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    Survivin和PTEN在宮頸癌中的表達(dá)及相關(guān)性

    2011-07-13 09:55:42王德華
    關(guān)鍵詞:癌基因宮頸癌宮頸

    于 娟,王德華

    (天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院婦產(chǎn)科,天津300052)

    宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤,目前研究認(rèn)為,宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展與凋亡相關(guān)基因關(guān)系密切,Survivin是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制基因,它可能通過干擾腫瘤細(xì)胞凋亡和增殖平衡,促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生和進(jìn)展。抑癌基因的丟失、突變或失去功能,使激活的癌基因發(fā)揮作用而致癌,抑癌基因PTEN可能通過去磷酸化參與細(xì)胞調(diào)控從而促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展。檢測宮頸組織中Survivin基因及PTEN基因的表達(dá)對早期診斷宮頸癌及初步估計腫瘤的惡性潛能和預(yù)后有一定的應(yīng)用價值。本研究探討Survivin和PTEN與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系以及兩者之間的相關(guān)性。

    1 資料與方法

    1.1 研究對象 收集天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2007年7月至2009年7月門診活檢或住院手術(shù)病例宮頸標(biāo)本共100例,其中宮頸癌組織48例、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)組織37例,CINⅠ12例,CINⅡ12例,CINⅢ13例,以及正常宮頸組織15例。宮頸癌包括鱗狀細(xì)胞癌40例、腺癌8例,按FIGO分期(2000年):Ⅰ期20例,Ⅱ期及以上28例;其中手術(shù)28例:Ⅰ期20例,Ⅱa期5例,Ⅱb期3例(新輔助化療),手術(shù)病理示發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者8例,未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例;病理分化程度:高分化11例,中分化16例,低分化21例。所有100例病人取宮頸組織標(biāo)本前均未經(jīng)化療和放療。所有HE切片經(jīng)病理專家復(fù)核。3組病例的平均年齡(中位數(shù))分別為宮頸癌組47.5歲,CIN組48歲,正常組織組49歲,3組病例年齡經(jīng)檢驗無統(tǒng)計學(xué)差異。

    1.2 方法 兔抗人Survivin多克隆抗體,兔抗人PTEN多克隆抗體及S-P法免疫組化試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用免疫組化SP法,實驗步驟按試劑盒說明書進(jìn)行,用PBS代替一抗作為陰性對照,采用生物公司提供的陽性切片為陽性對照。

    1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 染色強度:未著色或與背景一致淺棕色為0分,著色淺為1分,中度著色為2分,著色深為3分。陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù):高倍鏡(×400)下隨機選取10個視野,每個視野計數(shù)10個細(xì)胞。取平均值作為陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。陽性細(xì)胞數(shù)<5%為0分,5%~25%為1分,26%~50%為2分,>50%為3分。根據(jù)這兩項指標(biāo)的積分?jǐn)?shù)分為4級,即陰性 (-)為0分,弱陽性(+)為 1~2 分,陽性 (++)為 3~4 分,強陽性(+++)為 5~6 分。

    1.4 統(tǒng)計方法 采用SPSS 13.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,實驗數(shù)據(jù)采用χ2檢驗,F(xiàn)isher’s精確概率法及Spearman相關(guān)分析,檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

    2 結(jié)果

    2.1 Survivin、PTEN 在正常宮頸組織、CIN、宮頸癌組織中的表達(dá) 由表1可知,Survivin在3組間的表達(dá)差異有顯著性 (χ2=29.420,P<0.05);宮頸癌組Survivin表達(dá)高于正常宮頸組及CIN組。PTEN免疫組化陽性產(chǎn)物呈棕黃色細(xì)顆粒狀,定位于細(xì)胞核內(nèi)。3 組間差異有顯著性(χ2=19.337,P<0.05);宮頸癌組PTEN表達(dá)低于正常宮頸組及CIN組。

    表1 Survivin、PTEN在正常宮頸、CIN及宮頸癌組織中的表達(dá)Tab 1 Expression of Survivin,PTEN in normal cervix,CIN and cervical carcinoma

    2.2 宮頸癌組織中Survivin、PTEN的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系 由表2可以發(fā)現(xiàn)Survivin蛋白表達(dá)陽性率在Ⅱb~Ⅳ期組高于Ⅰ~Ⅱa期組 (χ2=8.817,P<0.05),在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(χ2=4.000,P<0.05);宮頸癌中 Survivin 的表達(dá)與年齡、分化程度及組織類型均無關(guān)(P>0.05)。PTEN的表達(dá)與宮頸癌的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05),但在不同年齡PTEN的表達(dá)卻無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),Survivin、PTEN 的表達(dá)異常均可以作為預(yù)后不良的標(biāo)志。

