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    新疆北疆部分規(guī)模豬場支原體肺炎流行病學(xué)調(diào)查

    2011-08-16 07:44:26楊俊杰呂新剛
    中國動物檢疫 2011年11期
    關(guān)鍵詞:肺臟支原體豬場

    楊俊杰 ,李 石 ,李 劼 ,呂新剛

    (1.兵團(tuán)農(nóng)九師畜牧科學(xué)研究所,新疆額敏 834601;2.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院,新疆石河子 832003)

    豬支原體肺炎(Mps)亦稱豬氣喘病、豬地方性流行性肺炎,是由豬肺炎支原體(Mhp)感染引起的一種慢性呼吸道傳染病,通常引起豬群生產(chǎn)性能顯著下降,受感染豬群日增重下降、飼料報(bào)酬降低等,給豬場造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[1]。

    為了解新疆北疆部分規(guī)模豬場中Mhp的感染情況,降低該病對養(yǎng)豬業(yè)的危害,對13個(gè)規(guī)模豬場進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查,現(xiàn)將調(diào)查結(jié)果報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 樣品來源 采于北疆地區(qū)13個(gè)規(guī)模豬場,血清364份,病變肺臟72份。

    1.1.2 檢測試劑與儀器 豬肺炎支原體(Mhp)抗體檢測ELISA試劑盒購于北京IDEXX;10×Buffer,dNTPs,Taq 酶,DNAMarker,PCR 儀 (Techentc512),酶標(biāo)儀(Biotek)等。

    1.2 方法

    1.2.1 流行病學(xué)調(diào)查 2010年11月—2011年5月,對北疆13個(gè)規(guī)模豬場進(jìn)行現(xiàn)場調(diào)查和問卷調(diào)查,調(diào)查豬支原體肺炎在豬場的流行情況,包括發(fā)病的數(shù)量、年齡、病死率、發(fā)病季節(jié)、傳染源、傳播途徑、誘發(fā)因素以及主要臨床癥狀等內(nèi)容,掌握豬支原體肺炎流行的基本情況。

    1.2.2 樣品采集 無菌采集13個(gè)規(guī)模豬場不同年齡段的豬血(均未接種過豬肺炎支原體疫苗),待凝固后,4000r/min離心10min,-20℃保存。

    剖檢可疑病豬,觀察心、肺、脾等組織病理變化。按參考文獻(xiàn)[2]方法無菌采集肺臟、脾臟等病料,-20℃保存;另取病變肺臟浸泡于10%甲醛溶液中。

    1.2.3 Mhp血清學(xué)檢測 按試劑盒說明書操作。

    1.2.4 病變組織PCR檢測 DNA的提取參照文獻(xiàn)提取[3]。陽性對照為南京天邦生物科技有限公司生產(chǎn)的豬支原體肺炎活疫苗(168株)。

    PCR引物參考文獻(xiàn)[4]合成1對Mhpldh引物,上游引物 p1 為:5'-CCGTTGAAGCCTTGCTGTAT-3',下游引物 p2 為:5'-CGGTTAGTGTCTCCCGTTATG-3',擴(kuò)增片段大小為287bp。引物由上海申工公司合成。

    PCR 體系 (25 μL):10×Buffer3 μL,10mM dNTPs0.6μL,上下引物各 1μL,模板 2μL,Taq酶0.3μL,補(bǔ)ddH2O至25μL。設(shè)定以下參數(shù)進(jìn)行PCR反應(yīng):94℃預(yù)變性3min,94℃變性30S,54℃退火30S,72℃延伸40S,進(jìn)行30個(gè)循環(huán),72℃再延伸10min,4℃保存。取PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。

    1.2.5 病理組織學(xué)觀察 將通過PCR鑒定為陽性的肺臟組織,做病理切片。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果 規(guī)模豬場中Mps主要發(fā)生于秋冬季,各年齡段豬勻易感,發(fā)病率高(30%~90%),死亡率低(8%~20%),仔豬發(fā)病后死亡率高。

    病豬和帶菌豬是主要傳染源,感染母豬垂直傳染給小豬,豬群間主要通過接觸傳染。

    臨床癥狀表現(xiàn)為咳嗽、氣喘,明顯的腹式呼吸,精神沉郁,食欲減退,生長發(fā)育停滯,日漸消瘦,被毛粗亂,混合感染其它病原時(shí)常出現(xiàn)體溫升高。以慢性病例多見,病程長達(dá)數(shù)月。使用藥物治療只能減輕臨床癥狀,停藥后很快復(fù)發(fā)。寒冷、潮濕、擁擠的環(huán)境會加劇本病的發(fā)生。

    2.2 病理剖檢結(jié)果 病肺呈現(xiàn)大面積肺炎以及不同程度的氣腫;尖葉、心葉呈對稱性實(shí)變,實(shí)變區(qū)大小不一,呈“肉樣變”或“胰變”,硬度增強(qiáng),病灶與非病變區(qū)有明顯的界限(圖1)。肺門淋巴結(jié)腫大、質(zhì)硬,斷面灰白色,呈髓樣變。

