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    中藥成分抗白念珠菌的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

    2011-08-15 00:47:50鄭玉榮劉濤峰張虹亞
    關(guān)鍵詞:防己甲素穿心蓮

    鄭玉榮,劉濤峰,張虹亞

    (1.安徽中醫(yī)學(xué)院,合肥230038;2.安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院,合肥 230031)

    隨著艾滋病蔓延、器官移植和介入性診療的普遍開展以及糖皮質(zhì)激素、抗菌藥物和化療藥物的廣泛應(yīng)用,免疫力低下人群不斷增多,以白念珠菌為代表的真菌感染性疾病的發(fā)生率正逐年上升。同時(shí)由于臨床上有限抗真菌藥物的大量使用,使真菌產(chǎn)生耐藥性的情況日益嚴(yán)重,因此亟需研發(fā)高效低毒的抗真菌藥物。目前科技工作者們通過分析中醫(yī)古代文獻(xiàn)資料,利用現(xiàn)代技術(shù)和工藝已從中藥中分離提純了許多有效的抗真菌藥物成分如黃芩苷、大蒜素、紫草素、苦參堿等,現(xiàn)綜述如下。

    1 黃芩苷

    黃芩苷是清熱燥濕類中藥黃芩的主要有效成分。研究表明,黃芩苷對多種細(xì)菌與皮膚致病性真菌等病原微生物具有較強(qiáng)的抑制作用[1]。汪長中等[2]研究黃芩苷對白念珠菌芽管形成及白念珠菌黏附人口腔上皮細(xì)胞及陰道上皮細(xì)胞的影響。結(jié)果提示黃芩苷對體外白念珠菌的芽管形成及黏附性有較強(qiáng)的抑制作用。該課題組[3-4]又研究了黃芩苷對體外白念珠菌及非白念珠菌生物膜的影響。結(jié)果提示黃芩苷對體外白念珠菌及光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌等生物膜均有較強(qiáng)的抑制作用,因而提示黃芩苷對多種真菌生物膜都具有干預(yù)作用。

    2 大蒜素

    大蒜素是從大蒜中分離出的含巰基的化合物。它是一種天然抗菌藥物,具有廣譜的抗微生物活性[5],而且具有免疫調(diào)節(jié)功能[6]。熊延靖等[7]探討大蒜素抗白念珠菌感染的免疫學(xué)機(jī)制,以期為系統(tǒng)性白念珠菌感染的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。結(jié)果提示大蒜素能夠有效提高正常感染小鼠和免疫功能低下小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞增殖活性和干擾素(IFN)-γ水平,并能降低組織中白念珠菌活菌數(shù)目。臨床上真菌感染的發(fā)生多由于細(xì)胞免疫功能低下所引起,因此提高受抑制的免疫功能對于機(jī)體抗感染具有重要意義,大蒜素在提高機(jī)體的細(xì)胞免疫功能方面的顯著作用,使得其在今后臨床應(yīng)用中將有更為廣闊的前景。王煥麗等[8]同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)大蒜素對體外白念珠菌生物膜有較明顯的抑制作用。

    3 苦參堿

    苦參堿是清熱解毒類中藥苦參的有效成分之一。吳嵐等[9]建立白念珠菌生物膜體外模型,觀察中藥有效成分苦參堿對生物膜活性及超微結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果苦參堿對不同生長階段(早、中、成熟期)的白念珠菌生物膜均有抑制作用,隨著生物膜成熟度的增加,耐藥性增強(qiáng);激光共聚焦掃描顯微鏡死菌/活菌熒光染色觀察發(fā)現(xiàn),苦參堿可影響白念珠菌生物膜中細(xì)胞的形態(tài)及代謝狀態(tài)。該研究表明苦參堿對預(yù)防白念珠菌生物膜形成及治療白念珠菌生物膜引起的相關(guān)感染具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。該課題組[10]還研究了不同濃度苦參堿對白念珠菌黏附人口腔黏膜上皮細(xì)胞的影響,結(jié)果苦參堿預(yù)作用白念珠菌后,可以明顯減少其對人口腔黏膜上皮細(xì)胞的黏附數(shù)。