    2.3 宮頸癌組織中Survivin與PTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析 采用Spearman秩相關(guān)對48例宮頸癌組織Survivin與PTEN進(jìn)行相關(guān)性分析,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理,Survivin與PTEN的相關(guān)系數(shù)rs=-0.753(P<0.05),說明宮頸癌組織中Survivin與PTEN的表達(dá)成負(fù)相關(guān)。

    表2 宮頸癌患者Survivin、PTEN的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系Tab 2 The relationship between clinicopathological parameters and expression of survivin,PTEN in cervical carcinoma

    3 討論

    3.1 Survivin與宮頸癌 細(xì)胞增生和凋亡的平衡一旦被打破,細(xì)胞凋亡被抑制,將導(dǎo)致細(xì)胞過度增生,變異細(xì)胞不能自主凋亡,從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。Survivin基因是一種結(jié)構(gòu)獨特的凋亡抑制蛋白(IAP)家族成員,通過直接或間接抑制凋亡基因及化療藥物等引起的細(xì)胞凋亡效應(yīng)蛋白酶caspase-3、caspase-7的活化來阻斷其引起的細(xì)胞凋亡過程[1]。Survivin基因在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá),而在幾乎所有被研究的腫瘤組織中呈高表達(dá)[2]。Survivin蛋白主要定位于腫瘤細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核上,為粗細(xì)不一的棕黃色顆粒,本資料顯示從正常組織→CIN→宮頸癌,其陽性表達(dá)逐漸增高,且臨床分期越晚其Survivin陽性表達(dá)率越高。此外其表達(dá)與宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移也有關(guān)系,這與張保華等[3]的研究結(jié)果基本一致;也與Survivin在其他腫瘤中的研究結(jié)果一致。Survivin基因表達(dá)預(yù)示腫瘤有較高的侵襲性和不良預(yù)后,在一定程度上反映了宮頸癌的惡性程度[4]。其原因主要可能是因為Survivin陽性的子宮頸癌細(xì)胞對于放射治療和化療有較高的耐受性,從而導(dǎo)致子宮頸癌患者對放射治療及化療抵抗。以上特點使Survivin可能成為判斷腫瘤患者預(yù)后及輔助腫瘤診斷的一項重要指標(biāo),也為腫瘤治療提供了新的靶點。

    3.2 PTEN與宮頸癌 PTEN基因亦稱MMAC1基因,是繼p53基因之后發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤抑制基因,也是第一個具有雙特異性磷酸酶活性產(chǎn)物的抑癌基因,在細(xì)胞生長、凋亡、黏附、遷移、浸潤等方面具有重要作用,該基因的突變失活與人類多數(shù)惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)而一直被人們所關(guān)注。最近的研究表明PTEN對維持染色體穩(wěn)定性起到重要作用,泛素化調(diào)節(jié)則賦予PTEN通過核膜的能力[5]。研究表明宮頸癌組織中PTEN陽性表達(dá)率明顯低于癌旁宮頸組織和正常宮頸組織,提示PTEN等位基因缺失和突變可能參與宮頸癌的發(fā)生。這與本研究的結(jié)果PTEN的表達(dá)隨著宮頸癌的發(fā)展而降低相一致。PTEN的表達(dá)異常可以作為預(yù)后不良的標(biāo)志。

    3.3 宮頸癌中Survivin與PTEN的相關(guān)性 在Survivin與PTEN的關(guān)系研究中文獻(xiàn)較少,張培榮等[6]的研究提示:Survivin與PTEN在宮頸鱗狀細(xì)胞癌的早期發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。抑癌基因PTEN的失活可能通過P13K/Akt途徑上調(diào)Survivin的表達(dá),使之發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、血管生長和穩(wěn)定,更有利于腫瘤生長和侵襲。PTEN的失活和Survivin的過表達(dá)是宮頸癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié),其聯(lián)合可以作為宮頸癌診斷及判斷預(yù)后的標(biāo)志物。

    [1]Zaffarni N,Costa A,Pennati M,et al.Survivin is highly expressed and promotes cell survival in malignant peritoneal mesothelioma[J].Cell Oncol,2007,29(6):453

    [2]StauberRH,MannW,KnauerSK.Nuclearandcytoplasmicsurvivin:molecular mechanism,prognostic,and therapeutic potential[J].Cancer Res,2007,67(13):5999

    [3]張保華,盧實,王澤華.子宮頸癌組織中survivin基因的表達(dá)及其臨床意義[J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2004,20(4):384

    [4]李素文,朱寶申,孫麗娟,等.Survivin在宮頸癌組織中表達(dá)規(guī)律及臨床意義[J].河北醫(yī)藥,2009,31(14):1743

    [5]Baker SJ.PTEN enters the nuclear age[J].Mol Cell,2007,128(1):25

    [6]張培榮,鄭錦花,王艷萍,等,Survivin與PTEN蛋白在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2007,12(4),271

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