翻白草水提取物對(duì)自發(fā)2型糖尿病db/db小鼠降糖作用的研究

嚴(yán)哲琳 孫文 楊美娟 劉銅華

繼癌癥和心腦血管疾病之后，糖尿病逐漸成為危害人類(lèi)健康的三大殺手之一。近年來(lái)糖尿病發(fā)病人數(shù)不斷增長(zhǎng)，據(jù)統(tǒng)計(jì)，2010年全球成年人糖尿病(20～79歲)的發(fā)病率為6.4%，即2.85億。預(yù)計(jì)到2030年這一數(shù)字將會(huì)達(dá)到4.39億[1]。傳統(tǒng)中藥及民間方藥防治2型糖尿病有著不可取代的優(yōu)勢(shì)，其療效穩(wěn)定、副反應(yīng)少，受到各國(guó)研究學(xué)者的廣泛關(guān)注。

翻白草(PotentilladiscolorBunge)別名天青地白草、雞腳兒，屬薔薇科植物，為多年生草本，用其全草及根入藥。其味甘、微苦，性平、無(wú)毒[2]，歸肝、胃、大腸經(jīng)。具有清熱潤(rùn)燥、涼血解毒、止血消腫、止痢之功效。近年來(lái)在糖尿病的治療中取得了良好的臨床效果[3]，民間有用翻白草泡水降糖的偏方。目前，有關(guān)翻白草降糖作用的實(shí)驗(yàn)研究已有不少報(bào)道，但大多采用四氧嘧啶(alloxan)或鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ)等化學(xué)試劑誘導(dǎo)的糖尿病動(dòng)物模型為主[4-13]，而此類(lèi)動(dòng)物模型與人類(lèi)2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制存在較大差距。為深入了解翻白草的降糖療效，本實(shí)驗(yàn)采用國(guó)際公認(rèn)的自發(fā)2型糖尿病動(dòng)物模型C57BL/KsJ-db/db小鼠觀察翻白草水提取物的降糖作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性，6周齡db/db小鼠24只，SPF級(jí)，體重(44.7±4.3)g。db/m小鼠6只，SPF級(jí)，體重(26.59±1.89)g。購(gòu)自上海應(yīng)為信生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)藥物

翻白草提取物由北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院徐暾海教授提供。藥材提取方法均為水提取液，方法簡(jiǎn)述如下：中藥生藥加水煎煮3次，加水量分別為生藥體積的10倍量、10倍量以及8倍量，煎煮時(shí)間分別為1.5小時(shí)、1.5小時(shí)以及1小時(shí)，濾過(guò)，合并3次煎煮所得濾液，濃縮至稠膏，70℃真空干燥，粉碎，過(guò)80目篩。即1 g提取物相當(dāng)于生藥5.95 g；鹽酸吡格列酮片：北京太洋藥業(yè)有限公司，批號(hào)：H20040267。

1.3 動(dòng)物分組及給藥

動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組，翻白草高劑量組、低劑量組、吡格列酮組，另取db/m小鼠6只為正常組。吡咯列酮組(4.05 mg·kg-1·bw-1)、翻白草高劑量組(400 mg·kg-1·bw-1)和低劑量組(200 mg·kg-1·bw-1)，中藥以生藥量計(jì)，灌胃給藥，給藥周期為4周。正常組及模型組灌服等體積無(wú)菌水。試驗(yàn)期間所有動(dòng)物以SPF級(jí)飼養(yǎng)，12小時(shí)明/暗交替，自由飲水進(jìn)食。

1.4 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

采用羅氏血糖儀測(cè)定空腹及隨機(jī)血糖，小鼠于給藥前及實(shí)驗(yàn)4周末(第28日)，空腹12小時(shí)，眼內(nèi)眥靜脈采血檢測(cè)血清胰島素水平，采用胰島素放射免疫分析藥盒(Insulin Radioimmunoassay Kit)，按照說(shuō)明書(shū)標(biāo)準(zhǔn)化操作。按照李光偉[14]法計(jì)算胰島素敏感指數(shù)，公式ISI=Ln[1/(FINS×FBG)]

