銀杏外種皮黃酮類(lèi)化合物的提取方法研究

宋國(guó)斌，席國(guó)萍

(山西大同大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山西 大同 037009)

銀杏是地球上現(xiàn)存最古老的中生代孑遺植物之一[1]，屬銀杏科銀杏屬落葉喬木，又稱(chēng)白果樹(shù)、公孫樹(shù)，為我國(guó)特有樹(shù)種[2]。銀杏外種皮是銀杏果仁的皮層，即種子硬殼外面的肉質(zhì)皮層，俗稱(chēng)白果衣胞[3]。銀杏外種皮的主要化學(xué)成分是黃酮類(lèi)化合物、銀杏內(nèi)酯等，其中黃酮類(lèi)化合物具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、防治心血管疾病、增強(qiáng)免疫能力等重要作用。我國(guó)有著豐富的銀杏資源，但銀杏外種皮的研究相對(duì)較少。在銀杏產(chǎn)區(qū)，通常只取其仁，而將外種皮丟棄，既嚴(yán)重污染環(huán)境，又浪費(fèi)了可觀的生物資源。作者在此分別以水、乙醇、丙酮作為提取溶劑，對(duì)銀杏外種皮黃酮類(lèi)化合物的不同提取方法進(jìn)行比較研究，擬為銀杏外種皮資源的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

銀杏外種皮，采自貴州省貴陽(yáng)市烏當(dāng)區(qū)楊昌鎮(zhèn)。

蘆丁對(duì)照品，中國(guó)藥檢所；其它試劑均為分析純。

UNICO UV-2000型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海麗度電子科技發(fā)展有限公司；RE-25型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；METTLER-AE240型電子天平，瑞士梅特勒公司；康氏電動(dòng)振動(dòng)儀，北京通縣醫(yī)療器械廠。

1.2 方法

1.2.1 銀杏外種皮的前處理

將銀杏外種皮自然風(fēng)干后，置于50 ℃烘箱中烘至變脆，粉碎，置于冰箱中保存。

1.2.2 銀杏外種皮總黃酮提取液的制備

準(zhǔn)確稱(chēng)取10 g銀杏外種皮，以甲醇為溶劑，用索氏提取器在70 ℃提取至提取液無(wú)色，濃縮至干，用70%乙醇溶解定容至50 mL，待測(cè)。

1.2.3 銀杏外種皮黃酮類(lèi)化合物提取液的制備

(1)浸提法

準(zhǔn)確稱(chēng)取3份銀杏外種皮，每份10 g，在室溫下，分別以5 BV的水、乙醇、丙酮作為提取溶劑，浸提3次，每次1 h；合并提取液，于50 ℃減壓濃縮至干，用70%乙醇溶解定容至50 mL，待測(cè)。

(2)振蕩提取法

準(zhǔn)確稱(chēng)取3份銀杏外種皮，每份10 g，在室溫下，分別以5 BV的水、乙醇、丙酮作為提取溶劑，振蕩提取3次，每次1 h；合并提取液，于50 ℃減壓濃縮至干，用70%乙醇溶解定容至50 mL，待測(cè)。

(3)回流提取法

準(zhǔn)確稱(chēng)取3份銀杏外種皮，每份10 g，在70 ℃下，分別以5 BV的水、乙醇、丙酮作為提取溶劑，回流提取3次，每次1 h；合并提取液，于50 ℃減壓濃縮至干，用70%乙醇溶解定容至50 mL，待測(cè)。

1.3 測(cè)定方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品、70%乙醇為溶劑，準(zhǔn)確配制0.13 mg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液置于10 mL具塞試管中，加30%(體積分?jǐn)?shù))乙醇至5 mL；再加5%(質(zhì)量濃度)NaNO20.3 mL，搖勻，放置6 min；再加10%(質(zhì)量濃度)Al(NO3)30.3 mL，搖勻，放置6 min；再加4%(質(zhì)量濃度)NaOH 4 mL；用蒸餾水稀釋至10 mL，室溫放置15～20 min，以蒸餾水為空白。在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定吸光度，由最小二乘法得濃度與吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程，并據(jù)此計(jì)算黃酮類(lèi)化合物含量[4]。

1.3.2 銀杏外種皮總黃酮的含量測(cè)定

準(zhǔn)確量取1 mL銀杏外種皮總黃酮提取液，置于具塞試管中，按1.3.1法測(cè)定吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算黃酮類(lèi)化合物的濃度，進(jìn)而計(jì)算銀杏外種皮總黃酮的含量。

1.3.3 銀杏外種皮提取液黃酮類(lèi)化合物的含量測(cè)定

準(zhǔn)確量取1 mL銀杏外種皮提取液，置于具塞試管中，按1.3.1法測(cè)定吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算黃酮類(lèi)化合物的濃度，進(jìn)而計(jì)算銀杏外種皮提取液黃酮類(lèi)化合物的含量。按下式計(jì)算黃酮類(lèi)化合物的提取率(%)：

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程

用最小二乘法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得線(xiàn)性方程：

Y=0.09894A+0.00180(R=0.9995)

式中：Y為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mg·mL-1，A為吸光度。

2.2 銀杏外種皮總黃酮的含量

按1.3.2方法，測(cè)得銀杏外種皮總黃酮的含量為30.78 mg·g-1。

2.3 銀杏外種皮黃酮類(lèi)化合物的提取效果比較(表1)

表1 不同溶劑、不同方法銀杏外種皮黃酮類(lèi)化合物的提取率比較/%

由表1可以看出，從溶劑方面比較，乙醇的提取率最高；從提取方法比較，回流提取法提取率最高。因此，以乙醇作為溶劑、采用回流提取法提取銀杏外種皮黃酮類(lèi)化合物的提取效果最好，提取率超過(guò)84%。

2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

以乙醇為提取溶劑，采用回流提取法進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn)，提取率分別為84.60%、84.53%、84.71%，平均提取率為84.61%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0009，RSD為0.10%。表明所確定的最佳方法的重復(fù)性良好。

3 結(jié)論

比較了不同溶劑、不同方法對(duì)銀杏外種皮黃酮類(lèi)化合物的提取效果。結(jié)果表明，以乙醇作為提取溶劑，采用回流提取法提取銀杏外種皮黃酮類(lèi)化合物的效果最好，提取率超過(guò)84%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0009，RSD為0.10%。為銀杏外種皮資源的開(kāi)發(fā)利用提供了依據(jù)。

[1] 馮彤，于新，吳建生，等.不同處理方法對(duì)銀杏外種皮黃酮含量變化的影響[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2006，22(4)：178-181.

[2] 李春美，何靜仁，杜紅祥，等.銀杏果外種皮總黃酮提取工藝研究[J].食品科學(xué)，2002，23(12)：70-74.

[3] 唐于平，樓鳳昌，王歡，等.銀杏外種皮的化學(xué)成分和藥理作用[J].藥學(xué)進(jìn)展，2000，24(3)：152-155.

[4] 盧錦花，胡小玲，岳紅，等.大孔吸附樹(shù)脂對(duì)銀杏葉黃酮類(lèi)化合物吸附及解吸的研究[J].化學(xué)研究與應(yīng)用，2002，14(2)：164-166.