幽門螺桿菌感染與原發(fā)性肝癌相關性研究*

覃月秋 黃贊松

右江民族醫(yī)學院消化疾病研究所消化內(nèi)科，廣西 百色 533000

原發(fā)性肝癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，死亡率在消化系惡性腫瘤中居第3位，僅次于胃癌、食管癌。原發(fā)性肝癌發(fā)病原因目前尚未完全明確，主要與肝硬化、乙型和丙型肝炎病毒感染、黃曲霉素、寄生蟲、酒精、飲用水污染等因素有關，約10%左右的肝癌患者發(fā)病原因不明。幽門螺桿菌（helicobacter pylori，Hp）是一種螺旋狀、寄生于消化道的微需氧的革蘭氏陰性菌，于1983年由澳大亞學者Warren和Marshall從慢性胃炎患者胃黏膜中分離并培養(yǎng)出來。全球自然人群中Hp感染率超過50%，我國感染率為40%～90%，平均為59%。Hp與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃癌及胃黏膜相關性淋巴樣組織樣（MALT）惡性淋巴瘤發(fā)生的密切聯(lián)系已得到醫(yī)學界的認可，并于1994年被世界衛(wèi)生組織列為Ⅰ類致癌物，而Hp感染與胃腸外疾病的關系也越來越引起醫(yī)學界的廣泛關注，其中Hp感染與肝臟疾病，特別是原發(fā)性肝癌的關系是近年研究的新熱點。近年研究表明Hp感染可能與肝癌的發(fā)生有一定的相關性[1-2]。本研究就Hp感染與原發(fā)性肝癌研究進展作一綜述。

1 Hp感染與原發(fā)性肝癌相關性研究

1.1 國外研究

1994年學者Ward JW、Fox JG等[3-4]從小鼠肝組織分離、檢測發(fā)現(xiàn)肝螺桿菌（Hp）后引發(fā)了人們對肝臟疾病與螺桿菌關系的思考:肝螺桿菌與Hp是否同源？人肝臟組織是否存在Hp？人類肝臟疾病與Hp感染有無相關性？學者們就此展開了大量研究。Avenaud P等[5]應用聚合酶鏈反應（PCR）檢測8例原發(fā)性肝癌、肝內(nèi)膽管癌組織，結果發(fā)現(xiàn)有螺桿菌16S rRNA基因的存在，陽性率達100%，進一步的測序結果表明與Hp有97～99%的同源性，而對照非肝癌組僅1例陽性，證實人肝癌組織中存在Hp感染，且感染率很高。Nilsson HO等[6]應用PCR及DNA測序檢測16例原發(fā)性肝細胞癌和14例肝內(nèi)膽管癌標本，發(fā)現(xiàn)75%(12/16）原發(fā)性肝癌組織螺桿菌16S rRNA基因陽性，71.4%(10/14）膽管癌組織螺桿菌16S rRNA基因陽性，而作為對照的20例肝轉移瘤無一例陽性，測序證實與Hp或HH同源性最高，分析后認為Hp感染與原發(fā)性肝細胞癌和原發(fā)性肝內(nèi)膽管癌的發(fā)生密切相關。Ponzetto A等[7]檢測70名丙肝肝硬化患者血清抗Hp IgG抗體，其中54例陽性，陽性率為77.2%，310例對照組中183例陽性，陽性率為59%，兩者有顯著差異。用PCR方法檢測25例伴有肝硬化的原發(fā)性肝癌患者手術切除標本，92%(23/25）陽性，測序結果與Hp相近，認為Hp在丙肝肝硬化患者和肝癌患者的發(fā)病過程中起重要作用。