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 翻白草提取物對(duì)血糖的影響

與正常組相比，模型組空腹血糖明顯升高(P<0.05)。翻白草提取物及吡格列酮干預(yù)4周后，與模型組比較，各藥物處理組空腹血糖顯著下降(P<0.05)。其中西藥吡格列酮組下降31.34%，翻白草高劑量組下降26.96%，翻白草低劑量組下降23%。見(jiàn)表1。

表1 翻白草提取物對(duì)空腹血糖的影響

2.2 翻白草提取物對(duì)血清胰島素和胰島素敏感指數(shù)的影響

與正常組比較，模型組空腹血清胰島素(FINS)顯著上升(P<0.05)。翻白草提取物及吡格列酮干預(yù)4周后，F(xiàn)INS有不同程度的降低。其中西藥吡格列酮組下降15.26%，翻白草高劑量組下降3.08%，翻白草低劑量組下降2.06%。計(jì)算各組ISI可知，與正常組比較，模型組ISI明顯降低(P<0.05)。翻白草提取物及吡格列酮組干預(yù)4周后，與模型組比較，各個(gè)藥物干預(yù)組ISI值升高(P<0.05)，提示翻白草可以增加db/db小鼠的胰島素敏感性。見(jiàn)表2。

表2 翻白草提取物對(duì)空腹血清胰島素和胰島素敏感指數(shù)的影響

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用自發(fā)的2型糖尿病C57BL/KsJ(db/db)小鼠，該模型小鼠由于瘦素(Leptin)受體基因缺陷，導(dǎo)致先天肥胖性2型糖尿病，具有高血糖、高胰島素血癥、高甘油三酯血癥、胰島素抵抗等特征，生后4～6周逐漸出現(xiàn)血糖升高并合并肥胖，其發(fā)病過(guò)程與人2型糖尿病非常相似，是國(guó)際上廣為采用的研究2型糖尿病和糖尿病腎病的動(dòng)物模型[15]。

中醫(yī)認(rèn)為翻白草味甘微苦，性平。功用清熱解毒，涼血止血。主治肺熱咳喘，瀉痢，瘧疾，咳血，吐血，便血，崩漏，癰腫瘡毒，結(jié)核[16]。翻白草用于治療糖尿病是取自民間偏方，中醫(yī)認(rèn)為糖尿病屬消渴范疇，其病機(jī)為陰津虧虛，燥熱偏勝。翻白草具有清熱解毒之功效，因而在民間治療糖尿病而廣為流傳。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，翻白草提取物可以降低db/db小鼠的空腹血糖和空腹胰島素水平，升高胰島素敏感指數(shù)(P<0.05)。翻白草高劑量組的降糖效果優(yōu)于低劑量組，呈現(xiàn)正向的量—效關(guān)系。盡管翻白草提取物在降糖和降低胰島素水平方面不及西藥吡格列酮，但二者都能明顯升高ISI，與以往的研究結(jié)果一致[4-13]。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究認(rèn)為，翻白草含有的黃酮類(lèi)物質(zhì)可促進(jìn)胰島細(xì)胞膜專(zhuān)一受體結(jié)合，并能抗氧化和清除體內(nèi)自由基，因而成為目前研究的熱點(diǎn)[17]；槲皮素通過(guò)抑制非酶糖化及蛋白糖化，降低醛糖還原酶活性，發(fā)揮降糖作用[18]。此外，翻白草中富含糖尿病病人所缺乏的足夠的必須微量元素(鋅、錳、鈣、鉀、鎂等)，且這些微量元素均有降血糖作用，因此翻白草也可能是通過(guò)補(bǔ)充微量元素發(fā)揮降糖作用的[19]。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)自發(fā)2型糖尿病db/db小鼠表明翻白草水提取物具有良好的降糖效果，顯示有較大的研究開(kāi)發(fā)價(jià)值。今后應(yīng)緊密結(jié)合化學(xué)成分研究和藥理活性研究，開(kāi)展對(duì)翻白草深層次的研究，系統(tǒng)全面闡明其治療糖尿病的具體作用機(jī)制，對(duì)于指導(dǎo)臨床用藥、開(kāi)發(fā)治療糖尿病療效顯著的中藥制劑及中醫(yī)藥的發(fā)展具有重大意義。

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