沙棘體外抗陰道毛滴蟲作用研究

陳建芳 閆艷 劉金燕 李文慧

滴蟲性陰道炎是由陰道毛滴蟲(Trichomonas vaginalis)引起的一種常見性傳播疾病，可引起多種并發(fā)癥，孕期婦女感染滴蟲可誘發(fā)早產(chǎn)、死胎及低體重兒出生。滴蟲病還與不孕癥、子宮癌的發(fā)生密切相關(guān)，并可增加HIV感染機會［1］。目前，臨床上治療陰道毛滴蟲病的常用藥物是甲硝唑，但由于存在嚴重的毒副作用，如致畸，致癌等，并且國內(nèi)外有關(guān)陰道毛滴蟲對甲硝唑耐藥性的病例報道呈上升趨勢，限制其在臨床上的廣泛應(yīng)用［2］。因此，探索高效、低毒的抗滴蟲病藥物備受國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。沙棘屬胡頹子科沙棘屬植物，對沙棘的營養(yǎng)成分分析、化學(xué)成分分析、藥效學(xué)研究表明，沙棘含有多種維生素、葉酸、微量元素等營養(yǎng)成分，還含有多種生物活性物質(zhì)，具有緩解心腦血管疾病、增強免疫力、保護肝臟、防止衰老和抑菌殺菌的功效［3］。沙棘在我國資源豐富、來源廣泛，是我國古代藏醫(yī)、蒙醫(yī)中常用藥物，具備高效、低毒、價格低廉的優(yōu)勢，有著很好的醫(yī)藥開發(fā)前景。本實驗選用沙棘果粉作為研究對象，探討其體外抗滴蟲作用。

1 資料與方法

1.1 實驗藥物 沙棘果粉由內(nèi)蒙古宇航人科技有限公司提供，用蒸餾水配制成濃度1000 mg/ml溶液，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 陰道毛滴蟲蟲株 取自臨床診斷為滴蟲性陰道炎患者的陰道分泌物，接種于肝浸湯培養(yǎng)基中，pH 5.6～5.8，培養(yǎng)前加入10%小牛血清(56℃滅活30 min)，青霉素、鏈霉素各100 U/ml。37℃無菌培養(yǎng)，每隔24 h傳代一次，穩(wěn)定傳代3次，滴蟲濃度達到1×105個/ml進行實驗。

1.3 實驗方法 將沙棘果粉溶液進行倍比稀釋，選擇五個藥物濃度進行實驗，分別取藥液加入含有肝浸湯培養(yǎng)基的試管中，獲得培養(yǎng)基藥物濃度為 200.00、100.00、50.00、25.00、12.50 mg/ml，同時設(shè)無藥對照組。將藥物實驗組與對照組分別加入陰道毛滴蟲，37℃恒溫培養(yǎng)，于加藥后 2、4、8、12、24 h，分別吸取各管蟲液滴片鏡檢，在高倍鏡下觀察蟲體形態(tài)、活動情況，隨機計數(shù)100個蟲體，計數(shù)死亡蟲體數(shù)量并計算死亡率。將蟲體變圓，邊緣不齊，體內(nèi)有大量顆?；蚩张?，不活動的蟲體判定為死亡滴蟲。所有實驗均重復(fù)3次。應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析實驗結(jié)果，各組間差異采用方差分析，結(jié)果以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 沙棘果粉體外抗陰道毛滴蟲的光鏡觀察 高倍鏡下可見對照組的陰道毛滴蟲，蟲體無色透明，多為梨形或橢圓形，鞭毛和波動膜擺動明顯，運動活躍，染色蟲體邊界清晰，胞質(zhì)著色均勻。藥物作用后，滴蟲形態(tài)變化明顯，蟲體變圓、運動緩慢，胞質(zhì)內(nèi)顆粒增多，出現(xiàn)空泡，最終滴蟲裂解成碎片狀死亡，染色可見淡染的蟲體碎片。

