煙葉中茄尼醇含量測定方法的研究進展

劉寶亮

(常州工學院理學院化工系，江蘇 常州 213002)

茄尼醇(Solanesol)，化學名九聚異戊二烯醇，為煙葉中含有的具有利用價值的化學成分，是一種不飽和的聚異戊二烯醇，屬三倍半萜醇，分子式C45H74O，分子量631，無極性或弱極性，熔點33 ℃。純的茄尼醇為白色或淡黃色蠟狀固體，不溶于水，溶于乙醇、冰乙酸、丙酮、正己烷等有機溶劑，無旋光活性，通常比較穩(wěn)定，但在光照、加熱條件下會衰變，具有萜烯類化合物的共同特點，易發(fā)生加成反應、氧化反應和脫氫反應，一般低溫、避光保存。其結(jié)構(gòu)式見圖1[1]。

圖1 茄尼醇分子結(jié)構(gòu)式

茄尼醇因其分子中含有多個非共軛雙鍵，具有非常好的吸收自由基的性能，不僅有抗菌、消炎和止血作用，而且還是合成治療心血管疾病、抗癌以及抗?jié)兊人幬锏年P(guān)鍵中間體(如輔酶Q10)；許多藥物(如抗癌藥SBD)連接上長鏈烯基茄尼醇后，可獲得某些優(yōu)良的性能[2]。

可靠的分析檢測方法、完善的質(zhì)量評價體系對于茄尼醇的研究和生產(chǎn)至關(guān)重要。目前國內(nèi)主要的茄尼醇分析檢測方法有高效液相色譜法、薄層掃描法、庫侖滴定法和間接碘量法。作者在此對近年來我國茄尼醇含量測定方法的研究進展進行綜述，擬為茄尼醇的進一步研究、開發(fā)、應用提供幫助。

1 高效液相色譜法

高效液相色譜法是茄尼醇含量測定文獻報道最多的一種方法。

李曉露等[3]采用Hypersil C18色譜柱，以異丙醇-乙腈(60∶40，體積比)為流動相，流速1.0 mL·min-1，紫外檢測波長210 nm，柱溫30 ℃，在茄尼醇進樣量為1～10 μg時有良好線性關(guān)系，加標回收實驗(n=5)的平均回收率為99.3%，RSD為0.93%。張征等[4]采用Agilent LC-1100型高效液相色譜儀，Hypersil ODS(4.0 mm×250 mm)色譜柱，以甲醇-乙醇(75∶25，體積比)為流動相，流速1.0 mL·min-1，柱溫為室溫，紫外檢測波長211 nm，進樣量10 μL，保留時間10.6 min。孫心齊等[5]采用高效液相色譜(4.6 mm×25 cm硅膠柱)內(nèi)標法定量測定茄尼醇的含量，以正己烷-異丙醇(100∶1，體積比)混合液為流動相，流速1.0 mL·min-1，維生素D為內(nèi)標，紫外檢測器檢測，檢測波長210 nm，ABS為0.04。檢測線性范圍為9～30 μg，相關(guān)系數(shù)R=0.9992，回收率91.9%～102.4%，精密度RSD=2.93%。張明時等[6]采用島津硅膠色譜柱，以正己烷-異丙醇(98∶2，體積比)混合液為流動相，在紫外檢測波長為215 nm的高效液相色譜儀上測定煙葉提取物中茄尼醇的含量，在茄尼醇進樣量為1～10 μg時有良好線性關(guān)系，加標回收實驗(n=6)的平均回收率為98.1%，RSD=1.9%。李烈等[7]采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測儀，DisocoveryTMC18(25 cm×4.6 mm)色譜柱，以甲醇-乙腈-四氫呋喃(39∶24∶9.5，體積比)為流動相，流速1.0 mL·min-1，分析了山東、四川等地煙葉及其提取物中茄尼醇的含量，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地煙葉中茄尼醇的含量為0.134%～0.373%，自制提取物中的含量分別為74.36%和91.02%，加樣回收率為97.6%(RSD=2.0%)。石小鵬等[8]以高效液相色譜-大氣壓化學電離質(zhì)譜聯(lián)用法測定茄尼醇提取物中茄尼醇及其有關(guān)雜質(zhì)含量，色譜柱為C18，以甲醇-乙醇(50∶50，體積比)為流動相，流速0.5 mL·min-1，柱溫25 ℃，大氣壓化學電離源為負離子模式，檢測器電壓1.6 kV，加熱模塊溫度200 ℃，曲形脫溶劑裝置溫度250 ℃，干燥氣流速2.5 L·min-1，全掃描質(zhì)核比范圍m/z=150～800。茄尼醇檢測濃度的線性范圍為0.006～114.0 μg·mL-1(R=0.9998)，平均加樣回收率為99.3%(RSD=1.6%，n=3)。趙瑾等[9]選用Zorbax-SIL(250 mm×4.6 mm)色譜柱，以正己烷-異丙醚-乙酸乙酯(6∶3∶1，體積比)混合溶劑為流動相，用示差折光檢測器測定了煙葉提取物中茄尼醇的含量，具有良好的分離效果和回收率，在0.2～4 μg之間有良好的線性關(guān)系。

