小兒肺炎支原體感染3種檢測(cè)方法陽(yáng)性率的觀察

李冬盎 官瑞霞

支原體廣泛存在于自然界中，已從所有哺乳動(dòng)物類和禽類動(dòng)物體內(nèi)分離到，它們常作為共生菌定植于口腔、呼吸道。支原體可以從它們定植的初始部位播散到身體的其他部位。肺炎支原體是引起人類原發(fā)性肺炎最常見(jiàn)的病原體之一，首先引起上呼吸道感染，然后下行感染病理變化主要是間質(zhì)性肺炎、急性細(xì)支氣管炎。除呼吸道感染外，還可以引起腦炎、腎炎、心肌炎、免疫性溶血性貧血等肺外疾病[1]。近年來(lái)小兒肺炎支原體感染發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，如不能及時(shí)、準(zhǔn)確治療，嚴(yán)重影響小兒的身心健康。我院對(duì)200例疑似小兒肺炎支原體感染患者同時(shí)進(jìn)行超高倍顯微鏡、支原體快速培養(yǎng)、血清抗體測(cè)定3種方法檢測(cè)，探討它們?cè)谛悍窝字гw感染早期診斷的價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料200例患者中，男122例，女78例，年齡3個(gè)月～12周歲，臨床癥狀有咳嗽、咳痰，病程多在1周以上，使用一般抗生素治療效果不佳。

1.2 超高倍顯微鏡法儀器為清華同方THMI-UP超高倍顯微鏡.患者用消毒棉簽采取咽后壁深部的咽腔分泌物，采取時(shí)避免觸及舌、腮等部位，以防止污染。取出后將咽拭子上滴加適量生理鹽水，然后在玻片上充分?jǐn)D壓，使分泌物充分分布于玻片上，最后壓上蓋玻片，置于超高倍顯微鏡下觀察。在超高倍顯微鏡下可見(jiàn)到寄生于上皮細(xì)胞中或白細(xì)胞中的支原體呈蜂窩狀排列，為細(xì)小均勻散在的黑色顆粒、活動(dòng)性強(qiáng)。觀察10個(gè)視野，至少觀察到1個(gè)視野內(nèi)上皮細(xì)胞有支原體包含體附著或看見(jiàn)不停泳動(dòng)的支原體;白細(xì)胞或吞噬細(xì)胞內(nèi)吞噬數(shù)量不等、不能消化、大小不一、泳動(dòng)異常的支原體判為陽(yáng)性。

1.3 支原體快速培養(yǎng)法肺炎支原體快速培養(yǎng)基由上海爾健醫(yī)療用品有限公司提供。按照使用說(shuō)明書操作，用無(wú)菌的咽拭子在被檢者口腔咽喉部捻數(shù)次采集分泌物標(biāo)本，打開培養(yǎng)基瓶蓋，把咽拭子置于瓶?jī)?nèi)攪動(dòng)數(shù)次后再把咽拭子對(duì)著瓶壁擠壓，盡量擠出其中液體，取出咽拭子棄之，蓋上瓶蓋，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h觀察結(jié)果。培養(yǎng)基變成清亮的淡黃色為陽(yáng)性，培養(yǎng)基原來(lái)紅色不變或者顏色不清亮的黃色判斷為陰性。

1.4 肺炎支原體抗體檢測(cè)試劑由蘭州雅華生物技術(shù)有限公司提供。撕開鋁膜袋取出測(cè)試板平放，在檢測(cè)板右側(cè)的加樣孔中加入10 μl血清，再加入100 μl稀釋液后平放，等待3～5 min觀察檢測(cè)部視窗的結(jié)果，兩根紅線為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

超高倍顯微鏡法、支原體快速培養(yǎng)法、血清抗體檢測(cè)法3種方法的檢查陽(yáng)性率見(jiàn)表1。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，超高倍顯微鏡法和支原體快速培養(yǎng)法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，超高倍顯微鏡法和血清抗體檢測(cè)法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，支原體快速培養(yǎng)法和血清抗體檢測(cè)法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1 3種檢測(cè)方法陽(yáng)性率比較

