三種奧硝唑PLGA緩釋制劑體外釋放度的比較*

劉 霞

(南開大學(xué)附屬口腔醫(yī)院，天津 300041)

奧硝唑為一種繼甲硝唑、替硝唑之后的第三代新型硝基咪唑類衍生物，具有良好的抗厭氧菌作用，具有抗菌、鎮(zhèn)痛、消炎及促進潰瘍愈合作用。聚乳酸(PLA)是一種生物降解高分子材料，但存在親水性能差等不足缺點。因此，近年來使用各種PLA的親水改性研究日漸深入，尤其是利用羥基脂肪酸-乙醇酸(GA)合成共聚物聚(乳酸-乙醇酸，PLGA)的研究。牙周袋給藥系統(tǒng)是將制劑置于牙周袋中,藥物直接作用于靶器官(牙周組織)的一種制劑方式。藥物從固體制劑中釋放的速度和程度，在一定程度范圍內(nèi)反應(yīng)了藥物的吸收情況。通常采用的體外釋放度測定方法來反映牙周袋給藥系統(tǒng)的體內(nèi)釋藥情況。為全面考查奧硝唑-PLGA緩釋制劑質(zhì)量，本實驗對其釋放度的測定方法進行了探討，并對3種奧硝唑-PLGA緩釋制劑釋放度進行比較。

1 儀器與試藥

1.1儀器 AX200電子天平(日本島津公司)，W201F 型恒溫水浴鍋(上海申生科技有限公司)，DGG-101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市天宇實驗儀器有限公司)，DZG-401型電熱真空干燥箱(天津市天宇實驗儀器有限公司)，HZS-H型水浴振蕩器(哈爾濱市東聯(lián)技術(shù)開發(fā)有限公司)，XS-212光學(xué)顯微鏡(南京江南光電股份有限公司)，2XZ-2型旋片式真空泵(浙江黃巖求精真空泵廠)，F(xiàn)INNPIPETTE型可調(diào)式移液器(上海熱電儀器有限公司)，F(xiàn)D-1型冷凍干燥機(北京博醫(yī)康實驗有限公司)，KDC-160HR高速冷凍離心機(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司)，UV-2450紫外分光光度計(蘇州島津工廠)，DF-101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌儀(鞏義市英峪予華儀器廠)。

1.2試藥 奧硝唑(藥用，湖南九典制藥有限公司)，無水乙醇(分析純，天津市化學(xué)試劑六廠)，聚乙烯醇(PVA，1788，上海金樹脂粉末有限公司)，二氯甲烷(分析純，天津大學(xué)科威公司)，CMC-Na(藥用，淮南山河藥用輔料有限公司)，海藻酸鈉(分析純，上海天蓮精細化工有限公司)，淀粉(食用，天津中英保健食品有限公司)，PLGA (75∶25，Mw: 2200，自制)，磷酸二氫鉀(分析純，天津大學(xué)科威公司)，氫氧化鈉(分析純，天津大學(xué)科威公司), 純化水(分析純,天津市南開區(qū)純水供應(yīng)站)。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1奧硝唑緩釋微球、膜劑、棒劑的制備

2.1.1奧硝唑緩釋微球的制備——液中干燥法 PVA溶液的配制：精密稱取PVA 1.500 g放入錐形瓶，加50 ml純化水95 ℃電熱磁力攪拌加熱至全部溶解，得到濃度為3%的PVA溶液備用。

量取50ml上述已配制的PVA溶液(0.03 g/ml)放入200 ml的燒杯中備用，將400 mg PLGA溶解于10 ml有機溶媒二氯甲烷中，將奧硝唑加入上述有機相中，攪拌至溶解，將該乳液迅速加入到上述PVA水溶液中，以1 000 r/min攪拌30 min，再在室溫下以800 r/min的速度攪拌4 h，使二氯甲烷完全揮發(fā)，用純化水洗4～5次除去微球表面粘連的PVA及未被包封的奧硝唑，離心、凍干、收集微球。

2.1.2奧硝唑緩釋膜劑、棒劑的制備

2.1.2.1處方 奧硝唑0.15 g，羧甲基纖維素鈉0.30 g，海藻酸鈉0.20 g，淀粉0.15 g，PLGA 0.20 g，二氯甲烷0.50 ml，純化水適量。

2.1.2.2奧硝唑緩釋膜劑的配制方法 將海藻酸鈉加入10 ml純化水中充分溶脹得A液，將PLGA加入二氯甲烷中，40 ℃水浴加熱至溶解，待冷至室溫后加入CMC-Na、淀粉、奧硝唑即得B液，將A液加入B液中，充分攪拌，混勻，靜置。待氣泡除盡后涂膜，50 ℃干燥，脫膜，分割成所需大小的膜片(每片約含奧硝唑1 mg)，在紫外燈下照射15 min滅菌，密封包裝。