反相高效液相色譜法測定煙葉提取物中茄尼醇含量也已有很多研究報道。

王婷等[10]以甲醇-乙醇(1∶1，體積比)為流動相，流速1.0 mL·min-1，檢測波長211 nm，柱溫30 ℃，在21.6～216.0 mg·L-1范圍內(nèi)呈線性關(guān)系(R=0.9999)，平均回收率為98.5%，RSD為0.68%。邊清泉等[11]以Hypersil ODS為色譜柱，以甲醇-乙醇(75∶25，體積比)為流動相，流速1.0 mL·min-1，紫外檢測波長211 nm，柱溫30 ℃。茄尼醇的質(zhì)量濃度為2.16～34.56 mg·L-1時，峰面積與質(zhì)量濃度具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.99998，方法的檢出限(S/N≥3)為0.09 mg·L-1，相對標準偏差(RSD)為0.42%(n=6)，平均回收率為99.2%。李春英等[12]建立了一種同時測定煙葉中茄尼醇和輔酶Q10的反相高效液相色譜法，采用HIQ SIL CI8V(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，柱溫25 ℃，以乙腈-異丙醇(8∶7，體積比)為流動相，流速1.5 mL·min-1，使用二級管陣列檢測器，檢測波長215 nm，進樣量20 μL，茄尼醇的回收率為(100.05±1.25)%。郭鵬等[13]采用C8色譜柱，以甲醇-乙腈(95∶5，體積比)為流動相，檢測波長210 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫25 ℃，茄尼醇檢測濃度在1.14～114.0 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R=0.9998，n=6)，平均加樣回收率為99.2%，RSD=1.5%。陳勇等[14]采用RP-HPLC法，KNAUER-C18(4 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，以甲醇為流動相，流速1.0 mL·min-1，檢測波長215 nm，柱溫30 ℃，茄尼醇進樣量在0.05～1.43 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，日內(nèi)和日間RSD分別為1.3%和2.8%，加樣回收率(n=9)為108.5%。

張海波等[15]選用反相硅膠柱(250 mm×416 mm)，以甲醇-異丙醇(50∶50，體積比)為流動相，流速1 mL·min-1，采用示差折光檢測器，在茄尼醇進樣量為1～100 μg時，進樣量和響應面積的線性關(guān)系良好，有良好的精密度和準確性。

2 薄層掃描法

于華忠等[16]研究了測定煙葉中茄尼醇含量的薄層掃描分析方法，以硅膠G為薄層吸附劑、石油醚-乙酸乙酯(4∶1，體積比)為展開劑、香草醛-硫酸-乙醇溶液為顯色劑，在620 nm處進行掃描測定，茄尼醇質(zhì)量在2.04～7.68 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系：c=349.94S-193.94(c為茄尼醇濃度，μg·mL-1；S為峰面積)，R=0.9954，RSD為6.86%。李烈等[17]以正己烷-乙酸乙酯-乙酸(4∶1∶0.5，體積比)為展開劑、香草醛-濃硫酸溶液為顯色劑，選用雙波長鋸齒掃描，用薄層掃描法測定了煙葉中茄尼醇的含量。

3 庫侖滴定法

庫侖滴定法是一種電化學方法，其分析原理是利用茄尼醇分子中含有9個異戊二烯單元，能與Br2發(fā)生加成反應。

鄭奎玲[18]采用庫侖滴定法測定煙葉中茄尼醇含量，確定了最佳的測定條件：滴定介質(zhì)為冰醋酸(72%)-甲醇(8%)-水(20%)體系，其中溴化鉀固體的量以在該混合溶液中達到最大飽和度為宜，60 mL混合溶液中含溴化鉀3.5 g；一般測定10次左右即更換電解液，測定溫度20～30 ℃。劉快之等[2]以2 mol·L-1KBr-冰醋酸(1∶3，體積比)為電解液，在陽極產(chǎn)生溴與茄尼醇發(fā)生反應來測定茄尼醇含量。

4 間接碘量法

魏雅雯等[19]研究了間接碘量法測定煙葉中茄尼醇含量。以冰乙酸為溶劑，與KBrO3-KBr反應定量產(chǎn)生Br2，并且加成到茄尼醇的雙鍵上，再用碘量法測定剩余的Br2，即可間接計算出茄尼醇的量，準確度達到RSD=1.23%。該法用于煙葉中茄尼醇粗品的含量測定，加標回收率為96%～101%。

5 結(jié)語

高效液相色譜法具有分離效率高、分析速度快、檢測靈敏度高、自動化程度高、適用范圍廣等優(yōu)點，是茄尼醇的常用分析方法。高效液相色譜法中，檢測器類型對茄尼醇的測定結(jié)果影響較大。紫外檢測器靈敏度高，線性范圍寬，常用檢測波長范圍為210～215 nm，在接近紫外末端吸收的波長下，紫外檢測器基線噪音大，且易受溶劑干擾；示差折光檢測器克服了茄尼醇紫外弱吸收的缺點，但靈敏度較低，對溫度變化敏感；蒸發(fā)光散射檢測器作為一種質(zhì)量型通用型檢測器對所有非揮發(fā)性組分都產(chǎn)生響應，可以檢測無紫外吸收或弱紫外吸收的物質(zhì)，消除了雜質(zhì)和流動相的紫外吸收對檢測穩(wěn)定性的干擾，無需測定校正因子即可定量，靈敏度明顯高于示差折光檢測器，對流動相系統(tǒng)溫度變化不敏感，可進行梯度洗脫，非常適宜茄尼醇的分析檢測，缺點是靈敏度要遜于紫外檢測器，線性范圍較窄[20]。

薄層掃描法設備簡單、操作方便，在工業(yè)化生產(chǎn)中易于推廣，但精密度和重現(xiàn)性較差。

庫侖滴定法的設備庫侖儀性價比較高，且溫度變化對分析結(jié)果無明顯影響，但此方法易受樣品中雜質(zhì)的干擾，僅適用于分析純度較高的樣品。

間接碘量法測定茄尼醇不必使用茄尼醇標準品，且準確度高，只使用常規(guī)儀器即可，方法簡單、操作容易，具有實用價值，適于煙葉中茄尼醇粗品的含量測定。

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