兩種降鈣素原檢測方法的比較研究

高紅軍，鄭 敏，周艷秋*，王洪武

1.煤炭總醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，北京 100028；2.北京市朝陽區(qū)三間房第二社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，北京 100024

降鈣素原（procalcitonin，PCT）目前主要用于鑒別嚴(yán)重細(xì)菌感染和病毒感染、自身免疫性疾病所致的炎癥性反應(yīng)[1]。PCT是由116個(gè)氨基酸組成的糖蛋白，是降鈣素（calcitonin，CT）的前體[2]。外周血中的PCT通常在嚴(yán)重的細(xì)菌感染及膿毒血癥時(shí)才明顯升高，由此PCT可用來早期檢測敗血癥，并快速評(píng)估其嚴(yán)重程度[3-5]。目前臨床上使用的PCT檢測方法主要分為兩大類，一類是定量檢測，一類是半定量檢測。定量檢測和半定量檢測在實(shí)際臨床應(yīng)用中結(jié)果是否完全一致值得探討，本研究選用國產(chǎn)定量檢測試劑盒和進(jìn)口半定量檢測試劑盒對(duì)比研究其檢測結(jié)果的一致性。

1 材料與方法

1.1 材料

PCT定量檢測試劑盒購自深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程有限公司（批號(hào)：F68100801188）；PCT半定量檢測試劑盒購自德國B.R.A.H.M.S公司（批號(hào)：0106007）。60例檢測標(biāo)本為2010年12月～2011年3月實(shí)驗(yàn)室接收的臨床送檢標(biāo)本。PCT半定量法隨時(shí)檢測送檢標(biāo)本，剩余血清-80℃保存用于PCT定量檢測（一次完成）。

1.2 方法

1.2.1 定量PCT檢測 嚴(yán)格按照廠家試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行試驗(yàn)。標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、標(biāo)本各加20 μl，然后加發(fā)光物標(biāo)記抗體 20 μl，加熒光素標(biāo)記抗體 20 μl，混勻，37℃水浴 15 min；加磁分離試劑 40 μl，混勻，37℃水浴 5 min，上磁分離器分離4 min，倒去上清；加應(yīng)用洗滌液 400 μl，混勻，上磁分離器分離4 min，倒去上清；重復(fù)一次洗滌過程；直接按要求上機(jī)測試。PCT濃度與相對(duì)光強(qiáng)度（RLU）成一定的比例關(guān)系，儀器自動(dòng)擬合計(jì)算PCT濃度。

1.2.2 半定量PCT檢測 將分離后的血清200 μl加到反應(yīng)孔中，定時(shí)開始，觀察反應(yīng)區(qū)的顏色變化，如果2～3 min后反應(yīng)區(qū)無較明顯的顯色反應(yīng)，繼續(xù)加血清200 μl至反應(yīng)孔中，再計(jì)時(shí)30 min后觀察反應(yīng)區(qū)的顏色。在紅色的對(duì)照帶顯示的前提下（證明PCT試驗(yàn)有效），如果加入的總血清量為200 μl，比照200 μl的比色卡讀出PCT的大概范圍（結(jié)果分為<0.5 ng/ml，≥0.5 ng/ml，≥2 ng/ml，≥10 ng/ml）；如果加入的總血清量為400 μl，比照 400 μl的比色卡讀出 PCT 的大概范圍（結(jié)果分為<0.25 ng/ml，≥0.25 ng/ml，≥1 ng/ml，≥5 ng/ml）。

2 結(jié)果

本研究共收集了60例進(jìn)行半定量PCT測定的標(biāo)本，隨后用定量檢測試劑盒分析了PCT的具體含量，比較二者檢測結(jié)果的一致性（表1）。不同半定量范圍內(nèi)的PCT與定量PCT檢測結(jié)果是否一致的判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：①≥10 ng/ml的標(biāo)本，只要定量檢測值≥10 ng/ml即認(rèn)為二者檢測結(jié)果一致；②半定量PCT結(jié)果介于中間值范圍的標(biāo)本，只要定量檢測值在相應(yīng)的范圍內(nèi)，即認(rèn)為二者檢測結(jié)果一致；③<0.25 ng/ml的標(biāo)本，只要定量檢測值＜0.25 ng/ml即認(rèn)為二者檢測結(jié)果一致；④定量值如果超出對(duì)應(yīng)的半定量范圍，那么超出范圍的定量數(shù)值是否與半定量PCT檢測結(jié)果一致，按照如下標(biāo)準(zhǔn)判斷，如果定量數(shù)值低于下限，如有按照二者檢測一致判斷，否則認(rèn)為二者檢測結(jié)果不一致；如果定量數(shù)值高于上限，如有按照二者檢測一致判斷，否則認(rèn)為二者檢測結(jié)果不一致。從表中可以看出兩種方法檢測結(jié)果一致率達(dá)90%，只有10%的標(biāo)本檢測結(jié)果相差比較大。

