標(biāo),對(duì)阻斷宮頸癌癌前病變的發(fā)展,減少宮頸癌的發(fā)生,幫助臨床工作中早期診斷、早期治療,判斷其轉(zhuǎn)歸,都有著重要的指導(dǎo)意義。

生存素(Survivin）是至今為止所發(fā)現(xiàn)的作用最強(qiáng)的凋亡抑制因子,Survivim基因定位于人體17號(hào)染色體及促進(jìn)血管生成等方面的作用,具有抑制凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂的雙重功能,在胚胎時(shí)期、胎兒發(fā)育過(guò)程中以及未分化成熟的組織中表達(dá),在正常成人組織中基本不表達(dá),當(dāng)細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)變時(shí)呈現(xiàn)再次表達(dá),Survivin在多數(shù)腫瘤組織中有著較高表達(dá)[4]。Survivin的生物學(xué)功能為抑制凋亡、參與細(xì)胞周期調(diào)控以及參與血管生成的作用。其表達(dá)有著細(xì)胞周期的依賴性,G1期基本不表達(dá),S期弱表達(dá),G2/M期呈強(qiáng)烈高表達(dá),Survivin的過(guò)度表達(dá),導(dǎo)致細(xì)胞加快向S期轉(zhuǎn)換,抑制G1期靜止,幫助腫瘤細(xì)胞逃離細(xì)胞周期的檢測(cè)點(diǎn),實(shí)現(xiàn)異常增殖[5]。有助于細(xì)胞逃避細(xì)胞周期G2/M基因的檢測(cè)點(diǎn),通過(guò)發(fā)生有絲分裂,實(shí)現(xiàn)的異常增殖和分化,加一方面,通過(guò)減少血管內(nèi)皮的細(xì)胞凋亡,促進(jìn)腫瘤血管的形成[5]。

本研究中發(fā)現(xiàn),Survivin在正常宮頸組織中不表達(dá),在宮頸癌的癌前病變CIN中,隨著CIN級(jí)別的增加,表達(dá)逐漸增強(qiáng),在宮頸癌中高表達(dá),說(shuō)明Survivin在正常宮頸至癌前病變CIN,直至最終發(fā)展為宮頸癌的過(guò)程中,呈現(xiàn)一個(gè)漸進(jìn)表達(dá)的過(guò)程,與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)失控有著密切的關(guān)系,這在其它相關(guān)研究中也得到證實(shí)[6]。

Ki-67是一種反映細(xì)胞增殖的核抗原基因,是細(xì)胞增殖活性的指標(biāo),定位于人第10號(hào)染色體,維持細(xì)胞增殖活性起著重要的作用,Ki-67抗原在G1、S、G2/M期均有合成,反映細(xì)胞的增殖活性,對(duì)預(yù)測(cè)癌前病變向惡性病變轉(zhuǎn)化過(guò)程有著重要的參考價(jià)值,對(duì)惡性腫瘤的早期診斷、早期治療有著指導(dǎo)意義。

本研究Ki-67的表達(dá),在結(jié)果顯示,正常宮頸組織、CIN和宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)有著顯著差異,表明宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞增殖有著密切的關(guān)系。本研究結(jié)果還顯示,宮頸癌及CIN中Survivin的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度與Ki-67指數(shù)間呈現(xiàn)正相關(guān),提示Survivin一方面抑制細(xì)胞的凋亡,另一方面促進(jìn)細(xì)胞的惡性增殖,通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡及促進(jìn)細(xì)胞增殖的雙重作用,促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。Fukada[7]等認(rèn)為 celecoxib(環(huán)氧化物酶-2抑制劑）具有抑制Survivin活性的作用,從而抑制Survivin蛋白和mRNA的表達(dá),使Survivin表達(dá)下調(diào),可能成為宮頸癌靶向治療的新思路[8]。

[1]Siripong P,Hahnvajanawong C,Yahuafai J,et al.Induction of apoptosis by rhinacanthone isolated from Rhinacanthus nasutus roots in human cervical carcinoma cells[J].Bio Pharm Bull,2009,32(7）:1251.

[2]顧桂芳,張美云.宮頸癌組織中Survivin基因表達(dá)的臨床意義[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2008,28(2）:232.

[3]Duffy MJ,Donovan N,Brennan DJ,et al.Survivin:a promising tumor biomarker[J].Cancer Lett,2007,249(1）:49.

[4]夏云金.凋亡抑制因子Survivin的生物學(xué)功能及其在腫瘤與正常組織中表達(dá)的意義[J].重慶醫(yī)學(xué),2005,2(34）:289.

[5]Shinjyo T,Kurosawa H,Miyagi J,et al.Ras-mediated upregulation of Survivin expression in cytokine-dependent murine pro-Blym-phocytic cell[J].Tohoku Journal of Experimental Medicine,2008,216(1）:25.

[6]Ai Z,Yin L,Zhou X,et al.Inhibition of Survivin reduces cell proliferation and induces apoptosis inhuman endometrial cancer[J].Cancer,2006,107(4）:746.

[7]Fukada K,Takahashi-Yanaga F,Sakoguchi-Okada N,et al.Celecoxib induces apoptosis by inhibiting the expression of Survivin in HeLa cell[J].Biochem Biophys Res Commun,2007,15(1）:1166.

[8]Lu S,Zhang B,Wang Z.Expression of Survivin,cyclinD1,P21(WAF1）,caspase-3 in cervical cancer and its relation with prognosis[J].Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci,2005,25:78.