中藥復(fù)方對糖尿病合并脂肪肝大鼠氧化應(yīng)激的影響

徐紅梅

山東省泰安市中醫(yī)醫(yī)院內(nèi)分泌科，山東泰安 271000

2型糖尿病的病因和發(fā)病機制尚未完全闡明?，F(xiàn)在認為2型糖尿病不是單一疾病，而是復(fù)合病因引起的綜合征，是包括遺傳及環(huán)境因素在內(nèi)的多種因素共同作用的結(jié)果。胰島素由胰島β細胞合成和分泌，經(jīng)血液循環(huán)到達體內(nèi)各組織器官的靶細胞，與特異性受體相結(jié)合并引起細胞內(nèi)物質(zhì)代謝效應(yīng)，整個過程中任何一個環(huán)節(jié)發(fā)生異常均可導(dǎo)致糖尿病。近年來，氧化應(yīng)激同2型糖尿病的關(guān)系受到重視，氧化應(yīng)激可以直接及間接激活細胞內(nèi)一系列應(yīng)激信號通路[1]，如核因子κ-B（NF-κB）、C-Jun 氨基端激酶（JNK）、蛋白激酶 C（PKC）等[2]，這些應(yīng)激通路的激活可以致胰島素抵抗、胰島素合成和分泌減少、促進胰島β細胞凋亡等[3]。筆者在臨床上應(yīng)用糖肝康治療2型糖尿病合并脂肪肝，取得較好療效。本實驗旨在從氧化應(yīng)激的途徑探討中藥復(fù)方糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠糖脂代謝的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

選用 SD 大鼠 45 只，雄性，體重（180±30）g，山東大學(xué)實驗動物中心提供。由實驗前先適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，隨機分為5組，分別為正常組（9 例）、模型組（8 例）、二甲雙胍組（9 例）、糖肝康組（10例）、血脂康組（9例）。分組后除正常組以外，各組均給予鏈脲佐菌素（STZ）25 mg/kg腹腔注射，用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)2周。尾靜脈血糖證實造模大鼠血糖異常后，改為高脂飼料（基礎(chǔ)飼料、豬油、膽固醇粉、膽酸鈉粉、白砂糖按82.5%、10.0%、2.0%、0.5%、5.0%的比例混合而成）喂養(yǎng)，并開始藥物灌胃，糖肝康組予糖肝康顆粒用蒸餾水溶解為適當(dāng)濃度懸濁液（3.0 g/kg），二甲雙胍組給予二甲雙胍粉末蒸餾水懸濁液（0.08%），血脂康組予血脂康膠囊蒸餾水懸濁液（2.4 g/kg），每天每只大鼠灌胃4 ml，正常組和模型組給予等體積生理鹽水灌胃。7周后經(jīng)腹主動脈取血檢測血清空腹血糖、胰島素、血脂及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）水平。

1.2 藥物與制劑

糖肝康顆粒（黨參、茯苓、白術(shù)、柴胡、白芍、黃芩、山梔子、穿山龍、鬼箭羽、枳實、熟大黃、茵陳等）由泰安市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科提供，顆粒制備由制劑室完成，加工成為袋裝顆粒劑，每包含生藥3 g。二甲雙胍（0.5 g/片）由中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn)，血脂康由北大維信生物科技公司生產(chǎn)。GSHPx、SOD測試盒由南京建成生物工程研究所提供。STZ購自sigma公司產(chǎn)品。

1.3 方法

7周后禁食12 h，以戊巴比妥鈉（4 mg/100 g體重）腹腔麻醉，經(jīng)腹主動脈取血8 ml（30 min內(nèi)分離血清），檢測血清空腹血糖（FBG）、胰島素（INS）、血脂及 GSH-Px、SOD，處死動物。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準差（）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠空腹血糖、胰島素的影響

給藥7周后與模型組比較，糖肝康組空腹血糖明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其降糖作用與二甲雙胍組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明糖肝康有較好地降低空腹血糖的作用，但效果不及二甲雙胍。造模后，大鼠空腹血清胰島素水平較前略有提高。治療7周后，其余三組與模型組比較，空腹血清胰島素水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。組間比較顯示，二甲雙胍組提高大鼠血清胰島素較糖肝康組為佳，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠空腹血糖、胰島素的影響（）

