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    2型糖尿病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群及Treg細(xì)胞檢測及臨床應(yīng)用

    2011-06-14 03:10:36李昊淼許曉風(fēng)
    山東醫(yī)藥 2011年40期
    關(guān)鍵詞:亞群外周血活化

    遲 林,李昊淼,許曉風(fēng)

    (首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院,北京100730)

    近年來糖尿病(DM)炎癥發(fā)病學(xué)說逐漸形成,認(rèn)為DM是一種自然免疫和炎癥性疾病,是代謝綜合征的重要組成。炎癥的發(fā)生與機(jī)體的免疫狀態(tài)密切相關(guān),已有文獻(xiàn)表明2型DM(T2DM)的發(fā)病與免疫功能紊亂有關(guān),本研究采用流式細(xì)胞測定技術(shù)檢測T2DM患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及Treg細(xì)胞的變化,探討其臨床意義。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 2010年3~9月在我院就診的T2DM患者120例,其中男74例、女56例,年齡35~81歲,均符合1997年美國糖尿病學(xué)會診斷標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)眼科及內(nèi)科檢查,將患者分為有血管病變組68例,男39例、女29例,年齡43~81歲;無血管病變組52例,男30例、女22例,年齡37~68歲;對照組40例為我院健康體檢者,男20例、女20例,年齡20~65歲。

    1.2 儀器與試劑 美國Beckman Coulter FC500流式細(xì)胞儀,CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5,CD16+56-PE/CD3-FITC,同型對照 IgG1mouse FITC/IgG1mouse PE,CD4-PC5,CD25-PE,同型對照IgG2a mouse PE,IgG1mouse PC5,Lysing Solution,PBS均為美國Beckman Coulter公司生產(chǎn)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法 所有觀察對象空腹取靜脈血2 ml于EDTA-K2真空抗凝采血管內(nèi),混勻,室溫保存。取不同熒光標(biāo)記抗體各20 μl加入100 μl抗凝外周血中,避光孵育 20min,加入 Lysing Solution 500 μl,避光孵育10min,加入PBS 500 μl避光孵育10min,1 500 r/min離心5min,洗滌2次,加入PBS 1 000 μl,上機(jī)檢測,記錄陽性細(xì)胞百分率。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 全部數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,數(shù)據(jù)采以±s表示,兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn),以P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

    2 結(jié)果

    表1 T2DM患者與正常對照組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果(%,±s)

    表1 T2DM患者與正常對照組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果(%,±s)

    注:與對照組比較,*P <0.05

    組別 n CD3+ CD4+/CD3+ CD8+/CD3+ CD4+/CD8+ CD16++CD56+/CD3-CD4+CD25+無血管病變組 52 58.44 ±7.81* 36.56 ±4.56 26.33 ±4.98* 1.31 ±0.44* 19.02 ±6.63* 9.39 ±2.12*伴血管病變組 68 57.65 ±7.35* 36.02 ±4.32 25.47 ±4.26* 1.29 ±0.52* 18.76 ±5.98* 8.99 ±2.03*對照組 40 65.93 ±6.76 37.17 ±5.81 23.66 ±3.66 1.43 ±0.42 22.46 ±6.75 10.43 ±2.07

    3 討論

    NK細(xì)胞被譽(yù)為天然免疫核心細(xì)胞,人類NK細(xì)胞的特征性表面標(biāo)志是CD56和CD16分子,不表達(dá)CD3分子。NK細(xì)胞無需預(yù)先致敏直接殺傷靶細(xì)胞,有清除病毒感染的生物學(xué)活性,活化的NK細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子和趨化因子,如分泌INF、IL-2及TNF等,參與天然免疫和獲得性免疫。NK細(xì)胞活性降低,直接殺傷靶細(xì)胞功能下降,同時(shí),產(chǎn)生的細(xì)胞因子減少,減弱了細(xì)胞免疫的正調(diào)節(jié)作用,抑制T細(xì)胞的增殖、分化及成熟,使得機(jī)體免疫功能降低,對炎癥的監(jiān)視及清除功能減弱。

    調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一群具有負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)的淋巴細(xì)胞,起著維持自身耐受和避免免疫過度損傷機(jī)體的作用。細(xì)胞被認(rèn)為是天然產(chǎn)生的細(xì)胞群,它起源于胸腺,存在于正常機(jī)體內(nèi)。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞具有低反應(yīng)性與免疫抑制兩大功能[4],這些抑制功能的發(fā)揮是接觸式抑制,不是細(xì)胞因子依賴性的抑制。它對IL-2、特異性抗原及 APC的刺激呈低反應(yīng)性,活化的細(xì)胞可抑制的T細(xì)胞表達(dá)IL-2,抑制其的活化與增殖;細(xì)胞活化后CTLA-4分子表達(dá)增加,影響T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)[5]。IL-2是T細(xì)胞生長因子,當(dāng)IL-2水平降低時(shí),Treg細(xì)胞的免疫抑制作用減弱[6],T細(xì)胞增殖受抑制,細(xì)胞免疫功能減弱。Salomon等首次證實(shí)NOD鼠Treg細(xì)胞數(shù)目減少和功能缺陷是其進(jìn)展為DM 的重要因素[7]。

    總之,T2DM患者存在細(xì)胞免疫功能紊亂。由于免疫功能下降,合并各種感染的機(jī)會增加,致殘率及病死率增加,DM患者的免疫調(diào)節(jié)應(yīng)予重視,加強(qiáng)細(xì)胞免疫功能的監(jiān)測對病情判斷、療效觀察有重要意義。

    [1]King GL.The role of inflammatory cytokines indibetes and its complications[J].J Periodontol,2008,79(8 Suppl):1527-1534

    [2]鄧向群,陳璐璐.胰島β細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制[J].國際內(nèi)分泌代謝雜志,2006,26(3):163-166.

    [3]Joussen AM,Doehmen S,Le ML,et al.TNF-alpha mediated apoptosis plays an important role in the development of early diabetic retinopathy and long-term histopathological alterations[J].Mol Vis,2009,15:1418-1428.

    [4]Fontenot JD,Rudensky AY.A well adapted regulatory contrivance:regulatory T cell development and forkhead family transcripition factor Foxp3 [J].Nat Immunol,2005,6(4):331-337.

    [5]Pereira FO,F(xiàn)rode TS,Medeiros YS.Evaluation of tumour necrosis factor alpha,interleukin-2 soluble receptor,nitric oxide metabolites,and lipids as inflammatory markers in type 2 diabetes mellitus[J].Mediators Inflamm,2006,2006(1):39062.

    [6]曾靜波,王姮.2型DM與自身免疫反應(yīng)[J].國際內(nèi)分泌代謝雜志,2007,27(4):264-266.

    [7]Slaomon B,Lenschow DJ,Rhee L,et al.B7/CD28 costimulation is essential for the homeostasis of the CD4+CD25+immunoregulatory T cells that control autoimmune diabetes[J].Immunity,2000,12(4):431-440.

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