3 討論

支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，是介于細(xì)菌和病毒之間能在無(wú)活性細(xì)胞的人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖的最小微生物。支原體肺炎主要通過(guò)飛沫傳播，潛伏期可達(dá)2到3周，對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素敏感[2]。支原體肺炎是呼吸道急性感染，尤其是下呼吸道感染的最常見(jiàn)的菌原之一，咳嗽、咳痰等臨床表現(xiàn)多不典型，癥狀多且輕重不一，x線胸片多無(wú)特征性改變。早期查體無(wú)明顯陽(yáng)性體征，且常伴有肺外合并癥，容易誤診，確診主要靠實(shí)驗(yàn)室檢查，因此對(duì)此病的及時(shí)診斷和治療有著積極的臨床意義。支原體的主要檢測(cè)方法有:形態(tài)學(xué)檢查、支原體培養(yǎng)、抗原檢測(cè)、血清學(xué)方法和分子生物學(xué)方法。超高倍顯微鏡充分運(yùn)用了現(xiàn)代的光、光電學(xué)和醫(yī)學(xué)影像學(xué)的最新成果，在保持高分辨率的前提下，把普通光學(xué)顯微鏡的放大倍數(shù)提高到2萬(wàn)倍以上。在放大的標(biāo)本鏡像上面可以直接觀察是否有支原體存在。此方法簡(jiǎn)單、方便、快捷，其結(jié)果不受支原體數(shù)量和體內(nèi)藥物濃度的影響，對(duì)于臨床用藥治療和療效觀察都有很大的幫助。肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基是一種人工合成的液體培養(yǎng)基，其組成材料是根據(jù)肺炎支原體繁殖所需要營(yíng)養(yǎng)成分合理配置的一套蛋白質(zhì)、磷脂、碳水化合物、膽固醇、微量元素及復(fù)合抑菌因子等混合而成的營(yíng)養(yǎng)豐富、特異性強(qiáng)的專用培養(yǎng)基，它的原理是快速繁殖增長(zhǎng)的肺炎支原體分解葡萄糖產(chǎn)酸使培養(yǎng)基的pH下降，產(chǎn)生的顏色變化來(lái)判斷肺炎支原體生長(zhǎng)，標(biāo)本中的其他細(xì)菌被加入的青霉素、醋酸鉈和生物抑菌劑抑制[3]。人體感染肺炎支原體以后能夠產(chǎn)生IgM和IgG抗體，IgM抗體出現(xiàn)較早，一般在感染1周出現(xiàn)，3～4周達(dá)到高峰，以后逐漸下降。IgM抗體陽(yáng)性率容易受年齡、時(shí)間和B細(xì)胞功能和敏感性等影響，這也是抗體檢測(cè)法和超高倍顯微鏡法、支原體快速培養(yǎng)法有顯著性差異的原因。

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，超高倍顯微鏡法和支原體快速培養(yǎng)法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，超高倍顯微鏡法和血清抗體檢測(cè)法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，支原體快速培養(yǎng)法和血清抗體檢測(cè)法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。支原體抗體檢測(cè)雖然目前被臨床接受和廣泛采用，但是受到諸多因素的干擾，假陰性比例比較高。而且實(shí)際工作中需要抽取靜脈血，特別是1歲和1歲以內(nèi)的幼兒需要抽取頸靜脈血而不被家長(zhǎng)接受，給臨床工作帶來(lái)一定的困難。超高倍顯微鏡法和支原體快速培養(yǎng)法雖無(wú)顯著性差異，但兩者相比，前者檢查時(shí)間短，大約20 min左右即可診斷，后者則需24 h，超高倍顯微鏡法檢測(cè)呼吸道感染成本低，結(jié)果直觀、準(zhǔn)確，患兒和家長(zhǎng)容易配合，更具有優(yōu)越性，有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[1]楊錫強(qiáng)，易著文.兒科學(xué).第6版.北京:人民衛(wèi)生出版社:2004:318.

[2]方曉琴.阿齊霉素治療兒童支原體肺炎的體會(huì).兒科藥學(xué)雜志，2004，10(2):49.

[3]錢新宏，張國(guó)威，許東亮.肺炎支原體鑒定培養(yǎng)基在兒童支原體感染快速診斷中的應(yīng)用.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，21(5):71-72.