1.2 國內(nèi)研究

范學工等[8]研究96例慢性乙型肝炎患者Hp感染情況，結果乙肝患者感染率為57.3%，而對照組僅42.3%，其中HBeAg、HBV-DNA陽性者Hp感染率高達75.6%，提示Hp感染可能對乙肝病毒的復制有促進作用。黃燕等[9]用PCR檢測38例肝癌患者肝組織中螺桿菌感染情況，結果發(fā)現(xiàn)52.6%(20/38）的肝癌組織中發(fā)現(xiàn)螺桿菌存在，而非肝癌組無一例陽性（P＜0.01），PCR擴增產(chǎn)物測序分析顯示與Hp有99%～100%的同源性。宣世英等[10]應用PCR及原位雜交技術檢測21例肝癌組織，13例標本中證實有螺桿菌16S rRNA存在，而對照組（12例)無陽性檢出（P＜0.01），測序結果顯示，肝癌組織螺桿菌屬16SrRNA序列與Hp的16S rRNA序列97.8%的同源性。鄭盛等[11]采用碳-14呼氣法檢測85原發(fā)性肝癌患者及289健康體檢者幽門螺桿菌感染情況，結果原發(fā)性肝癌患者陽性率達85.5%，而健康體檢者陽性率僅40.4%；用ELISA法檢測幽門螺桿菌抗體（Hp-CagA-IgG），結果原發(fā)性肝癌患者陽性率達85.0%，而健康體檢者陽性率僅22.5%，原發(fā)性肝癌患者存在高的幽門螺桿菌感染率，提示幽門螺桿菌感染與原發(fā)性肝癌有相關性。

國內(nèi)外研究結果表明，人肝臟組織中存在螺桿菌，該菌與Hp高度同源，提示Hp感染可能與各種肝臟疾病，尤其是肝癌的發(fā)生有一定的相關性。

2 Hp感染肝組織的可能途徑

過去長期認為Hp僅寄生于胃黏膜，但近年來這一觀點受到挑戰(zhàn)。近年研究人員在膽汁、膽道黏膜及肝臟中檢測到Hp的存在，并對其入肝途徑作出推測。Myung SJ[12]用PCR檢測43例肝膽管疾病患者的肝內(nèi)膽汁、膽管組織、膽石標本，結果以Hp 26 Kda蛋白為引物者陽性率為9.3%（4/43），以Hp尿素酶A基因為引物者陽性率為11.6%（5/43），而對照組均為陰性，陽性患者肝內(nèi)膽汁PH值較陰性者明顯下降，提示肝內(nèi)膽汁pH值的降低可能有利于患者Hp的生存。陳東風等[13]用W-S銀染色法和免疫組化染色法檢測524例膽囊炎手術標本石蠟切片，71例（13.55%）鏡下觀察到類似Hp的細菌，37例（7.1%）Hp抗體染色陽性；用Hp尿素酶A、B基因引物對81例慢性膽囊炎手術切除新鮮標本膽囊黏膜DNA行PCR擴增，結果11例（13.6%）尿素酶A、B基因皆陽性，4例僅有尿素酶A基因陽性，7例僅有尿素酶B基因陽性，提示部分慢性膽囊炎患者膽囊內(nèi)確有Hp存在。目前研究提示Hp可能經(jīng)奧狄氏括約肌逆流至膽道進入肝臟，也可能是Hp通過門靜脈循環(huán)或淋巴循環(huán)到達肝臟，然后進一步排泄到膽汁中。此外，研究還發(fā)現(xiàn)Hp感染有可能導致菌血癥。研究者采用PCR法，在經(jīng)動脈內(nèi)膜切除的頸動脈粥瘤及動脈粥樣硬化斑塊中檢測出了Hp DNA，提示Hp可以通過菌血癥這一途徑到達肝臟[14-15]。

3 Hp導致肝癌發(fā)生、發(fā)展的機制

Hp導致肝癌發(fā)生、發(fā)展的確切機制尚未明了，目前研究認為Hp在腫瘤發(fā)生中的機制主要包括以下幾個方面:Hp自身及其代謝產(chǎn)物的影響；Hp感染繼發(fā)炎癥過程中釋放多種細胞因子、自由基及一氧化氮等多因素協(xié)同作用[16-18]。張艷等[19]報道，CagA+Hp能夠不同程度地上調(diào)體外培養(yǎng)肝細胞的Cyclin D1及增生細胞核抗原（PCNA）的表達，進而引起肝細胞增生動力學的異常。他們的研究還發(fā)現(xiàn)，CagA+Hp可誘導人肝細胞系HepG2原癌基因C-fos表達升高，提示Hp的CagA毒力因子在肝癌的發(fā)生上可能起一定作用[20]。陳仁等[21]利用體外細胞培養(yǎng)技術，將不同濃度的CagA（+）Hp和CagA（-）Hp與肝癌細胞HepG2共同培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)隨著CagA（+）Hp菌液濃度的增大和作用時間的延長，HepG2細胞形態(tài)由貼壁的梭形變?yōu)閳A形，貼壁細胞減少，懸浮細胞增多，并且細胞周圍出現(xiàn)碎片，其殺傷率及HepG2細胞凋亡率隨CagA（+）Hp菌液濃度增加逐漸增強。張福星等[22]研究了180例原發(fā)性肝癌癌組織的石蠟標本，發(fā)現(xiàn)高侵襲性組原發(fā)性肝細胞癌Hp16S rRNA陽性率（86.44%）顯著高于低侵襲性組（58.06%），Hp16S rRNA陽性的原發(fā)性肝癌標本中Transgelin及Integrin2的表達水平均顯著高于Hp16S rRNA陰性標本，認為Hp感染與肝癌的侵襲轉移密切相關，其機制與Hp促進肝細胞Transgelin及Integrinu2的表達有關。