表1 半定量PCT與定量PCT檢測結(jié)果一致性比較

3 討論

PCT的臨床檢測方法主要包括定量法和半定量法[6]，二者的檢測基礎(chǔ)均是利用了抗原抗體的特異性免疫反應(yīng)。本試驗(yàn)采用的定量檢測法的原理是免疫發(fā)光夾心法：采用針對(duì)PCT的一株單克隆抗體標(biāo)記ABEI，另一株標(biāo)記FITC。標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)液、質(zhì)控液與ABEI標(biāo)記的單克隆抗體，F(xiàn)ITC標(biāo)記的單克隆抗體，混勻置37℃孵育形成“夾心三明治”，加入包被羊抗FITC抗體的納米免疫磁性微珠，37℃孵育后外加磁場沉淀目的抗原抗體復(fù)合物，去掉上清液漂洗后通過檢測發(fā)光強(qiáng)度（RLU）判斷PCT的含量。其他廠家的定量檢測試劑的原理基本類似，不同的地方主要是與抗體相連的示蹤物和標(biāo)記物不同，自動(dòng)化程度略有不同。半定量法主要是應(yīng)用一個(gè)單克隆鼠抗katacalcin（一種PCT降解產(chǎn)物）抗體結(jié)合在膠體金上（示蹤物）和一個(gè)多克隆羊抗降鈣素抗體（固相）。標(biāo)本加到反應(yīng)孔后，示蹤物結(jié)合樣品中的PCT并形成明顯的抗原抗體復(fù)合物。該復(fù)合物經(jīng)虹吸作用通過觀察區(qū)，在這里標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物結(jié)合到固定的抗降鈣素抗體上形成夾心復(fù)合物。當(dāng)PCT高于檢測下限時(shí)，夾心復(fù)合物呈紅色帶，顏色深淺與樣品中的PCT濃度成正比。未結(jié)合的示蹤物擴(kuò)散到對(duì)照區(qū)，結(jié)合并產(chǎn)生了紅色的對(duì)照帶。

半定量PCT檢測有方法簡單、報(bào)告結(jié)果快、不受標(biāo)本數(shù)量和特殊設(shè)備限制等優(yōu)點(diǎn)，然而由于半定量檢測需要肉眼觀察色帶，不同操作者的判斷可能截然不同，尤其是接近陽性下限值時(shí)比較難判斷，有時(shí)可能誤導(dǎo)臨床醫(yī)生的治療。因此，PCT的定量檢測顯得尤為重要，尤其是對(duì)于需要定期觀測治療效果的患者很有意義。本研究比較了兩種不同方法的檢測結(jié)果，由于一種是定量檢測，另一種是半定量檢測，檢測結(jié)果不能進(jìn)行相關(guān)性分析，因此本研究借鑒相對(duì)偏差的分析方法判斷二者檢測結(jié)果是否一致，其中偏差計(jì)算中的平均數(shù)是上限值或下限值與超出范圍的定量值和的一半，單純從數(shù)值考慮，相對(duì)偏差小于10%時(shí)筆者認(rèn)為二者檢測結(jié)果一致，超過10%則認(rèn)為檢測結(jié)果不一致。如果按照半定量PCT檢測方法中小于0.25 ng/ml作為陰性值的判斷標(biāo)準(zhǔn)，那么從檢測結(jié)果陰陽性的角度考慮，其中54例二者的檢測結(jié)果一致，一致率高達(dá)90%。

定量方法需要同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控品，從實(shí)驗(yàn)室效益管理角度考慮，比較適合臨床標(biāo)本比較多的實(shí)驗(yàn)室。半定量法的主要優(yōu)勢在于檢測快速，不受標(biāo)本數(shù)量限制，比較適合急診科、ICU等重癥監(jiān)護(hù)患者的定性判斷。本研究結(jié)果表明兩種檢測方法的檢測結(jié)果還是比較一致的，均是臨床上比較可靠的方法，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的實(shí)際情況選擇其中一種或聯(lián)合兩種檢測方法為臨床提供及時(shí)可靠的檢測報(bào)告。

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[4]陳自武.降鈣素原、超敏C反應(yīng)蛋白與外周血堿性磷酸酶積分在細(xì)菌感染中應(yīng)用探討[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2010,9(8):572-573.

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