2.2 沙棘果粉體外抗陰道毛滴蟲的效果 由表1可見，沙棘果粉對陰道毛滴蟲有一定的殺滅和抑制作用。觀察結(jié)果顯示，當(dāng)藥物作用時間相同時，沙棘果粉各濃度組陰道毛滴蟲死亡率均顯著高于對照組，隨藥物濃度的增加，各實驗組陰道毛滴蟲死亡率均逐漸增加(P＜0.05)。同一藥物濃度，隨著作用時間的延長，各實驗組陰道毛滴蟲死亡率均逐漸增加(P＜0.05)。藥物作用 24 h 后，200.00、100.00、50.00 mg/ml濃度組滴蟲全部死亡。最低有效藥物濃度為50.00 mg/ml。

表1 沙棘果粉對陰道毛滴蟲的殺滅作用

3 討論

沙棘為胡頹子科，酸刺屬的灌木或小喬木。沙棘含有多種維生素、微量元素及生物活性物質(zhì)，具有抗炎、抗輻射損傷、抗腫瘤等作用［3］。陰道毛滴蟲主要寄生于女性陰道內(nèi)，不僅可破壞陰道內(nèi)的弱酸性環(huán)境，還有可能引起陰道細胞發(fā)育異常，誘發(fā)癌前病變。滴蟲性陰道炎患者如不及時治療，炎癥可波及女性子宮附件、盆腔、宮頸等。感染了陰道毛滴蟲，女性陰道內(nèi)環(huán)境改變，不利于精子生存活動，而且滴蟲能吞噬精子，可引起不孕癥，給患者造成嚴重危害，因此滴蟲性陰道炎的治療受到廣泛關(guān)注。有學(xué)者研究表明，沙棘籽油對陰道炎具有治療作用［4］。本實驗初次探討沙棘果粉抗陰道毛滴蟲的作用。沙棘果粉50.00～200.00 mg/ml的濃度對陰道毛滴蟲均具有抑制和殺滅作用。同一作用時間，隨藥物濃度的增加，各實驗組陰道毛滴蟲死亡率均逐漸增加;同一藥物濃度，隨著作用時間的延長，各實驗組陰道毛滴蟲死亡率均逐漸增加。在200.00 mg/ml濃度組4 h后滴蟲全部死亡，50.00 mg/ml濃度組24 h滴蟲全部死亡，12.50～25.00 mg/ml濃度組雖然滴蟲沒有全部死亡，但是對滴蟲仍有一定的抑制作用，因此沙棘果粉觸殺陰道毛滴蟲的最低有效濃度為50.00 mg/ml。

沙棘作為我國傳統(tǒng)的中藥，具備高效、生長廣泛，無毒副作用的優(yōu)勢。本實驗對沙棘果粉體外抗滴蟲的有效濃度進行初步探索，為臨床應(yīng)用沙棘果粉治療滴蟲性陰道炎提供了實驗依據(jù)。因此，沙棘果粉有望成為一種良好的抗滴蟲藥物，將為我們今后探索高效無毒治療陰道毛滴蟲病新藥開辟一個新思路。

［1］Miller WC，Swygard H，Hobbs MM，et al.The prevalence of trichomoniasis in young adults in the united states.Sex Trans Dis，2005，32(10)：593-598．

［2］Sarah LC Kiera LD，Shanndon FH，et al.Treatment of Iifections caused by metronidazole-resistant trichomonas vaginalis.Clin Microbiol Rev，2004，17(4)：783-793．

［3］閆濤，羅麗梅，等.沙棘的化學(xué)成分及生物功能的研究進展.吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報，2010，31(1)：52-54．

［4］唐軍，郭燕燕，李詩蘭，等.復(fù)方沙棘籽油栓治療陰道炎的療效觀察. 中國婦產(chǎn)科臨床，2001，2(4)：223-224．