4 Hp感染肝組織的病因學意義

研究認為Hp感染在肝炎向肝硬化、肝癌發(fā)展過程中起橋梁或協(xié)同作用[23]。季尚瑋等[24]應用酶聯(lián)免疫吸附法檢測502例HBV感染患者和429名健康對照者血清抗Hp-IgG。同時56例肝穿刺活檢組織進行PCR擴增，結果發(fā)現(xiàn)HBV感染患者血清抗HpIgG陽性率（63.9%）顯著高于健康對照者（43.4%），其中肝癌組、肝硬化組、慢性乙型肝炎組陽性率分別為80.6%、77.1%、59.5%。56例肝穿刺活檢患者中，35例肝組織中發(fā)現(xiàn)螺桿菌菌屬特異性16SrRNA基因，其中肝硬化組17例，肝癌組7例，慢性乙型肝炎組11例。進一步的擴增結果證實35例中21例為HpDNA。認為螺桿菌在慢性乙型肝炎向肝硬化和肝癌的發(fā)展過程中可能發(fā)揮致病作用。此外他們還用實時熒光定量聚合酶鏈反應(FQ-PCR)方法檢測了慢性丙型肝炎組、丙型肝炎肝硬化組和合并肝癌組HCV-RNA的含量，結果發(fā)現(xiàn)Hp在慢性丙型肝炎組、丙型肝炎肝硬化組和合并肝癌組的感染率（55.5%、76.5%、78.6%）明顯高于健康對照組（43.4%， P＜0.05），Hp感染率與病變嚴重程度呈正相關。認為Hp在慢性丙型肝炎向肝硬化和肝癌的發(fā)展過程中可能與HCV發(fā)揮協(xié)同作用[25]。

肝癌的發(fā)生是多因素長期作用的結果，肝炎病毒感染是肝癌發(fā)生的重要病因之一，Hp可能通過促進肝炎病毒的復制在肝炎向肝癌發(fā)展過程中起橋梁或協(xié)同作用；或者Hp感染有可能本身即是肝癌的另一個獨立致病因素？這尚需進一步研究證實。

5 問題與展望

Hp感染可能對原發(fā)性肝癌的發(fā)生、發(fā)展起著重要的作用。然而目前的研究僅為初步探討，Hp感染與原發(fā)性肝癌之間的確切關系需如何？其作用機制如何？Hp感染與嗜肝病毒在肝癌的發(fā)生過程中的相互關系如何？如何從肝組織中分離培養(yǎng)出Hp并建立相應的動物模型？解決這些問題還將有大量的研究工作有待完成。隨著這些研究的深入開展，Hp感染與原發(fā)性肝癌的關系將進一步明了，這將為抗感染和疫苗注射防治肝癌可能提供理論基礎。

[1]De Magalhaes,Queiroz DM,Santos A. Isolation of a helicobacter strain from the human liver[J]. Gastroenterology,2001,121(4):1023-1024.

[2]Pellicano R,Mazzaferro V,Grigioni WF,et a1.Helicobacter species sequences in liver samples from patients with and without hepatocellular arcinoma[J].World J Gastroenterol,2004,10(41):598-601.

[3]Ward JM,Fox JG,Anver MR,et al. Chronic active hepatitis and associated liver tumors in mice caused by a persistent bacterial infection with a novel Helicobacter species[J]. J Natl Cancer Inst,1994,86:1222-1227.

[4]Fox JG,Yan L,Shames B,et a1.Persistent hepatitis and enterocolitis in germfree mice infected with Helicobacter hepaticus[J].Infect Immun,1996,64:3673-3681.