    4 肉桂醛

    肉桂油是肉桂和香油加熱過濾配制而成,主要成分是肉桂醛。馬耀輝等[11]探討肉桂油治療胃白念珠菌感染的可行性。該學(xué)者制作胃白念珠菌感染小鼠120只,隨機(jī)分為4組,每組30只。肉桂油治療組分3組,每日分別給予1mL1.25g/L、1.88g/L、2.5g/L肉桂油溶液灌胃,對照組每日給予50g/L葡萄糖溶液1mL灌胃,10d后取小鼠胃組織行真菌鏡檢及組織病理檢查發(fā)現(xiàn)3個(gè)濃度的肉桂油治療組的真菌鏡檢及組織病理檢查陽性率均顯著低于對照組(均P<0.01),肉桂油治療組之間比較無差異性(P>0.05)。結(jié)果說明三種濃度肉桂油均可殺死小鼠胃內(nèi)的白念珠菌。

    5 漢防己甲素

    漢防己是天然藥用植物,有著作用溫和、價(jià)廉且來源廣等特點(diǎn)。李豐霞等[12]研究發(fā)現(xiàn)漢防己甲素在體外對氟康唑抗白念珠菌菌絲相活性有增效作用;漢防己甲素可抑制白念珠菌菌絲相藥物外排泵的功能。另外,本實(shí)驗(yàn)組還發(fā)現(xiàn)漢防己甲素在小鼠陰道腔內(nèi)能增強(qiáng)氟康唑抗白念珠菌活性,這為唑類藥物聯(lián)合漢防己甲素治療人類的白念珠菌病提供了進(jìn)一步的依據(jù)。若能證實(shí)漢防己甲素局部外用無明顯不良反應(yīng),則可考慮用漢防己甲素聯(lián)合氟康唑等唑類藥物治療外陰陰道念珠菌病等白念珠菌病,從而減少唑類藥物的用量、不良反應(yīng)及縮短療程。

    6 土槿乙酸

    土槿乙酸是從我國的松科植物金錢松的根皮及近根皮(土槿皮)中分離出的主要成分之一,為二萜類化合物。董小青等[13]測定土槿乙酸對白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株C1a的最低抑菌濃度(MIC),并在透射電鏡下觀察經(jīng)土槿乙酸作用后,白念珠菌超微結(jié)構(gòu)的改變,探討其作用機(jī)制,從而為抗白念珠菌的中藥開發(fā)提供理論依據(jù)。測定結(jié)果土槿乙酸對白念珠菌C1a的MIC為32μg/mL,且經(jīng)透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)經(jīng)土槿乙酸處理后的白念珠菌C1a的細(xì)胞變形,結(jié)構(gòu)模糊,細(xì)胞壁疏松,有裂口,細(xì)胞膜連續(xù)性破壞,進(jìn)而破碎成碎片互相融合,細(xì)胞器腫脹乃至壞死溶解,甚至胞漿內(nèi)容物全部漏出呈“空殼”狀。結(jié)果提示土槿乙酸有抗白念珠菌作用,可能通過破壞白念珠菌的細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核的結(jié)構(gòu)而達(dá)到抗真菌作用。

    7 牡蠣抗菌蛋白

    牡蠣是一種廣泛分布于沿海城市的常見海洋貝類生物,其殼為傳統(tǒng)的中藥材,現(xiàn)牡蠣軟體即牡蠣肉的應(yīng)用也逐漸廣泛。蘭曉明等[14]觀察了牡蠣軟體中提取的抗菌蛋白對分離的致病性念珠菌超微結(jié)構(gòu)的影響。該學(xué)者取臨床分離的白念珠菌,暴露于抗菌蛋白中24h,應(yīng)用透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果經(jīng)4h抗菌蛋白作用,白念珠菌菌體變?yōu)闄E圓形,細(xì)胞壁松弛,細(xì)胞質(zhì)固縮;16h后菌體呈圓球形,細(xì)胞壁邊緣呈毛狀,殘缺并且明顯腫脹,胞漿內(nèi)容變空,細(xì)胞器幾乎消失,胞核不清;24h后菌體呈不規(guī)則形,細(xì)胞壁缺失,細(xì)胞質(zhì)解體出現(xiàn)空腔。該研究結(jié)論說明抗菌蛋白對白念珠菌有較強(qiáng)的抗菌作用。

