TMB在糞便隱血中的應(yīng)用

葉昌遠(yuǎn)

（河源市中醫(yī)院，廣東 河源 517000）

糞便隱血試驗(yàn)是診斷消化道出血，腸道腫瘤的重要指標(biāo)，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)和診斷消化道出血性疾病有重要意義[1]，TMB作為辣根過(guò)氧化物酶的底物廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)檢驗(yàn)，本文通過(guò)對(duì)200例確診有消化道出血糞便標(biāo)本，其中133例為上消化道出血，67例下消化道出血，和100例正常人糞便標(biāo)本分別用匹拉米洞法、鄰聯(lián)甲苯胺法、單克隆抗體膠體金試紙條法、TMB法做隱血試驗(yàn)進(jìn)行比較，，探討TMB應(yīng)用于糞便隱血試驗(yàn)的可行性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

TMB試劑應(yīng)用乙型肝炎檢測(cè)試劑盒中顯色劑A液B液；匹拉米洞試劑盒；鄰聯(lián)甲苯胺法試劑（10g/l鄰聯(lián)甲苯胺溶液和3%過(guò)氧化氫溶液）；萬(wàn)華普曼生物工程有限“速而準(zhǔn)”潛血試紙。

1.1.2 標(biāo)本

要求標(biāo)本新鮮，盛裝容器干燥無(wú)污染無(wú)吸水性，送檢標(biāo)本1h內(nèi)檢驗(yàn)完成。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本檢測(cè)

TMB法用竹簽挑取少量糞便涂在消毒棉簽上或?yàn)V紙帶上，先滴加B液2～3滴，再加A液2～3滴，2min內(nèi)觀察顏色變化。10s內(nèi)出現(xiàn)深綠色為4+；30s出現(xiàn)綠色且顏色逐漸加深為3+；1min出現(xiàn)綠色為2+；1～2min出現(xiàn)淺綠色為1+；2min以上未出現(xiàn)顏色為陰性。匹拉米洞法、鄰聯(lián)甲苯胺法、單克隆抗體膠體金法嚴(yán)格按照操作說(shuō)明操作。

1.2.2 靈敏度試驗(yàn)

挑取黃豆大小正常人糞便加入到刻度試管中，加蒸餾水至2mL刻度并調(diào)成糊狀，加入純化血紅蛋白質(zhì)控品并倍比稀釋成不同濃度的Hb混合液，分別用四種方法檢測(cè)。血紅蛋白質(zhì)控品采用四川省新成生物科技有限責(zé)任公司提供經(jīng)校準(zhǔn)的，Hb為110g/l。

1.2.3 特異性試驗(yàn)

收集雞血、豬血分別用4種方法檢測(cè)。

1.2.4 干擾試驗(yàn)

分別采用VitC和鐵劑加入糞便混合液中，用四種方法檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1 標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果

表2 靈敏度試驗(yàn)結(jié)果

上消化道出血的患者糞便隱血試驗(yàn)TMB法陽(yáng)性率低于鄰聯(lián)甲苯胺法，接近于匹拉米洞法、高于單克隆抗體膠體金試紙條法；下消化道出血的患者糞便隱血試驗(yàn)TMB法陽(yáng)性率低于鄰聯(lián)甲苯胺法，接近于匹拉米洞法，低于單克隆抗體膠體金試紙條法；TMB法假陽(yáng)性率低于鄰聯(lián)甲苯胺法，接近于匹拉米洞法、高于單克隆抗體膠體金試紙條法，真陰性率高于聯(lián)甲苯胺法，接近于匹拉米洞法、低于單克隆抗體膠體金試紙條法，見(jiàn)表1。

2.2 靈敏度試驗(yàn)結(jié)果[2]

TMB法檢出血紅蛋白(Hb)濃度≥3.36μg/mL；匹拉米洞法檢出血紅蛋白濃度≥3.36μg/mL；鄰甲聯(lián)苯胺法檢出血紅蛋白濃度≥6.71μg/mL；金標(biāo)法檢出血紅蛋白濃度0.21～859.38μg/mL。見(jiàn)表2。