表1 糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠空腹血糖、胰島素的影響（）

注：與模型組比較，△P＜0.05；與二甲雙胍組比較，*P＜0.05

組別 例數(shù)正常組模型組糖肝康組血脂康組二甲雙胍組981099 FBG（mmol/L）6.29±1.0317.53±2.4614.90±1.45△*15.61±1.3811.78±1.67 INS（μIU/ml）9.47±1.6310.46±1.2912.98±1.97△*12.05±2.33△13.26±1.77△

2.2 糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠血脂的影響

造模后，與正常組比較，模型組大鼠血清中TG、TC、LDL-C水平均顯著升高（P＜0.05），HDL 水平降低（P＜0.05）；與模型組比較，糖肝康組和血脂康組均可降低糖尿病合并脂肪肝大鼠的TG、HDL-C及 LDL-C（均P＜0.05），但TC水平下降不顯著，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），二甲雙胍組則三者都可降低（P＜0.05）。對HDL-C，糖肝康組同二甲雙胍組作用相當(dāng)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。以上結(jié)果表明，糖肝康能夠改善DM所致的脂質(zhì)代謝紊亂。見表2。

表2 糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠血脂的影響（，mmol/L）

表2 糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠血脂的影響（，mmol/L）

注：與正常組比較，△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05

組別 例數(shù) TG正常組模型組糖肝康組血脂康組二甲雙胍組9810990.79±0.101.57±0.24△0.85±0.29*1.06±0.18*0.89±0.12*TC 2.66±0.325.38±0.69△4.82±1.305.26±1.354.34±1.11*HDL-C 1.23±0.170.90±0.18△1.03±0.14*0.92±0.15*0.94±0.22*LDL-C 0.47±0.091.12±0.37△0.83±0.28*0.93±0.16*0.81±0.27*

2.3 糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠谷胱甘肽過氧化物酶的影響

造模后，與正常組比較，模型組實驗大鼠的GSH-Px水平明顯降低（P＜0.05）。實施干預(yù)治療后，GSH-Px水平升高，表明各組藥物干預(yù)均起到了治療作用。糖肝康組和二甲雙胍組干預(yù)措施效果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），同血脂康組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠的GSH-Px提高作用優(yōu)于血脂康。見表3。

表3 糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠谷胱甘肽過氧化物酶的影響（）

表3 糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠谷胱甘肽過氧化物酶的影響（）

注：與正常組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▽P＜0.05；與血脂康組比較，#P＜0.05

組別 例數(shù)正常組模型組糖肝康組血脂康組二甲雙胍組981099 GSH-Px 1373.79±139.141030.88±117.43△1358.70±153.69▽#1185.14±149.711354.59±89.85

2.4 糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠超氧化物歧化酶的影響

模型組同正常組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明造模后糖尿病合并脂肪肝大鼠的SOD水平明顯降低。與模型組比較，其余進行藥物干預(yù)的三組均起到了治療作用，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。糖肝康組同正常組及二甲雙胍組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。

表4 糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠超氧化物歧化酶的影響（，U/ml）

表4 糖肝康對糖尿病合并脂肪肝大鼠超氧化物歧化酶的影響（，U/ml）

注：與正常組比較，▲P＜0.05；與模型組比較，▼P＜0.05

組別 例數(shù)正常組模型組糖肝康組血脂康組二甲雙胍組981099 SOD 469.52±70.33247.91±81.72▲457.18±57.22▼397.49±41.60▼413.42±38.71▼

3 討論

2型糖尿病并脂肪肝患者持續(xù)的高血糖、高血脂導(dǎo)致了線粒體產(chǎn)生大量活性氧（ROS）[4]另外，細胞內(nèi)的一些抗氧化酶的活性，如SOD、GSH-Px等降低導(dǎo)致氧化和抗氧化狀態(tài)的不平衡，引起氧化應(yīng)激的產(chǎn)生[5]。氧化應(yīng)激可以和細胞內(nèi)的各種成分（如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、DNA）相互發(fā)生作用，引起一些膜和酶的功能改變，導(dǎo)致細胞損傷[6]。筆者在建立2型糖尿病并脂肪肝大鼠模型過程中，亦證實模型組大鼠血清SOD、GSH-Px等抗氧化酶活性降低，從而說明了氧化應(yīng)激的存在。