    2.3 Mhp血清抗體檢測結(jié)果

    2.3.1 各豬場血清抗體檢測結(jié)果 Mhp抗體檢測結(jié)果見表1

    表1 Mhp抗體檢測結(jié)果

    結(jié)果顯示:364份血清抗體陽性率為52.2%,13個(gè)規(guī)模豬場中陽性豬場有9個(gè),豬場陽性率為69.23%;陽性率最高的豬場感染率達(dá)90%,說明部分規(guī)模豬場肺炎支原體感染情況比較普遍,個(gè)體感染情況比較嚴(yán)重。

    2.3.2 不同年齡段Mhp抗體檢測結(jié)果(見表2)

    表2 不同年齡段Mhp抗體檢測結(jié)果

    由表2可知,不同年齡段豬Mhp的感染率不同,母豬感染率高達(dá)100%,仔豬感染率相對較低。原因可能是母豬呈隱性感染帶菌或感染耐過后母豬在2~4胎后仍可攜帶此菌,哺育期仔豬與帶菌母豬接觸而被感染,此時(shí)仔豬從母乳獲得了母源抗體的保護(hù),但母源抗體不能保證新生仔豬免受感染。母源抗體從30天開始衰減,感染仔豬血清抗體逐漸轉(zhuǎn)陽[5];即使仔豬未被感染,在斷奶混群后如果與病豬和帶菌豬接觸也易被感染,豬感染肺炎支原體后需2~4周才能檢測到抗體;因此育肥豬和母豬陽性率高于仔豬。

    2.4 組織PCR檢測結(jié)果 72份病變肺臟進(jìn)行PCR檢測,結(jié)果42份陽性,陽性率為58.33%,陽性率高于血清學(xué)檢測結(jié)果。部分病變肺臟PCR檢測結(jié)果見圖2。

    2.5 病理組織學(xué)觀察 肺支氣管內(nèi)有淋巴樣細(xì)胞浸潤,夾雜有單核細(xì)胞,中性粒細(xì)胞及脫落的肺泡上皮細(xì)胞(圖3),支氣管周圍淋巴樣細(xì)胞增生(圖4),從而使肺泡之間的間隙增厚。

    3 討論

    豬支原體肺炎是豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)的重要病原之一,廣泛分布于世界各地,其死亡率雖然不高,但由于流行的廣泛性、長期性和消耗性,可使飼料轉(zhuǎn)化率降低,并引起豬的多種并發(fā)病,是造成養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟(jì)損失最重要的疾病之一[6]。常呈隱性發(fā)病,多取慢性經(jīng)過,一旦感染,便難以消除。

    血清學(xué)診斷雖然可以檢測出Mhp抗體的存在,作為診斷是否感染肺炎支原體的依據(jù),但并沒有直接檢測其病原,由于個(gè)體血清轉(zhuǎn)陽時(shí)間差異較大,因此僅僅依靠血清學(xué)診斷來確診其感染支原體還不夠。

    利用PCR方法進(jìn)行豬肺炎支原體的檢測,為確定豬感染率提供了更加精確的方法[7]。本試驗(yàn)用于PCR檢測病變肺臟的Mhpldh(乳酸脫氫酶)引物,具有種特異性,能與其它種類的支原體(如豬鼻支原體)相區(qū)分[8],進(jìn)一步提高了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,血清學(xué)方法和PCR方法結(jié)合可得到滿意的診斷結(jié)果。

    本研究首次系統(tǒng)地進(jìn)行了新疆北疆部分規(guī)模豬場Mhp的流行病學(xué)調(diào)查,初步查明了Mhp的感染情況和流行規(guī)律,為該病的診斷和制定有效防控措施提供了科學(xué)依據(jù)。

    [1]周緒斌,DanielT,李聰,等.規(guī)?;i場肺炎支原體血清學(xué)動態(tài)監(jiān)測與啟示[J].豬業(yè)科學(xué),2008(8):90-94.

    [2]農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局.NY/T541-2002動物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2002.

    [3]劉茂軍,張映,邵國青,等.豬支原體肺炎可疑肺組織PCR檢測方法的建立 [J].山西業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2009,29(5):444-447.

    [4]薛云,趙戰(zhàn)勤,陳楊,等.多重PCR方法快速檢測豬的5種呼吸道病原菌[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2009,40(8):1222-1228.

    [5]嵇辛勤,段志強(qiáng),華再東,等.香豬場肺炎支原體的血清學(xué)調(diào)查與分析[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2009(9):92-93.

    [6]李彥明,張映.豬肺炎支原體及其生物學(xué)研究進(jìn)展[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2003,24(3):25-27.

    [7]Marina Sibila,Maria Pieters,Thomas Molitor,etal.有關(guān)豬肺炎支原體感染診斷方法和流行病學(xué)的最新觀點(diǎn)[J].沈權(quán),譯.國外畜牧學(xué) -豬與禽,2009,29(3):4-10.

    [8]Caron J,Ouardani M,Dea S.Diagnosis and differentiation ofmycoplasma hyopneumoniae and Mycoplasma hyorhinis infectionin pigs by PCR amplification of the p36 and p46 genes [J].JClin Microbiol,2000,38(4):1390-1396.

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