膠體金免疫層析技術(shù)在水產(chǎn)品快速檢測(cè)中的應(yīng)用

杜紅梅

（常德市畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)局，湖南 常德 415000）

免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)，是由Faulk和Taytor發(fā)明的一種免疫學(xué)方法，在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域得到了日益廣泛的應(yīng)用，現(xiàn)已應(yīng)用到電鏡、光鏡、凝集試驗(yàn)、體外診斷、斑點(diǎn)滲濾及免疫層析等方面。膠體金免疫層析技術(shù)以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，成為現(xiàn)今快速、靈敏、方便的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)之一，并開(kāi)始逐漸應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的多個(gè)領(lǐng)域。

1 膠體金免疫層析技術(shù)概述

1.1 基本原理

氯金酸在還原劑如鞣酸、枸櫞酸鈉、白磷、抗壞血酸等作用下，會(huì)聚合成一定大小的金顆粒，并在靜電作用下形成穩(wěn)定的膠體溶液。該膠體溶液疏水，帶負(fù)電，被稱為膠體金。膠體金粒子對(duì)蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附功能，在弱堿環(huán)境下可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)牢固結(jié)合。牛血清白蛋白多肽綴合物、葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、抗生素、激素、毒素、酶等都能與膠體金進(jìn)行非共價(jià)結(jié)合，因而是基礎(chǔ)研究和臨床試驗(yàn)中非常有用的工具。膠體金的物理性狀與結(jié)合物的免疫學(xué)和生物學(xué)特性，使其廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。

膠體金免疫層析技術(shù)是膠體金標(biāo)記技術(shù)結(jié)合抗原抗體反應(yīng)的一種應(yīng)用形式。先將特異性的抗原或抗體呈條帶狀固定在試紙膜上；然后將膠體金標(biāo)記試劑（通常是一些抗體或單克隆抗體）吸附在試紙膜的結(jié)合墊上；當(dāng)待檢樣本添加到試紙膜一端的樣本墊之后，樣本在毛細(xì)作用下向前移動(dòng)，先與結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑相互結(jié)合，再帶動(dòng)待檢樣本與金標(biāo)試劑的結(jié)合物移動(dòng)至特異性的抗原或抗體區(qū)域，結(jié)合物與抗原或抗體發(fā)生特異結(jié)合而被截留在固定的位置，顯示在檢測(cè)帶上，可通過(guò)肉眼觀察到顯色結(jié)果。

1.2 特 點(diǎn)

與其他標(biāo)記技術(shù)相比，膠體金免疫層析技術(shù)有以下特點(diǎn)：易制備，成本低；可同時(shí)檢測(cè)多種物質(zhì)；對(duì)組織細(xì)胞的非特異性吸附作用小，具有高度特異性和高敏感性；不僅可用于光鏡，也可用于透射電鏡和掃描電鏡；檢測(cè)結(jié)果直接用顏色顯示，肉眼判斷直觀可靠；操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)少。膠體金免疫層析技術(shù)實(shí)現(xiàn)了檢測(cè)技術(shù)的“快速、簡(jiǎn)便、特異、敏感”，因此廣泛應(yīng)用到生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。

1.3 分 類

1.3.1 雙抗體夾心法 主要用于檢測(cè)生物大分子及顆粒性抗原（蛋白質(zhì)、病毒、細(xì)菌等）。大分子抗原一般有多個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，可同時(shí)檢測(cè)多種抗體，一般采取單抗和多抗配對(duì)或單抗和單抗配對(duì)的形式進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 雙抗原夾心法 其特別之處在于：（1）被包被和標(biāo)記的均為抗原，檢測(cè)時(shí)樣品首先與被標(biāo)記的抗原結(jié)合，再與被包被的抗原結(jié)合；（2）檢測(cè)的是總抗體，即IgG、IgM、IgA等特異性抗體均可作為搭橋抗體而產(chǎn)生陽(yáng)性結(jié)果；（3）同一種檢測(cè)試劑檢測(cè)不同種屬的抗體，既可檢測(cè)人血清抗體，亦可檢測(cè)動(dòng)物血清抗體，對(duì)人獸共患病的檢測(cè)非常方便；（4）特異性和敏感度易于控制，檢測(cè)精確度高。