2.3 特異性試驗(yàn)結(jié)果

TMB法，匹拉米洞法、鄰聯(lián)甲苯胺法特異性試驗(yàn)均陽(yáng)性，金標(biāo)法特異性試驗(yàn)為陰性。

2.4 干擾試驗(yàn)結(jié)果

在含有大劑量VitC和鐵劑時(shí)，TMB法，匹拉米洞法、鄰聯(lián)甲苯胺法呈陰性，而金標(biāo)法不受干擾。

3 討 論

糞便隱血試驗(yàn)是檢測(cè)糞便中微量（出血量少于5mL，肉眼及鏡檢不能發(fā)現(xiàn)的）血液的試驗(yàn)，當(dāng)消化道、消化器官出血或存在腫瘤時(shí)，糞便隱血試驗(yàn)可出現(xiàn)陽(yáng)性，糞便隱血試驗(yàn)對(duì)消化性潰瘍和消化道腫瘤的診斷和鑒別有重要意義，消化道惡性腫瘤可呈持續(xù)陽(yáng)性，消化道潰瘍呈間斷陽(yáng)性[2,3]。糞便隱血試驗(yàn)大致分為化學(xué)法（匹拉米洞法、鄰聯(lián)甲苯胺法）和免疫法，本文討論的TMB法也屬于化學(xué)法，其原理是紅細(xì)胞中血紅蛋白具有類似過(guò)氧化酶的作用，催化過(guò)氧化氫，氧化TMB而顯示色，從而證實(shí)血紅蛋白的存在。

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)匹拉米洞法、鄰聯(lián)甲苯胺法、單克隆抗體膠體金試紙條法、TMB法的比較表明：①上消化道出血的患者糞便隱血試驗(yàn)TMB法陽(yáng)性率低于鄰聯(lián)甲苯胺法，接近于匹拉米洞法、高于單克隆抗體膠體金試紙條法；下消化道出血的患者糞便隱血試驗(yàn)TMB法陽(yáng)性率低于鄰聯(lián)甲苯胺法，接近于匹拉米洞法，低于單克隆抗體膠體金試紙條法。②TMB法和匹拉米洞法最低可以檢出6.7μg/mL的血紅蛋白，鄰聯(lián)甲苯胺法最低可以檢出13.4μg/mL的血紅蛋白，金標(biāo)法最低可以檢出0.21～859.38 μg/mL的血紅蛋白，TMB法靈敏度適中。③TMB法屬于化學(xué)法，特異性與干擾性與鄰聯(lián)甲苯胺法，匹拉米洞法相同，與人血和動(dòng)物血都呈陽(yáng)性反應(yīng)，易受VitC和鐵劑的干擾，而免疫法具有高度特異性，只與人血呈陽(yáng)性反應(yīng)不易受VitC和鐵劑的干擾。

經(jīng)上述分析TMB法糞便隱血試驗(yàn)對(duì)消化道出血有很高的檢出率，靈敏度適中，適宜臨床常規(guī)檢查，但存在特異性不強(qiáng)，易受干擾，不能僅憑單一方法來(lái)判斷隱血試驗(yàn)的結(jié)果，應(yīng)根據(jù)患者三天內(nèi)飲食及用藥情況綜合判斷，以降低假陽(yáng)性及假陰性率。

[1] 李鵬宇,陳激揚(yáng).糞便潛血兩種檢測(cè)方法的評(píng)價(jià)和選擇[J].武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,18(5):458-459.

[2] 黃彥,劉燕玉,王娜.糞便隱血兩種檢測(cè)方法的結(jié)果比較[J].福建醫(yī)藥雜志,2006,28(1):178-179.

[3] 張時(shí)民,陳靜.檢驗(yàn)與臨床診斷.全科醫(yī)師分冊(cè)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2009:214.