廣西境內(nèi)不同產(chǎn)區(qū)土茯苓中落新婦苷的含量測定

陳章源 ，李 戰(zhàn)，董青松，阮 群 ，白隆華

(1.廣西玉林制藥有限責(zé)任公司，廣西 玉林 537001; 2.廣西壯族自治區(qū)藥用植物園，廣西 南寧 530023)

土茯苓為百合科植物光葉菝葜的干燥根莖，具有解毒、除濕、通利關(guān)節(jié)之功效，臨床主要用于梅毒及汞中毒所致肢體拘攣、筋骨疼痛、濕熱淋濁、帶下、癰腫、瘰疬、疥癬等。2010年版《中國藥典(一部)》規(guī)定了土茯苓中落新婦苷的含量要求。為全面了解廣西地區(qū)產(chǎn)土茯苓中落新婦苷的變化差異，筆者采用高效液相色譜法測定了廣西區(qū)域內(nèi)不同產(chǎn)區(qū)土茯苓中落新婦苷的含量，為有效開發(fā)利用廣西地區(qū)的土茯苓資源和栽培選種提供科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀，包括四元泵在線脫氣、VWD檢測器、Aiglent 1200型化學(xué)工作站;GR－202型電子分析天平(精確度為十萬分之一)。廣西境內(nèi)不同產(chǎn)區(qū)土茯苓藥材(廣西藥用植物園提供，并經(jīng)董青松教授鑒定);落新婦苷對照品(上海中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究中心，純度不低于98.0%);甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Zorbax SB－C18柱(250 mm × 4.6 mm，5μm);流動相:甲醇－0.1%冰醋酸溶液(34∶66);柱溫:30℃;流速:1.0 mL/min;檢測波長:291 nm;進樣量:10 μL。在上述色譜條件下，落新婦苷保留時間約為20.6 min，分離良好，分離度達到2.02，且不受藥材其他組分干擾，理論板數(shù)以落新婦苷計算均不小于5000。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取落新婦苷對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.30 g/L的溶液，作為對照品溶液。取土茯苓粉末(過50目篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:分別精密吸取對照品溶液 0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述各系列溶液各10 μL，按上述色譜條件進樣分析，以進樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=2580.4 X －5.464，r=0.9998(n=6)。結(jié)果表明落新婦苷進樣量在0.15～2.40 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液(0.12 g/L)10 μL，分別連續(xù)進樣6次。結(jié)果落新婦苷峰面積的平均值為 3045.8，RSD為0.82%(n=6)，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一土茯苓(樣品號為5，東興)制備的供試品溶液，分別在 0，2，4，6，8，10 h 時進樣測定。結(jié)果落新婦苷峰面積的平均值為3073.2，RSD為1.01%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:精密稱取同一土茯苓粉末(樣品號為5，東興)，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果落新婦苷含量平均值為1.22%，RSD 為 1.24%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:取已知含量的同一土茯苓粉末(樣品號為5，東興，含量為1.21%)約0.25 g，精密稱取6份，分別精密加入落新婦苷對照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，按上述色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 落新婦苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別取不同來源的土茯苓藥材粉末(過50目篩)樣品約0.5 g，精密稱定，依法制成供試品溶液，按上述色譜條件，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)法計算樣品中落新婦苷的含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

試驗中參考有關(guān)文獻[1－2]，針對含量測定配制供試品溶液的不同提取方法(超聲、回流)、不同提取溶劑(甲醇、60%甲醇溶液)、不同溶劑體積(25，50，75，100 mL)以及不同提取時間(30，45，60 min)分別考察。結(jié)果以50 mL甲醇超聲提取和60%甲醇回流提取所得含量最大，且兩者差別不大，僅相差0.05%左右，且超聲提取30 min和回流提取30 min已基本可以把落新婦苷提取完全，故選擇操作較簡便的文中提取方法。

測定波長的選擇是參考2010年版《中國藥典(一部)》土茯苓中落新婦苷測定項下的波長，選291 nm。在選擇流動相時，考察了乙腈－0.05%磷酸溶液(25∶75)、甲醇－0.1%冰醋酸溶液(34∶66)或(39∶61)、甲醇－水、甲醇－0.05%磷酸溶液。結(jié)果表明，以甲醇－0.1%冰醋酸溶液(34∶66)為流動相，所得色譜峰峰形較好，分離度能達到2.0以上。

土茯苓為野生藥材資源，生長周期較長，隨著臨床用途的不斷增加，其資源匱乏更加嚴重，故進一步開發(fā)利用和引種栽培，顯得尤為重要。本試驗結(jié)果表明，本區(qū)域內(nèi)所有檢測樣品中落新婦苷含量范圍為0.62% ～2.28%，均符合 2010年版《中國藥典(一部)》要求，為有效開發(fā)利用土茯苓資源和引種栽培提供了科學(xué)依據(jù)。

[1]李 磊，張宏桂，喬延江.HPLC法測定土茯苓藥材中落新婦苷和白蘆藜醇的含量[J].藥物分析雜志，2007，27(5):654 －656.

[2]陳 幸，李 彬，黎萬壽.HPLC法測定土茯苓中落新婦苷的含量[J].藥物分析雜志，2004，24(4):437 －438.