RP-HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地天山雪蓮藥材中去氫木香內(nèi)酯

凱賽爾·阿不拉， 蘇來(lái)曼·哈力克

(新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，新疆烏魯木齊830004)

天山雪蓮為菊科植物天山雪蓮S(chǎng)aussurea involucrate(Kar.et Kir.)Sch.﹣ Bip.的干燥地上部分，系維吾爾族習(xí)用藥材，具有補(bǔ)腎活血、強(qiáng)筋骨、溫腎助陽(yáng)、祛風(fēng)勝濕等功效，用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺寒咳嗽、月經(jīng)不調(diào)、小腹冷痛等癥狀［1］。天山雪蓮化學(xué)成分有蘆丁等黃酮類(lèi);紫丁香苷等木脂素類(lèi);大苞雪蓮內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯等內(nèi)酯類(lèi);大苞雪蓮堿等生物堿類(lèi);多糖類(lèi)等［2］。采用高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地天山雪蓮藥材中綠原酸、蘆丁、紫丁香苷已有報(bào)道［3-6］，但未見(jiàn)測(cè)定天山雪蓮藥材中去氫木香內(nèi)酯的文獻(xiàn)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)首次采用高效液相色譜法測(cè)定了天山雪蓮藥材中去氫木香內(nèi)酯，分離效果好，方法準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀，包括Waters 1525雙元高壓泵，Waters 2487雙通道紫外檢測(cè)器，Waters 717自動(dòng)進(jìn)樣器，Brezee色譜工作站;BP211D電子天平(賽多利斯公司);SK7210LHC數(shù)控超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器公司);KLZ-UP高端超純水機(jī)(臺(tái)灣艾柯成都康寧實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用純水設(shè)備廠(chǎng))。

1.2 試藥 去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):1525-200001供定量測(cè)定用)。甲醇為色譜純(Fisher公司)，水為超純水，其他試劑均為分析純。天山雪蓮藥材產(chǎn)地分別為新疆阜康、鞏留、和靜、庫(kù)車(chē)、鞏乃斯、巴里坤、青河、可可托海、特克斯、尼勒克、水西溝、水西溝(栽培)，共收集12批樣品，經(jīng)蘇來(lái)曼·哈力克主任藥師與中國(guó)科學(xué)院新疆生態(tài)地理研究所沈觀(guān)冕研究員鑒定均為Saussurea involucrate(Kar.et Kir.)Sch.-Bip。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Symmetry ShieldTMRP18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱(美國(guó) Waters公司);流動(dòng)相為甲醇-水(65∶35)，體積流量為1.0 mL/min，柱溫為30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm［1］;進(jìn)樣10 μL測(cè)定。在以上色譜條件下，與其它組分分離度良好，見(jiàn)色譜圖1。

圖1 去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品(A)和樣品(B)HPLC色譜圖

2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品10.42 mg，置10 mL量瓶中，加適量甲醇-乙酸乙酯(9∶1)的混合溶液溶解并定容，制成對(duì)照品貯備液;再精密量取此貯備液1.0 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇-乙酸乙酯(9∶1)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻(使質(zhì)量濃度為0.1042 mg/mL)。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取天山雪蓮藥材粉末(過(guò)3號(hào)篩)約0.5 g，置具塞錐型瓶中，精密加入乙酸乙酯溶液50 mL，超聲處理10 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用乙酸乙酯溶液補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 mL，揮干，殘?jiān)舆m量甲醇-乙酸乙酯(9∶1)混合溶液，使溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇-乙酸乙酯(9∶1)混合溶液定容至刻度，搖勻，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及線(xiàn)性關(guān)系考察 精密量取2.2項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液(1.042 mg/mL)0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，置 10 mL量瓶中，加甲醇-乙酸乙酯(9∶1)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL 含去氫木香內(nèi)酯 0.01042、0.0521、0.1042、0.1563、0.2084 mg 的系列質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液。分別進(jìn)10 μL，測(cè)定峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積的積分值Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，回歸方程為Y=9955412 X-69784.8，r=0.9995。去氫木香內(nèi)酯在0.1042μg～2.084 μg范圍內(nèi)成良好的線(xiàn)性關(guān)系.

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取0.1042 mg/mL的去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果去氫木香內(nèi)酯RSD為0.42%，精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品(鞏留)，照2.3項(xiàng)方法制備5份供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.199%，RSD為1.02%。結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別放置0、4、8、12、24 h 后進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，RSD 為 1.41%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗(yàn): 取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)(鞏留)的樣品9份0.25 g，每份按高、中、低分別加入對(duì)照品溶液，按 2.3項(xiàng)下操作，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 樣品的測(cè)定 分別精密稱(chēng)取12批不同產(chǎn)地天山雪蓮藥材粉末各0.5 g，每批平行2份，按2.3項(xiàng)操作，按2.1項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 供試品溶液提取溶媒的選擇 在去氫木香內(nèi)酯的提取溶媒中，曾用了甲醇-乙酸乙酯(9∶1)、二氯甲烷及乙酸乙酯、甲醇、60%乙醇，其中乙酸乙酯提取效果最好，故選用乙酸乙酯作為提取溶劑。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果(n=2)

3.2 供試品溶液提取時(shí)間的選擇 取供試品適量，以乙酸乙酯為提取溶劑，并按10 min、20 min和30 min不同時(shí)間超聲處理，結(jié)果表明超聲處理10 min即能提取完全。

3.3 本研究測(cè)定了12批不同產(chǎn)地天山雪蓮藥材中去氫木香內(nèi)酯，從測(cè)定結(jié)果來(lái)看，不同產(chǎn)地天山雪蓮藥材中去氫木香內(nèi)酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)基本一致，不受產(chǎn)地影響。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:2010年版一部［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:50.

［2］李君山，蔡少青.雪蓮花類(lèi)藥材的化學(xué)和藥理研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，1998，33(8):449-452.

［3］俞敏倩，陳建民.高效液相色普法測(cè)定11種雪蓮花中蘆丁及紫丁香苷［J］.色譜，2001，19(3):243-244.

［4］薛秀峰，陳華山，熊志立，等.RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定雪蓮注射液中3種成分的含量［J］.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，22(5):363.

［5］凱賽爾·阿不拉，蘇來(lái)曼·哈力克.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地天山雪蓮藥材中紫丁香苷的含量［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2007，42(16):1278-1279.

［6］蘇來(lái)曼·哈力克，凱賽爾·阿不拉，敏 德.RP-HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地不同采集期天山雪蓮中綠原酸及蘆?。跩］.中草藥，2007，38(9):1412-1414.