金蓮花中葒草苷和牡荊苷對(duì)D-半乳糖致衰小鼠體內(nèi)抗氧化作用的影響

王書(shū)華 楊國(guó)棟 饒 娜 田嘉銘 安 芳 (河北北方學(xué)院藥學(xué)系，河北 張家口 075000)

金蓮花是毛茛科植物金蓮花(Trollius chinensis Bunge)的干燥花及花蕾，有清熱解毒，消腫明目的功效，臨床上主要用于上呼吸道感染、扁桃體炎等。金蓮花中主要藥效成分是葒草苷和牡荊苷，具有抗氧化〔1〕、抗腫瘤〔2〕、降壓等作用，金蓮花藥材和其制劑多以測(cè)定牡荊苷和葒草苷的含量控制其質(zhì)量〔3〕。藥代動(dòng)力學(xué)對(duì)金蓮花有效成分單體葒草苷與牡荊苷研究指出，在動(dòng)物體內(nèi)吸收快，分布也快，藥物起效迅速，主要以消除為主，廣泛分布于動(dòng)物體內(nèi)的各組織，腎臟中濃度最高，腦中濃度最低，腎對(duì)牡荊苷具有很高的攝取率〔4〕。本文對(duì)金蓮花有效成分單體葒草苷與牡荊苷的藥代動(dòng)力學(xué)以及藥理學(xué)進(jìn)行研究，從中醫(yī)學(xué)角度證明其提高機(jī)體的抗衰老抗氧化能力。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要藥品和試劑 葒草苷和牡荊苷(河北北方學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心，經(jīng)1H-NMR和HPLC鑒定純度98.9%);D-半乳糖;鄰苯三酚;T-AOC測(cè)試盒(南京建成生物有限公司)。

1.1.2 動(dòng)物 昆明種小鼠(河北北方學(xué)院動(dòng)物中心提供)。

1.1.3 儀器 U-3900紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本);ME235S十萬(wàn)分之一電子天平(日本);DK-8型電熱恒溫水槽(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);低溫高速離心機(jī)(賽多利斯公司);HQ-60型旋渦混合器(北方同正生物技術(shù)發(fā)展公司)。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 采用D-半乳糖致亞急性衰老法〔5〕，將D-半乳糖 10 000 mg溶于 500 ml生理鹽水中，按注射劑量200 mg·kg－1·d－1(即每克體重0.01 ml)給小鼠腹腔注射，正常對(duì)照組注射等體積生理鹽水，造模時(shí)間為8 w，每天稱重一次，依據(jù)末次稱重的克數(shù)調(diào)整給藥劑量。

1.2.2 模型驗(yàn)證 造模第6周和第8周分別選取正常組和造模組大鼠(備用)8只，摘眼球采血，分離血清，測(cè)定總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)含量，以驗(yàn)證小鼠衰老情況。第8周末，造模組小鼠指標(biāo)與正常組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，顯示模型復(fù)制成功。

1.2.3 給藥方法 各治療組從第9周始每日上午分別灌胃給藥，正常對(duì)照組和模型組給等體積的生理鹽水。根據(jù)實(shí)驗(yàn)小鼠與人的體表面積比例系數(shù)換算，維生素E組給藥劑量20 mg/kg，葒草苷、牡荊苷高、中、低劑量組 40、20、10 mg/kg，每天稱重一次，依據(jù)小鼠末次體重調(diào)整給藥劑量。給藥時(shí)間8 w。

1.2.4 檢測(cè)指標(biāo) 末次給藥后，每組取10只小鼠血清進(jìn)行檢測(cè)T-AOC、CAT、SOD水平，方法按試劑盒說(shuō)明。

2 結(jié)果

2.1 金蓮花葒草苷和牡荊苷對(duì)D-半乳糖致衰小鼠T-AOC的影響 與模型組相比，正常對(duì)照組中小鼠血清T-AOC明顯降低(P＜0.01)，各治療組小鼠血清T-AOC與模型組相比均有所提高(P＜0.01或P＜0.05)，表明金蓮花葒草苷和牡荊苷具有提高D-半乳糖致衰小鼠血清中T-AOC的能力;與維生素E組相比，葒草苷和牡荊苷高劑量組無(wú)顯著性差異，表明葒草苷和牡荊苷提高小鼠血清T-AOC的作用相當(dāng);葒草苷和牡荊苷中、低劑量組具有顯著性差異(P＜0.05)，提示葒草苷和牡荊苷中、低劑量的作用弱于維生素E。與葒草苷中低劑量組相比，牡荊苷中低劑量組具有顯著性差異(P＜0.05)，表明葒草苷中低劑量組的作用高于牡荊苷中低劑量。見(jiàn)表1。

2.2 金蓮花葒草苷和牡荊苷對(duì)D-半乳糖致衰小鼠血清SOD的影響 見(jiàn)表1。與模型組比較，葒草苷和牡荊苷均能提高小鼠血清SOD的含量(P＜0.05，P＜0.01)。葒草苷和牡荊苷中、低劑量組作用弱于維生素E(P＜0.05)，而高劑量組無(wú)顯著差異，葒草苷中、低劑量組提高小鼠血清SOD活性高于同劑量牡荊苷(P＜0.05)，高劑量組間無(wú)差異。

