頂空氣相色譜法測(cè)定麥考酚酸中有機(jī)溶劑殘留

陳紹初 潘 京 張美蘭

（廣東藍(lán)寶制藥有限公司，廣東 清遠(yuǎn) 511515）

圖1 空白溶液色譜圖

圖2 對(duì)照品溶液色譜圖

圖3 供試品溶液色譜圖

麥考酚酸屬于微生物來源的具有抑制作用的抗生素，是一種高效、選擇性、非競(jìng)爭(zhēng)性、可逆性的次黃嘌呤單核苷酸脫氫酶抑制劑，可抑制鳥嘌呤核苷酸的合成途徑，使鳥嘌呤核苷酸耗竭，進(jìn)而阻斷DNA的合成；選擇作用于T、B淋巴細(xì)胞，抑制其增殖。起初主要作為抗生素使用，后面作為器管移殖的多種新型免疫制劑的使用，近年又發(fā)現(xiàn)它還具有抗腫瘤、抗HIV等新的用途[1]。由于其作用范圍的越來越大，有必要對(duì)其產(chǎn)品中殘留的有機(jī)溶劑進(jìn)行嚴(yán)格控制。本文采用頂空氣相色譜法[2]測(cè)定麥考酚酸中有機(jī)溶劑殘留，報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥

1.1.1 儀器氣相色譜儀

FID檢測(cè)器，Agilent 6890N，Agilent Chemstation RevA.09.03氣相工作站。

1.1.2 試藥

麥考酚酸由廣東藍(lán)寶制藥有限公司提供。二甲基亞砜、2-己酮（密度0.810g/mL）、甲醇（密度0.791g/mL）、無水硫酸鈉均為色譜純?cè)噭?/p>

1.1.3 試液制備

①內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液：吸取250μL 2-己酮于50mL容量瓶中，加入二甲基亞砜至刻度，搖勻即得。②空白溶液：稱取無水硫酸鈉約200mg于頂空進(jìn)樣瓶中，加入0.1mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，加1.9mL二甲基亞砜，搖勻即得。③對(duì)照品溶液：精密量取甲醇18μL（14.22mg）至50mL容量瓶中，加二甲基亞砜溶液稀釋至刻度，搖勻即得對(duì)照品儲(chǔ)備液。稱無水硫酸鈉約200mg于每個(gè)頂空進(jìn)樣瓶中，分別加入上述對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、0.8、1.0、1.2、1.5mL和0.1mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，再分別加入適量二甲基亞砜，搖勻即得50%、80%、100%、120%、150%濃度對(duì)照品溶液。④供試品溶液：稱取100mg樣品、200mg無水硫酸鈉置于頂空進(jìn)樣瓶中，加入0.1mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，再加入1.9mL二甲基亞砜，加塞，密封。

1.2 色譜條件色譜柱

柱溫：初始溫度為40℃，保持5min后，以升溫速率為2℃/min升至90℃，保持0min，以升溫速率為30℃/min升至160℃，保持2min；進(jìn)樣口溫度：220℃；檢測(cè)器溫度：260℃；檢測(cè)器：FID檢測(cè)器；載氣：氮?dú)猓涣魉伲?mL/min；分流比：10∶1。

1.3 測(cè)定方法

取制備好的供試品溶液或?qū)φ掌啡芤?，用頂空進(jìn)樣器進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取100%濃度對(duì)照品溶液好熱空白溶液，按測(cè)定方法測(cè)定。兩峰的分離度＞1.5，理論塔板數(shù)＞5000，拖尾因子＜1.5（表1）。色譜圖見圖1～圖3。

表1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

2.2 線性試驗(yàn)

按測(cè)定方法測(cè)定50%、80%、100%、120%、150%濃度的對(duì)照品溶液，以各溶劑與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積的比值R為縱坐標(biāo)（y），以各溶劑的濃度C（mg/L）為橫坐標(biāo)（x），擬合線性回歸方程（n＝5）為y =0.000165 x + 0.004，相關(guān)系數(shù)為0.9999。結(jié)果表明，比值R與濃度C成較好線性關(guān)系。

2.3 回收率試驗(yàn)

按測(cè)定方法測(cè)定制備供試品溶液和加料供試品溶液，平均回收率（n=9）在99.6%，RSD%為1.3%。

2.4 精密度試驗(yàn)

按測(cè)定方法連續(xù)測(cè)定6次100%濃度的對(duì)照品溶液，結(jié)果各溶劑與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積比值RSD為1.3%。結(jié)果表明，該方法具有良好的精密度。

2.5 定量限試驗(yàn)

按測(cè)定方法進(jìn)樣測(cè)定系列低濃度對(duì)照品溶液，取信噪比為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度確定為甲醇定量限為0.0028mg/mL。結(jié)果表明，靈敏度良好。

2.6 樣品測(cè)定

按測(cè)定方法測(cè)定制備的3個(gè)批次的供試品溶液，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算甲醇的含量分別為0.092%、0.109%和0.097%。

3 討 論

3.1 本文還進(jìn)行過溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)，研究表明溶液在室溫密閉條件下，3d內(nèi)能保持相對(duì)穩(wěn)定。

3.2 因生產(chǎn)工藝不同，生產(chǎn)過程工序則可能會(huì)用到乙酸乙酯或乙酸丁酯，本方法也適用測(cè)定其殘留。

[1]Ronald B.Mycophenolic acid: a one hundred year odyssey from antibiotic to immunosuppressant[J].Chem Rev,2000,100(10):3801.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(2010版第二部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄31-32,194-195.