蛇床子配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

陳培勝 廖彩震 張文惠 朱月信

蛇床子為傘形科植物蛇床子[Cnidiummonnieri(L.) Cuss]的干燥成熟果實(shí)，具有燥濕祛風(fēng)，殺蟲止癢，溫腎壯陽的功能，用于陰癢帶下，濕疹瘙癢，濕痹腰痛、腎虛陽痿，宮冷不孕。蛇床子配方顆粒由蛇床子提取、濃縮、干燥、制粒而成，為有效地控制蛇床子配方顆粒的質(zhì)量，安徽省中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心按照國家食品藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的《中藥配方顆粒管理暫行規(guī)定》通知要求[1]，借鑒中國藥典[2]蛇床子項(xiàng)下的鑒別和含量測定方法及配方顆粒薄層色譜鑒別方法研究[3]，采用薄層色譜法對(duì)蛇床子配方顆粒進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法對(duì)蛇床子配方顆粒的主要活性成分蛇床子素進(jìn)行定量分析。結(jié)果表明，該方法簡便可行，靈敏度高、重復(fù)性好，能有效地控制蛇床子配方顆粒的質(zhì)量，保證配方顆粒在不具備中藥飲片外形后臨床用藥的安全有效。

1 儀器、試劑與樣品

Agilent1200色譜系統(tǒng)(G1611A型四元泵，G1329A型自動(dòng)進(jìn)樣器，G1314B型VWD檢測器，Agilent化學(xué)工作站)；BT25S型電子分析天平(德國賽特利斯)；FA2104SN型電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；UV-8三用紫外儀(無錫科達(dá)儀器廠)；Hu-10260B型超聲清洗器(天津恒奧科技發(fā)展有限公司)；硅膠GF254薄層板(青島海洋化工廠)。

乙腈(色譜純，天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)；乙醇(分析純，鄭州派尼試劑廠)；純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)；其余試劑均為分析純。

蛇床子素對(duì)照品(供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110822-200305)；蛇床子對(duì)照藥材，購自安徽亳州中藥材市場，經(jīng)鑒定為傘形科植物蛇床子[Cnidiummonnieri(L.) Cuss]的干燥成熟果實(shí)(由安徽中醫(yī)學(xué)院生藥教研室俞年軍教授鑒定)；蛇床子配方顆粒(安徽濟(jì)人藥業(yè)有限公司、安徽中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心提供)。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

取蛇床子配方顆粒粉末0.3 g，加乙醇5 ml，超聲處理5分鐘，放置，取上清液作為供試品溶液。另取蛇床子對(duì)照藥材4 g，加水100 ml，煮沸30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? ml，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取蛇床子素對(duì)照品，加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各6 μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以甲苯—乙酸乙酯—正己烷(3∶3∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見圖1。

圖1 蛇床子配方顆粒薄層色譜圖(365 nm)

2.2 蛇床子素含量測定

2.2.1 色譜條件 Agilent HC-C18色譜柱(4.6×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈—水(65：35)；檢測波長：322 nm；柱溫：35℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl；理論板數(shù)按蛇床子素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取恒重的蛇床子素對(duì)照品適量，加乙醇制成每l ml中含20 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取蛇床子配方顆粒約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇25 ml，密塞，稱定重量，放置2小時(shí)，超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)30分鐘，自然冷卻，再稱定重量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量。精密量取上清液5 ml，置10 ml的量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 測定法 分別精密吸取蛇床子素對(duì)照品溶液、供試品溶液各5 μl，注入液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果見圖2。

(a)蛇床子素對(duì)照品

(b)蛇床子配方顆粒供試品

2.2.5 線性關(guān)系與范圍的考察 精密吸取蛇床子素對(duì)照品溶液0.5、1、2、3、5 μl進(jìn)行色譜測定，按上述2.2.1色譜條件測定峰面積，以蛇床子素含量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為Y=29.632X+0.295,相關(guān)系數(shù)r=0.99999，結(jié)果表明在2.0～20.0 μg/ml范圍內(nèi)蛇床子素濃度與峰面積積分值有良好的線性關(guān)系。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一蛇床子素對(duì)照品溶液與蛇床子配方顆粒供試品溶液，分別測定5次，每次間隔1小時(shí)，結(jié)果表明蛇床子素對(duì)照品與蛇床子配方顆粒供試品溶液在4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，穩(wěn)定性良好，峰面積RSD值分別為0.13%和0.31%。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 取蛇床子素對(duì)照品溶液，連續(xù)5次重復(fù)進(jìn)樣，得到峰面積積分值并計(jì)算其RSD為0.23%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一供試品5份，按供試品制備與測定方法進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)樣品制備并測定，得到供試品的蛇床子素含量為1.53 mg/g，RSD為1.77%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知含量的樣品共5份，分別精密加入蛇床子素對(duì)照品溶液各0.1 ml，按供試品制備與測定方法進(jìn)行回收率試驗(yàn)樣品溶液的制備并測定，結(jié)果見表1。得到的蛇床子素回收率在98%～102.2%之間，說明樣品制備方法和檢測方法均可行。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.10 樣品含量測定

精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各5 μl，分別注入液相色譜儀，測定，外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見表2。

表2 10批樣品中蛇床子素含量測定結(jié)果

批號(hào)含量(mg/g) 批號(hào) 含量(mg/g) 0812411.7980812461.8380812421.9030812471.8940812431.8550812481.8880812441.9130901011.8260812451.8610901021.797

3 討論

蛇床子化學(xué)成分主要包括揮發(fā)油及香豆素類化合物等[4]，其中香豆素類化合物蛇床子素為其主要活性成分，故本實(shí)驗(yàn)以蛇床子素含量作為控制指標(biāo)。

蛇床子配方顆粒為單味中藥濃縮顆粒，根據(jù)《中藥配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說明的編寫要求》，鑒別方法盡量保持與藥典的一致性[1]。本試驗(yàn)薄層色譜鑒別和含量測定方法依據(jù)中國藥典一部蛇床子藥材鑒別和含量測定項(xiàng)下方法進(jìn)行，為了與配方顆粒的制備工藝一致,對(duì)照藥材溶液的制備采取水煮提取,水提液蒸干再用乙醇提取的方法。得到的薄層色譜圖斑點(diǎn)清晰、背景干擾少，靈敏度高、重現(xiàn)性好；液相色譜圖蛇床子素的對(duì)稱性、分離度良好。蛇床子配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究未見文獻(xiàn)報(bào)道，該研究經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)，最終確定以藥典藥材鑒別方法建立蛇床子配方顆粒鑒別方法，取得較好的效果，對(duì)中藥配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化研究具有示范意義。

根據(jù)蛇床子藥材含量測定結(jié)果10批蛇床子配方顆粒含測結(jié)果、中試生產(chǎn)投料量、出膏率等指標(biāo)，可暫定蛇床子配方顆粒每袋裝0.6 g，相當(dāng)于10 g飲片，每袋含蛇床子素不得少于0.75 mg。

[1] 國家藥品監(jiān)督管理局.關(guān)于印發(fā)《中藥配方顆粒管理暫行規(guī)定》的通知(國藥監(jiān)注[2001]325號(hào)).2001-07-05.

[2] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2005：219-220,295-266.

[3] 陳培勝，廖彩震，成守玲,等.白花蛇舌草配方顆粒薄層色譜鑒別方法研究.環(huán)球中醫(yī)藥，2010,3(5)：347-348.

[4] 鄭虎占，董澤宏，佘靖. 中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用[M]. 北京：學(xué)苑出版社，1997: 4133.