HPLC法測定水調(diào)散中鹽酸小檗堿的含量

楊躍輝，楊 君，姜清華

(中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院藥學部，遼寧 沈陽 110004)

水調(diào)散是純中藥復(fù)方制劑，具有清熱解毒、消腫止痛之功效，用于治療未破潰的瘡癤疔毒、紅腫、疼痛，療效顯著[1]。作者在此采用高效液相色譜法對水調(diào)散的主要成分——鹽酸小檗堿的含量進行了測定，結(jié)果令人滿意。

1 實驗

1.1 藥品、試劑與儀器

水調(diào)散，中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院制劑室。

鹽酸小檗堿對照品(110713-200208)，中國藥品生物制品檢定所；乙腈、甲醇均為色譜純；水為重蒸餾水；其它試劑均為分析純。

Agilent-1100型液相色譜儀(Agilent-1100系列四元泵，VWD檢測器，Agilent Chemstation色譜工作站)，美國安捷倫公司。

1.2 色譜條件

色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相為乙腈∶0.1%磷酸水=38∶62 (每100 mL加入0.1 g十二烷基磺酸鈉)[1～4]；流速為1 mL·min-1；檢測波長為265 nm；柱溫為25 ℃。理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿計應(yīng)不低于5000。

1.3 溶液的制備

(1)對照品溶液的制備：精密稱取鹽酸小檗堿對照品8.85 mg置于100 mL量瓶中，加流動相溶解至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

(2)供試品溶液的制備：精密稱取0.2 g水調(diào)散置于錐形瓶中，加入流動相約80 mL，超聲處理40 min，放冷，過濾到100 mL量瓶中加流動相至刻度，搖勻，取續(xù)濾液過0.45 μm微孔濾膜，作為供試品溶液。

(3)陰性對照品溶液的制備：按處方比例，取除水調(diào)散外的其它藥材，按生產(chǎn)工藝制備，得陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

1.4 方法

按色譜條件進樣檢測，對線性關(guān)系進行考察，并分別進行精密度實驗、重復(fù)性實驗、穩(wěn)定性實驗，對HPLC法測定水調(diào)散中鹽酸小檗堿含量進行研究。

2 結(jié)果與討論

2.1 干擾實驗

按色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液，注入色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。

A.對照品 B.供試品 C.陰性對照品

由圖1可知，鹽酸小檗堿的保留時間為9.974 min?？瞻讓嶒灍o干擾。

2.2 線性關(guān)系

分別吸取對照品溶液2.0 μL、4.0 μL、6.0 μL、8.0 μL、10.0 μL注入液相色譜儀，測定鹽酸小檗堿的峰面積，以峰面積(y)對進樣量(x)作圖，擬合線性回歸方程為：y=1866.2x+16.33(R=0.9997)，表明鹽酸小檗堿在0.177～0.885 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3 精密度

取對照品溶液5 μL進樣測定含量，平均測定5次。測得鹽酸小檗堿峰面積RSD為0.75%，表明該方法精密度良好。

2.4 重復(fù)性

取同一批樣品平行制備5份供試品溶液，進行含量測定。測得鹽酸小檗堿峰面積RSD為1.24%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5 穩(wěn)定性

取供試品溶液按 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h間隔進樣，每次10 μL。測得鹽酸小檗堿峰面積RSD為0.94%，表明供試品溶液在室溫下放置8 h基本穩(wěn)定。

2.6 回收率

取已知含量的樣品(批號20090914)5份，分別精密加入對照品溶液，按1.3方法制備供試品溶液，進行含量測定。結(jié)果見表1。

表1 回收率測定結(jié)果(n=5)

由表1可見，平均回收率為99.1%，RSD為0.89%。

2.7 樣品測定

測定3批樣品的鹽酸小檗堿含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果(n=3)

3 結(jié)論

采用HPLC法測定水調(diào)散中鹽酸小檗堿的含量。色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動相為乙腈∶0.1%磷酸水=38∶62 (每100 mL加入0.1 g十二烷基磺酸鈉)，檢測波長為265 nm。鹽酸小檗堿在0.177～0.885 μg (R=0.9997)范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，方法平均回收率為99.1%(RSD=0.89%)。該方法簡便、靈敏度高、重現(xiàn)性好，可用于水調(diào)散中鹽酸小檗堿的含量測定及質(zhì)量控制。

[1] 謝曉燕，張忠君，于春英.高效液相色譜法測定七味柏苓片中鹽酸小檗堿和五味子乙素的含量[J].中成藥，2010，32(9)：1636-1638.

[2] 張東方，周美環(huán)，袁長季.高效液相色譜法測定二仙湯中淫羊藿苷及鹽酸小檗堿的含量[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2010，30(14)：1251-1252.

[3] 沈娟，尹蓮，段金廒.HPLC法測定黃柏生物堿成分含量及在二妙丸類方中的比較研究[J].中國實驗方劑學雜志，2010，16(13)：31-34.

[4] 李榮東，史俊，蔡光先.HPLC測定超微與常規(guī)戊己丸鹽酸小檗堿含量的比較[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2010，26(22)：3374-3375.