    8 穿心蓮內(nèi)酯

    穿心蓮為爵床科植物穿心蓮的干燥地上部分,有效成分為內(nèi)酯類和黃酮類化合物[15]。汪長中等[16]采用XTT減低法評價(jià)穿心蓮內(nèi)酯對白念珠菌生物膜及其黏附性的影響,鏡下觀察穿心蓮內(nèi)酯對白念珠菌生物膜的形態(tài)學(xué)影響及通過細(xì)胞毒性試驗(yàn)檢測該藥的毒副作用。該研究結(jié)果提示穿心蓮內(nèi)酯對白念珠菌生物膜最低藥物濃度50(sessile minimal inhibitory concentration50,SMIC50)(抑制生物膜50%)及SMIC80(抑制生物膜 80%)分別是 250μg/mL、1 000μg/mL,且 1 000μg/mL 及100μg/mL的濃度對白念珠菌的早期黏附及菌絲生長有抑制作用,該實(shí)驗(yàn)還證實(shí)穿心蓮內(nèi)酯對人細(xì)胞毒性較弱。

    9 大黃酚

    大黃酚是中藥大黃的有效成分之一。汪長中等[17]研究大黃酚對體外白念珠菌生物膜的影響,采用XTT減低法評價(jià)大黃酚對白念珠菌的生物膜及黏附性的影響,鏡下觀察該藥對白念珠菌生物膜的形態(tài)學(xué)影響,細(xì)胞毒試驗(yàn)檢測該藥的毒副作用。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果大黃酚抑制白念珠菌生物膜的SMIC50及 SMIC80 的藥物濃度分別為 125μg/mL、1 000μg/mL,且100μg/mL及1 000μg/mL濃度的大黃酚對白念珠菌的早期黏附及菌絲生長有抑制作用,本實(shí)驗(yàn)也證實(shí)大黃酚對人細(xì)胞毒性較弱。

    10 蒺藜甾體皂苷

    蒺藜即蒺藜科蒺藜屬植物蒺藜,其果實(shí)為傳統(tǒng)中藥材。陸文銓等[18]觀察蒺藜甾體皂苷類化合物TTS-12對白念珠菌生物膜形成的影響,探討其可能的作用機(jī)制。結(jié)果經(jīng)TTS-12處理的白念珠菌生物膜結(jié)構(gòu)疏松,TTS-12可劑量依賴性地抑制白念珠菌生物膜的形成,其生長動力學(xué)及細(xì)胞表面疏水性值下降,白念珠菌細(xì)胞表面疏水性1(cell surface hydrophobicity1,CSH1)基因表達(dá)水平降低(P<0.01)。結(jié)論提示TTS-12可能通過降低白念珠菌CSH1基因表達(dá)來抑制白念珠菌生物膜的形成。

    11 結(jié)語

    隨著真菌性疾病發(fā)生率的逐年上升,真菌耐藥情況的日益嚴(yán)重,為了尋找和開發(fā)無污染、不良反應(yīng)小、安全有效的抗真菌藥物,我國醫(yī)藥學(xué)研究者開始關(guān)注于中藥的抗真菌作用,他們對此做了大量的研究并證實(shí)了某些中藥成分的抗真菌活性。相信現(xiàn)已研究出的以及尚待研究的具有抗真菌活性的中藥成分將會被提取出并逐步運(yùn)用于臨床,為真菌性疾病的治療提供新的思路及方法。

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    [4]汪長中,程惠娟,張雄飛,等.黃芩苷對非白念珠菌生物膜抑制作用的研究[J].中國中藥雜志,2010,35(5):639-641.

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    [7]熊延靖,董群.大蒜素抗白念珠菌感染的免疫學(xué)機(jī)制[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2010,15(8):866-870.

    [8]王煥麗,張錫寶,陳興平.大蒜素體外抗白念珠菌生物膜作用的初步研究[J].中國真菌學(xué)雜志,2010,5(3):129-132.

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    [11]馬耀輝,鄧潔華,王剛生,等.肉桂油對小鼠胃白念珠菌感染的治療作用[J].世界華人消化雜志,2009,17(15):1545-1547.

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    [13]董小青,劉麗英,陳虹,等.土槿乙酸抗白念珠菌的敏感性及作用機(jī)理的電鏡研究[J].天津藥學(xué),2008,20(2):1-3.

    [14]蘭曉明,牟茜,王春波.牡蠣軟體中抗菌蛋白對白念珠菌超微結(jié)構(gòu)的影響[J].中國海洋藥物雜志,2008,27(1):55-57.

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    [16]汪長中,程惠娟,官妍,等.穿心蓮內(nèi)酯體外抗白念珠菌生物膜作用的初步研究[J].中國真菌學(xué)雜志,2008,3(3):134-137.

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    [18]陸文銓,曹穎瑛,陳海生,等.蒺藜中甾體皂苷TTS-12對白念珠菌生物被膜形成的抑制作用[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2010,31(2):132-135.

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