2.1.2.3奧硝唑緩釋棒劑的配制方法 按上述方法，將靜置后的溶液氣泡除盡后，加入20 ml針管中，擠出得棒狀物，50 ℃干燥，分割成所需大小的棒劑(每棒約含奧硝唑1 mg)，在紫外燈下照射15 min滅菌，密封包裝。

2.2奧硝唑含量測定方法的建立

2.2.1奧硝唑檢測波長的確定 配制濃度為0.02 mg/ml的奧硝唑溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進行紫外吸收波長掃描，掃描結(jié)果見圖1。由圖1得出奧硝唑的紫外最大吸收波長是319 nm。

2.2.2干擾試驗 配制10 mg/ml PLGA的乙醇溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進行紫外吸收波長掃描，掃描結(jié)果見圖2。由圖可看出該溶液在202 nm處有最大吸收，而在319 nm處無吸收，對奧硝唑的檢測無干擾。

圖1 奧硝唑紫外掃描圖譜

圖2 空白微球紫外掃描圖譜

2.2.3奧硝唑標準曲線的建立 精密稱取奧硝唑?qū)φ掌?10 mg，用純化水溶解，在50 ml量瓶中定容，依次取100、250、375、500、750和1 000 μl至10 ml量瓶中，加入純化水定容,濃度分別為2.0、5.0、7.5、10.0、15.0和20.0 μg/ml，在319 nm處測吸收度，以濃度C對吸收度A做圖，并進行線性回歸。結(jié)果見表1。

表1 不同濃度奧硝唑的紫外吸收值

以奧硝唑濃度為橫坐標，319 nm處的吸光度為縱坐標可得回歸方程為：A=0.042 39C+0.111 93，r=0.999 91(n=6)，在319 nm處，奧硝唑的濃度C在2.0～20.0 μg/ml范圍內(nèi)與吸光度A有良好的線性關(guān)系。

2.2.4回收率試驗 結(jié)果表明，平均回收率為(100.01±0.85)%，相對標準偏差<±5.0%，符合測定要求,見表2。

表2 回收率試驗結(jié)果

2.3PBS緩沖溶液的配制 精密稱取磷酸二氫鉀13.6 g，加入0.1 mol/L的氫氧化鈉790 ml中，用純化水稀釋至2 000 ml即得，備用。

2.4奧硝唑-PLGA微球、膜劑、棒劑體外釋放度的測定[1]采用恒溫振蕩法作制劑體外釋藥試驗[2]，分別稱取3批奧硝唑-PLGA微球、膜劑和棒劑各100 mg，每批包含3個樣品，放入27個不同的塑料套管中，分別加入1 ml緩沖鹽溶液，用密封膠封口，放入搖床中振蕩，溫度設(shè)為37 ℃，轉(zhuǎn)速為100 r/min, 分別在1、3、7、12、24、2和3 d等不同時間段取出塑料套管，離心，取出上清液，同時立即補加等量的緩沖液(pH 7.4)，樣品用紫外分光光度法在319 nm處測定吸光度，按回歸方程測定釋藥量，計算累積釋藥百分率，以累積釋藥百分率對時間作圖，釋放結(jié)果見表3。

表3 奧硝唑-PLGA制劑體外釋放結(jié)果(n=3)

2.5奧硝唑-PLGA微球、膜劑、棒劑釋放參數(shù)的比較 運用Excel[3]程序 計算奧硝唑-PLGA微球、膜劑、棒劑體外釋放參數(shù)m、T50、Td的值，結(jié)果見表4。

表4 奧硝唑-PLGA微球、膜劑、棒劑釋放參數(shù)比較

3 討論

本實驗采用紫外分光光度法測定3種奧硝唑-PLGA緩釋制劑的釋放度，具有操作簡便、靈敏度高、適用范圍廣和方法準確度好等特點。

實驗結(jié)果表明，3種奧硝唑-PLGA緩釋制劑的累積釋放百分率均在75%以上，符合國家藥品標準。總體上說，吸收速度受釋放速度限制的藥物，其生物利用度與釋放速度有較好的相關(guān)性。

本實驗根據(jù)奧硝唑-PLGA微球、膜劑、棒劑的釋放曲線計算出的T50和Td值與實際情況有所偏差，原因可能是釋放曲線是平滑的曲線，采用線性方法來計算，相關(guān)系數(shù)達不到標準，使得計算結(jié)果有誤差。推測對于釋放曲線更接近直線型的制劑則誤差較小。

綜上所述，該方法線性范圍寬，回收率高，溶液穩(wěn)定性良好，可用于奧硝唑-PLGA制劑的釋放度分析。

1 周毅生，秦梅頌，咸銀庫，等.奧硝唑結(jié)腸定位腸溶片質(zhì)量標準的研究.廣東藥學(xué)院學(xué)報，2007,23(6)：603

2 楊秀玲，張志清，董立. 阿昔洛韋白蛋白微球的制備及體外釋藥.中國藥學(xué)雜志，2000, 35(10): 676

3 方崇波.運用Excel程序快速計算片劑的溶出度參數(shù).中國藥業(yè)，2006,15(18):41