2.3 金蓮花葒草苷和牡荊苷對(duì)D-半乳糖致衰小鼠CAT的影響 模型組CAT的活力明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.05)，與模型組相比各治療組的含量明顯升高(P＜0.05，P＜0.01)。與維生素E組相比，葒草苷和牡荊苷的中、低劑量組具有顯著性差異(P＜0.05)，葒草苷和牡荊苷的高劑量組無(wú)顯著性差異。葒草苷中、低劑量組分別與牡荊苷的中、低劑量組相比，具有顯著性差異(P＜0.05)，表明葒草苷中、低劑量組提高小鼠血清CAT的活力的作用強(qiáng)于牡荊苷的中、低劑量組。見(jiàn)表1。

表1 金蓮花葒草苷和牡荊苷對(duì)D-半乳糖致衰小鼠T-AOC、SOD、CAT水平的影響(± s，n=10)

表1 金蓮花葒草苷和牡荊苷對(duì)D-半乳糖致衰小鼠T-AOC、SOD、CAT水平的影響(± s，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與維生素E組比較:3)P＜0.05;與葒草苷相應(yīng)劑量組比較:4)P＜0.05

組別 T-AOC(ml) SOD(U/ml) CAT(U/ml)正常對(duì)照組 16.702±3.8242) 53.32±8.12) 72.15±16.421)模型組 8.913±1.126 29.65±9.0 36.38±10.54維生素E組15.064±1.3961) 44.56±8.01)3) 60.20±12.482)葒草苷高劑量組 15.913±1.2581) 46.81±6.71)3) 61.28±13.562)3)中劑量組 14.232±1.7092)3) 41.10±6.42)3) 57.47±11.242)3)低劑量組 11.810±2.1581)3) 39.92±6.21)3) 48.39±12.751)3)牡荊苷高劑量組 14.765±1.1422) 42.37±7.01)3) 56.20±13.911)中劑量組12.042±1.6741)3)4)36.84±5.01)3)4) 48.34±10.272)3)4低劑量組10.620±2.6741)3)4) 33.26±96.11)3) 42.15±11.201)3)4

3 討論

正常情況下，機(jī)體既可產(chǎn)生自由基，也有一套清除自由基的機(jī)制。在異常情況下，防御自由基機(jī)制失衡，導(dǎo)致自由基的大量產(chǎn)生，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒害，從而導(dǎo)致機(jī)體的衰老和死亡。機(jī)體防御體系中T-AOC的作用主要是維持內(nèi)環(huán)境活性氧的動(dòng)態(tài)平衡，清除過(guò)高的活性氧，使機(jī)體處于氧化還原相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示金蓮花葒草苷、牡荊苷在提高機(jī)體內(nèi)T-AOC的活性方面發(fā)揮較好的作用，金蓮花葒草苷在提高機(jī)體內(nèi)T-AOC的活性方面要高于牡荊苷。

SOD作為生物機(jī)體抗氧化酶系統(tǒng)中重要的抗氧化酶之一，是清除機(jī)體內(nèi)超氧陰離子自由基的重要生物酶，它可以減少過(guò)氧化脂質(zhì)的產(chǎn)生，從而保護(hù)細(xì)胞膜免受氧自由基的損傷，起到抗氧化毒性的作用。若SOD減少會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)自由基濃度增加，過(guò)氧化反應(yīng)加強(qiáng)，組織細(xì)胞被破壞，組織功能下降，引起機(jī)體衰老。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，金蓮花中葒草苷和牡荊苷都能較好的提高機(jī)體內(nèi)SOD的活力，從而能發(fā)揮較好的抗氧化作用。CAT能將機(jī)體代謝過(guò)程中不間斷產(chǎn)生的大量過(guò)氧化氫分解成水和分子氧，減輕和阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化作用的一級(jí)引發(fā)作用，保護(hù)機(jī)體免受有機(jī)氫過(guò)氧化物的侵害，延緩細(xì)胞的衰老，從而預(yù)防自由基引發(fā)疾病的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，金蓮花葒草苷、牡荊苷提高機(jī)體內(nèi)CAT的活性，消除體內(nèi)過(guò)多的自由基，從而阻斷自由基對(duì)機(jī)體的破壞，延緩和預(yù)防衰老。

1 楊國(guó)棟，饒 娜，田嘉銘，等.金蓮花中葒草苷和牡荊苷體外抗氧化作用研究〔J〕.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011;22(9):2172.

2 孫 黎，劉 芳，劉 華，等.金蓮花黃酮對(duì)人乳腺癌細(xì)胞作用的研究〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2009;29(9):1098.

3 曲彩紅，顏 娟，田嘉銘，等.HPLC測(cè)定金蓮花中三種黃酮苷含量〔J〕.中成藥，2010;32(3):162.

4 曲彩紅.金蓮花中葒草苷的提取分離及其在兔體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究〔D〕.河北北方學(xué)院碩士論文，2010.

5 顏 娟.金蓮花中牡荊苷兔體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究〔D〕.河北北方學(xué)院碩士論文，2010.