高效液相色譜法測(cè)定硫酸羅通定注射液中羅通定的含量

邵雪力

（河南省周口市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 周口 466000）

硫酸羅通定注射液，本品為淡黃色至黃色的澄明液體，遇光受熱色澤加深。本品具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、催眠及安定作用。本品的作用機(jī)制尚待闡明，可能與通過(guò)抑制腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上行激活系統(tǒng)、阻滯腦內(nèi)多巴胺受體的功能有關(guān)。治療量無(wú)成癮性。適用于消化系統(tǒng)疾病引起的內(nèi)臟痛（如胃潰瘍及十二指腸潰瘍的疼痛）、一般性頭痛、月經(jīng)痛、分娩后宮縮痛。適用于緊張性疼痛或因疼痛所致的失眠患者。國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定含量，本文采用HPLC法，對(duì)硫酸羅通定注射液進(jìn)行含量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本法專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性好，可作為含量測(cè)定的質(zhì)控指標(biāo)之一。

1 儀器及工作條件

島津LC-2010C型全自動(dòng)高效液相色譜儀，SCL-10AVP型紫外檢測(cè)器，N2000液相色譜數(shù)據(jù)工作站；92sM-202ADR電子分析天平；PHS-3C酸度計(jì)；AS5150A型超聲波振蕩器。羅通定對(duì)照品（批號(hào)：100452-200301，中國(guó)藥品生物制品檢定所），硫酸羅通定注射液，規(guī)格：2mL∶60mg（市售品，天津藥業(yè)焦作有限公司，批號(hào)：100506；廣西河豐藥業(yè)有限公司，批號(hào)：091001與批號(hào)：100803），磷酸二氫鉀溶液、庚烷磺酸鈉溶液及三乙胺均為分析純；甲醇為色譜純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液和0.05mol/L庚烷磺酸鈉溶液（1∶1），含0.2%三乙胺，用磷酸調(diào)pH至6.55）-甲醇（40∶60），檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，流速為1mL/min。柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL。在此條件下，羅通定保留時(shí)間為：12.7min。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取羅通定對(duì)照品0.0278g，置于100mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取濾液10mL于100mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取20μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取本品1mL（約相當(dāng)羅通定30mg），置于100mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取濾液10mL于100mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取20μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。

2.4 線性關(guān)系的考察

精密稱取羅通定對(duì)照品0.0278g，置于100mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0mL分別置于50mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻；按上述色譜條件，各取20μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（mg/mL）為橫，進(jìn)行線性回歸。得回歸方程（n=6）為：Y=45.912X-6.8502 r=0.9997，線性范圍為：5.56～139μg/mL。

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密量取同一批號(hào)樣品1mL（約相當(dāng)于羅通定30mg）3份，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定羅通定的含量，分別為：99.8%、100.2%、100.5%，RSD為0.35%。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中的第一份溶液，室溫下在0、1、2、3、4h測(cè)定，記錄各峰面積并計(jì)算RSD，計(jì)算得RSD=0.41%，n=5，結(jié)果表明，本品的供試品溶液在室溫4h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 精密度試驗(yàn)

取同一份對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20μL，計(jì)算各成分的峰面積并計(jì)算RSD，結(jié)果RSD為0.35%，表明該系統(tǒng)的精密度較好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品（批號(hào)：091001）1mL（約相當(dāng)于羅通定30mg）5份，分別置于100mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取10mL于100mL容量瓶中，分別精密加入羅通定對(duì)照品儲(chǔ)備液27.8μg，加流動(dòng)相稀釋至刻度，照樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果表（n=5）

2.9 樣品含量的測(cè)定

按上述“2.1”色譜條件，從“2.2”、“2.3”中，各取20μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖；按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，測(cè)得結(jié)果與國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]方法比較，結(jié)果見(jiàn)圖1、2和表2。

圖1 對(duì)照品圖譜

圖2 樣品圖譜

表2 用本法和標(biāo)準(zhǔn)法測(cè)定羅通定含量結(jié)果（n=3）

3 討 論

3.1 流動(dòng)相的選擇

參考同品種國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的流動(dòng)相[1]，以磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液和0.05mol/L庚烷磺酸鈉溶液（1∶1），含0.2%三乙胺，用磷酸調(diào)pH至6.55-甲醇（40∶60）較合適，且保留時(shí)間適宜；加入0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，能提高柱效，加入三乙胺可改善拖尾。

3.2 本法與國(guó)家藥品方法相比較，二者結(jié)果無(wú)明顯差別，且該方法簡(jiǎn)便快捷，用來(lái)作為注射液的含量控制其準(zhǔn)確度已足夠，為藥品標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了一定的參考。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.