原發(fā)性肝細(xì)胞癌拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα表達及其與P53和AFP之間的關(guān)系*

陳漫霞,陳思東,陳漫容,姚振江,蔡旭玲

(1.廣東藥學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院,廣州510310;2.廣州市中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院,廣州510260)

拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα(topoisomeraseⅡ alpha,TopoⅡα)是在DNA復(fù)制和重組中起重要作用的一種核酶,目前多作為腫瘤多藥耐藥判斷指標(biāo)及抗腫瘤藥物的靶點研究[1]。TopoⅡα所介導(dǎo)的耐藥和細(xì)胞內(nèi)藥物靶酶活性改變或DNA修復(fù)機制有關(guān),稱非典型多藥耐藥(atypical MDR,at-MDR)[2]。有研究發(fā)現(xiàn),TopoⅡα表達與 P53表達異常有關(guān),Sandri等[3]研究發(fā)現(xiàn),野生型P53能下調(diào)TopoⅡα基因的表達,而突變型P53能增加TopoⅡα基因的表達,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥。本研究采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測原發(fā)性肝細(xì)胞癌(primary hepatocellular carcinoma,PHC)組織中 TopoⅡα和P53的表達情況,分析TopoⅡα表達與PHC患者的臨床特征和P53表達之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2008年 9月至 2009年8月在廣州市某兩家三級甲等醫(yī)院擇期行原發(fā)性肝癌手術(shù)病例125例,其中男性110例,女性15例;年齡19～83歲,平均(49.57±12.1)歲。病例均經(jīng)術(shù)后病理診斷為肝細(xì)胞癌。按肝癌臨床病理分級分為:高分化33例、中分化 69例、低分化 23例。所有病例術(shù)前未接受過任何化療或放療。

1.2 試劑 TopoⅡα單克隆抗體、P53單克隆抗體、免疫組化SP試劑盒、DAB顯色劑等試劑(北京中杉生物技術(shù)有限公司)。

1.3 方法 組織標(biāo)本來源于PHC患者手術(shù)切除的肝癌組織,根據(jù)TopoⅡα的表達,將PHC患者分為TopoⅡα陽性組和TopoⅡα陰性組。根據(jù)P53的表達,將PHC患者分為P53陽性組和P53陰性組。肝癌組織經(jīng)固定、脫水、常規(guī)石蠟包埋。將石蠟標(biāo)本連續(xù)切片,進行常規(guī)蘇木素-伊紅(HE)染色和免疫組織化學(xué)染色。檢測方法為免疫組化SP二步法,用檸檬酸鹽緩沖液高壓抗原修復(fù),操作步驟嚴(yán)格按照SP試劑盒說明書進行。用已知陽性片作陽性對照,用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered solution,PBS)代替第1抗體作陰性對照。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)及分組 TopoⅡα、P53陽性表達主要位于肝細(xì)胞的細(xì)胞核,呈黃色顆粒。判斷標(biāo)準(zhǔn)參照Faggad的評分方法[4],陽性細(xì)胞百分率:0%為 0分,＞0～10%為 1分,＞10%～50%為2分,＞50%～80%為3分,＞80%為 4分;按陽性細(xì)胞著色強度分為:無色為0分、淺黃色為 1分、黃色為2分、棕黃色為3分;再將陽性細(xì)胞百分率和著色強度的得分相乘,得分小于或等于2分者為陰性,得分大于2分為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS15.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析,資料采用 EpiData3.1錄入,組間比較采用χ2檢驗,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 TopoⅡα和P53在PHC組織中的表達 在125例PHC組織中,TopoⅡα和 P53陽性率分別為 48.00%(60/125)、32.80%(41/125)。TopoⅡα陽性率高于P53(χ2=8.805,P＜0.05)。

2.2 PHC組織中TopoⅡα表達與臨床特征的關(guān)系

表1 PHC組織中TopoⅡα表達與臨床特征的關(guān)系

由表1可見,隨著PHC患者年齡的增長 TopoⅡα陽性率有升高的趨勢,但不同年齡段患者TopoⅡα陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)?；颊哐錋FP水平升高,TopoⅡα陽性率高于血清 AFP正常者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。HBV感染陽性患者,TopoⅡα陽性率高于HBV感染陰性者,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。TopoⅡα陽性率與腫瘤大小、肝癌細(xì)胞分化程度、血清AST水平、肝硬化、肝癌家族史等因素?zé)o關(guān)(P＞0.05)。

表2 TopoⅡα表達與P53基因的關(guān)系

2.3 TopoⅡα表達與 P53基因的關(guān)系 在 P53陽性組中 TopoⅡα陽性率(73.17%)高于 P53陰性組(35.71%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.805,P=0.000),TopoⅡα表達與 P53表達有相關(guān)關(guān)系(r=0.352,P=0.000)。見表2。

3 討 論

TopoⅡα是在DNA復(fù)制和重組中起重要作用的一種核酶,目前多作為腫瘤多藥耐藥判斷指標(biāo)及抗癌藥物的靶點研究[1]。本研究結(jié)果顯示,原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中TopoⅡα陽性率為48.00%,與張燕等[5]研究結(jié)果中的 TopoⅡα陽性率(53.98%)相近。甲胎蛋白(alpha-fetal protein,AFP)是原發(fā)性肝細(xì)胞癌的相對特異性標(biāo)志物,其變化對PHC的早期診斷、治療療效具有重要作用[6],AFP值的增高常常提示PHC的進展[7]。有研究發(fā)現(xiàn),肝細(xì)胞癌患者可表現(xiàn)出血清AFP水平升高,且其水平的高低與肝細(xì)胞癌病程具有相關(guān)性[8]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),血清 AFP水平升高者的TopoⅡα陽性率高于AFP水平正常者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,說明血清AFP水平與 TopoⅡα表達關(guān)系密切。有研究發(fā)現(xiàn),PHC組織中TopoⅡα表達與腫瘤細(xì)胞分化程度有關(guān),腫瘤細(xì)胞分化程度越低,TopoⅡα表達越高[9-10]。但也有研究認(rèn)為,TopoⅡα表達與其腫瘤細(xì)胞分化程度無關(guān)[11]。本研究結(jié)果顯示,TopoⅡα陽性率與肝癌細(xì)胞分化程度無關(guān)。隨著PHC患者年齡增加,TopoⅡα陽性率有增加的趨勢,但不同年齡段TopoⅡα表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義。TopoⅡα表達與腫瘤大小、血清天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平等因素?zé)o關(guān),與文獻[11-12]報道相似。

P53是重要的抑癌基因,是目前與化療敏感性關(guān)聯(lián)最高的基因,不僅與凋亡和DNA修復(fù)有關(guān),而且在惡性腫瘤中突變率最高[13]。Sandri等[3]研究發(fā)現(xiàn),野生型 P53能下調(diào) TopoⅡα基因的表達,而突變型P53能增加TopoⅡα基因的表達。但也有學(xué)者研究認(rèn)為在細(xì)胞中野生型P53可刺激M DR1啟動子,而突變型 P53則無此作用[14]。本研究結(jié)果顯示,在P53陽性組中TopoⅡα陽性率明顯高于P53陰性組,表明了P53基因表達異常與TopoⅡα陽性表達有關(guān),即攜帶突變型P53基因的PHC組織中TopoⅡα陽性率高于野生型P53者,由此推測TopoⅡα表達可能與P53基因突變的誘導(dǎo)有關(guān)。但在P53陰性組中仍有部分PHC病例 TopoⅡα基因陽性表達,這提示除突變型P53基因外還有其他機制調(diào)控這個多藥耐藥基因的表達。

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