筆者實驗發(fā)現(xiàn)，造模后，模型組大鼠空腹血糖顯著升高，空腹胰島素水平也顯示升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），表明模型組大鼠胰島素抵抗嚴重。干預(yù)后，治療組血糖水平下降（P＜0.05）。血脂水平也有類似表現(xiàn)，糖肝康組同二甲雙胍組血脂水平均有改善，且療效相當(dāng)（P＞0.05）。氧化應(yīng)激標(biāo)志物方面，模型組大鼠血清SOD、GSH-Px含量顯著降低，與對照組相比較，具差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明STZ腹腔注射配合高脂飼料建立的糖尿病合并脂肪肝大鼠模型存在氧化應(yīng)激反應(yīng)。在實施干預(yù)治療后，糖肝康組在提高血清SOD、GSH-Px水平方面顯示出了較好療效，同二甲雙胍組比較，兩者作用相當(dāng)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

國內(nèi)研究證實，中藥復(fù)方在抗氧化應(yīng)激方面具有較好療效[7-8]。筆者根據(jù)多年臨床經(jīng)驗，認為糖尿病并脂肪肝以肝郁脾虛、濕熱內(nèi)阻、痰瘀互結(jié)為主要病機，治療原則應(yīng)以健脾疏肝、清熱祛濕、化痰活血為主。糖肝康顆粒正是根據(jù)這一原則組方，由四君子湯、四逆散、茵陳蒿湯等方加減化裁而來。黨參、茯苓、白術(shù)，健脾益氣，啟動中樞，改善脾虛癥狀；柴胡、白芍、黃芩、山梔子、鬼箭羽、穿山龍，疏肝清熱、解毒活血，改善肝臟血液循環(huán)，防止肝硬化；枳實、熟大黃、茵陳，通腑瀉濁。另據(jù)現(xiàn)代藥理研究，黨參、茯苓、白術(shù)、黃芩等藥有降糖作用，熟大黃、茵陳等藥有降脂作用。結(jié)果表明，糖肝康顆?？梢蕴岣咛悄虿『喜⒅靖未笫笱錑SH-Px、SOD的含量，減輕糖尿病合并脂肪肝大鼠的氧化應(yīng)激，對改善糖尿病合并脂肪肝大鼠的預(yù)后具有積極的作用。

[1]Evans JL,Maddux BA,Goldfine ID.The molecular basis for oxidative stress-induced insulin resistances[J].Antioxid Redox Signal,2005,7(7-8):1040-1052.

[2]Geraldes P,Hiraoka Yamamoto J,Matsumoto M,et al.Activation of PKC delta and SHP-1 by hyperglycemia causes vascular cell apoptosis and diabetic retinopathy[J].Nat Med,2009,15(11):1298-1306.

[3]Fridiyand LE,Philipson LH.Reactive species and early manifestation of insulin resistance in type 2 diabetes[J].Diabetes,Obesity and Metabolism,2006,8(4):136-145.

[4]Cho SY,Park JY,Park EM,et al.Alternation of hepatic antioxidant enzyme activities and lipid profile in streptozotocin-induced diabetic rats by supplementation of dandelion water extract[J].Clin Chim Acta,2002,317(1-2):109-117.

[5]王建,耿躍春,劉少輝,等.氧化應(yīng)激對大鼠糖代謝影響的實驗研究[J].中華全科醫(yī)學(xué),2010,8(6):673.

[6]Jain S,Gaiha M,Bhattacharjee J,et al.Efects of low-dose omega-3 fatty acid substitution in type-2 diabetes mellitus with special reference to oxidative stress-a prospective preliminary study [J].J Assoc Physicians India,2002,50(8):1028-1033.

[7]李玉紅,張德芹,李曉新,等.糖脂清對2型糖尿病大鼠氧化應(yīng)激的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(11):2739-2740.

[8]李步滿,高彥彬,吳麗麗,等.中藥芪衛(wèi)顆粒對2型糖尿病大鼠腎臟氧化應(yīng)激及病理改變的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2011,12(1):21-23.