1.3.3 捕獲法 主要用于感染人體后病原微生物產(chǎn)生的特異性抗體的檢測(cè)，因?yàn)檫@些病原微生物主要寄生于細(xì)胞內(nèi)，難于直接檢測(cè)其特異性抗原，例如艾滋病毒、風(fēng)疹病毒、乙腦病毒、丙肝病毒、麻疹等。對(duì)于標(biāo)本較難采集的病原體，也可采用此方法檢測(cè)。

1.3.4 競(jìng)爭(zhēng)抑制法 主要用于小分子物質(zhì)的檢測(cè)，因小分子通常只有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，不能同時(shí)結(jié)合兩個(gè)抗體，所以不能采用雙抗體夾心法檢測(cè)。目前對(duì)體液中小分子肽、農(nóng)藥殘留、濫用藥物的檢測(cè)等均采用此方法。

2 膠體金免疫層析技術(shù)在水產(chǎn)品檢測(cè)中的應(yīng)用

我國(guó)是一個(gè)水產(chǎn)品生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)。目前，我國(guó)水產(chǎn)品質(zhì)量雖然已有了明顯的提高，但隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人口的增長(zhǎng)，水產(chǎn)品賴以生存的土壤、水質(zhì)等遭受不同程度的污染，導(dǎo)致水產(chǎn)品受到危害，影響其質(zhì)量。另外在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)及加工的過(guò)程中，魚(yú)藥、飼料及添加劑，特別是明令禁止藥物的違規(guī)使用，再加上國(guó)內(nèi)水產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系建設(shè)的滯后，致使水產(chǎn)品質(zhì)量安全存在著嚴(yán)重的問(wèn)題。因此，運(yùn)用現(xiàn)代化檢測(cè)手段，加強(qiáng)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的質(zhì)量監(jiān)督，具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。

近年來(lái)，隨著免疫學(xué)、分子生物學(xué)和儀器自動(dòng)化的飛速發(fā)展，各種檢測(cè)的新技術(shù)、新方法不斷涌現(xiàn)，如高效液相色譜法、氣相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用等色譜分析法；酶聯(lián)免疫吸附法、免疫磁珠技術(shù)等免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)等分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)等。但是，這些檢測(cè)方法成本較高、耗時(shí)長(zhǎng)、操作復(fù)雜，在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中有很大的局限性。因此，“快速、簡(jiǎn)便、特異、敏感”的膠體金免疫層析技術(shù)便成為研究的熱點(diǎn)。

應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù)檢測(cè)水產(chǎn)品中的霍亂弧菌已有報(bào)道。另外，采用膠體金免疫層析技術(shù)對(duì)水產(chǎn)品中的四環(huán)素類、磺胺甲噁唑、氯霉素、孔雀石綠等藥物殘留的檢測(cè)研究表明，該方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果判定不需要儀器，成本較低，可用于基層單位的初篩定性檢測(cè)。

3 膠體金免疫層析技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)

由于膠體金免疫層析技術(shù)是基于抗原抗體特異性反應(yīng)進(jìn)行的檢測(cè)，所以在檢測(cè)實(shí)際樣本時(shí)，由于待檢樣品種類繁多，成分復(fù)雜，容易影響抗原抗體反應(yīng)以及膠體金顆粒與蛋白的吸附，造成假陽(yáng)性結(jié)果。因此，要針對(duì)這個(gè)不足之處繼續(xù)研究膠體金免疫層析技術(shù)在水產(chǎn)品檢測(cè)中的應(yīng)用，以提高檢測(cè)的靈敏度，提高質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)的半定量和定量化。

綜上所述，膠體金免疫層析技術(shù)作為一種新型的免疫學(xué)快速診斷和檢測(cè)技術(shù)，將會(huì)逐步完善與發(fā)展，在水產(chǎn)品的快速檢測(cè)中具有很好的應(yīng)用前景。

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