[5]Avenaud P,Marais A,Monteiro L,et a1.Detection of helicobacter species in the liver of patients with and without primary liver carcinoma[J].Cancer,2000,89(7):1431-1439.

[6]Nilsson HO,Mulchandani R,Tranberg KG,et a1.Helicobacter species identifled in liver from patients with cholangiocarcinoma and hepatocellular carcinoma[J].Gastroenterology,2001,120:323-324.

[7]Ponzetto A，Pellicano R，Leone N，et a1. Helicobacter infection and cirrhosis in hepatitis C virus carriage:is it an innocent bystander or a troublemaker[J].Med Hypotheses,2000,54:275-277.

[8]Fan XG,Zou YY，Wu AH,et a1.Seroprevalence of Helicobacter pylori infection in patients with hepatitis B[J].Br J Biomed Sci,1998,55:176-178.

[9]黃燕，范學工，陳永平，等.肝癌組織中螺桿菌16S rRNA基因的檢測[J].世界華人消化雜志，2002，78（10）:877-882.

[10]宣世英，李寧，施永新.螺桿菌感染與原發(fā)性肝癌的相關性研究[J].中華醫(yī)學雜志，2005，85（6）:391-395.

[11]鄭盛，肖瓊怡，殷芳.幽門螺桿菌感染與原發(fā)性肝癌的相關性研究[J].中國臨床實用醫(yī)學雜志，2010，4（1）:83-84.

[12]Myung SJ,Kim MH,MD KI,et a1.Detection of Helicobacter pylori DNA in human biliary tree and its association with hepatolithiasis[J].Dig Dis Sci,2000,45(7):1405-1412.

[13]陳東風，胡輅，易萍，等.人膽囊炎標本中幽門螺桿菌的檢出及意義[J].世界華人消化雜志，2004，12（8）:1814-1817.

[14]Danesh J,Koreth J,Youngman L,et a1.Is Helicobacter pylori a factor in coronary atherosclerosis?[J].J Clin Microbiol,1999，37:1651-1655.

[15]Farsak B,Yildirir A,Akyon Y,et a1.Detection of Chl amydia pneumoniae and Helicobacter pvlor DNA in human atherosclerotic plaques by PCR[J].J Cli n Microbiol,2000,38:4408-4411.

[16]胡伏蓮，周殿元，賈博琦.幽門螺桿菌感染的基礎與臨床[M]. 北京：中國科學技術出版社，1997:366-369.

[17]Suganuma M,Kurusu M,Okabe S,et a1.Helicobacter pylori membrane protein 1:a new carcinogenic factor of helicobacter pylofi[J].Cancer Res,2001,61(17):6356-6359.

[18]Shibayama K,Doi Y,Shibata N,et a1.Apoptotic Signaling PathwayActivated by Helicobacter pylori Infection and Increase of Apoptosis-Indudng Activity under Serum-Starved C0nditions [J].Infection and Immunity,2001,69(5):3181-3189.

[19]張艷，范學工，田雪飛，等.幽門螺桿菌對肝細胞系HepG2 cyclinD1，PCNA mRNA表達的影響[J].世界華人消化雜志，2004，12:93-96.

[20]張艷，范學工，陳仁，等.幽門螺桿菌對人肝細胞系HepG2原癌基因c-fos表達的影響[J].中國人獸共患病雜志，2004，20:690-694.

[21]陳仁，范學工，黃燕，等.幽門螺桿菌對肝癌細胞 HepG2的體外細胞毒作用 [J].癌癥，2004，23（1）:44-49.

[22]張福星，張思宇，蘇國強，等.幽門螺桿菌感染與原發(fā)性肝癌侵襲轉移的關系 [J].臨床腫瘤學雜志，2010，15（2）:123-126.

[23]Fagoonee S,Pellicano R,Rizzetto M,et a1.The journey from hepatitis to hepatocellular carcinoma. Bridging role of Helicobacter species[J]. Panminerva Med,2000,43:279-281.

[24]季尚瑋，王江濱，張永貴.慢性乙型肝炎病毒感染患者血清及肝組織中抗幽門螺桿菌抗體及特異性基因分析[J].中華消化雜志，2009，29（8）:505-509.

[25]季尚瑋，張永貴，王江濱.慢性丙型肝炎患者幽門螺桿菌感染及其相關因素分析[J].世界華人消化雜志，2008，16（5）:535-539.