離子色譜法測定牛奶中硫氰酸根離子

帕提曼·卡吾力 古麗曼·木哈買提拜 賈新建

硫氰酸鈉（NaSCN）是白色斜方晶系結(jié)晶或粉末，毒害品。它的毒性主要由其在體內(nèi)釋放的氰根離子在體內(nèi)能很快與細胞素氧化酶中的三價鐵離子結(jié)合，抑制該酶活性，使組織不能利用氧而產(chǎn)生中毒。原料乳或者奶粉中摻入硫氰酸鈉后可有效的抑菌、保鮮，延長產(chǎn)品的保質(zhì)期，故不法奶戶用這點將硫氰酸鈉摻入原料乳或者奶粉中，損害了消費者的健康。隨著衛(wèi)生部在食品安全方面的工作力度逐漸加大，2008年12月12日衛(wèi)生部發(fā)布的《食品中可能違法添加的非使用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單（第一批）》中明確規(guī)定乳及乳制品中硫氰酸鈉屬于違法添加物質(zhì)。國家為打擊違法添加非使用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治中，也制定有檢測方法，本方法在使用過程中，結(jié)果準確，重復(fù)性好，檢測限低，適用于牛奶中硫氰酸根的快速測定，保障了對硫氰酸根的離子在牛奶中的殘留監(jiān)控。

1 材料與方法

1.1 儀器

離子色譜儀：配備淋洗液發(fā)生器和電導檢測器；

離心機：冷凍離心機。

1.2 試劑與材料

試驗用水均為超純水，乙氰（色譜純），固相萃取小柱：ONGUAR RP 柱（2.5 ml），或相當者（如 C18），使用前依次用5 ml甲醇和10 ml水活化。硫氰酸標準品：北京化工廠生產(chǎn)。

硫氰酸標準儲備液：將硫氰酸標準品于80℃烘箱內(nèi)烘干2 h。準確稱取干燥后的硫氰化鉀1.6732 g于1000 ml容量瓶中，定容，混勻。即得1000 mg/kg硫氰根標準儲備液。

硫氰酸標準中間液：硫氰酸標準儲備液1 ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度。此溶液含硫氰酸10mg/l。

硫氰酸標準使用液：移取 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml硫氰酸標準中間液、用水定容于10 ml容量瓶中，濃度分別為 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/l。

樣品處理與測定：取牛乳樣品4 ml，加入5 ml乙氰沉淀蛋白，取清液 1 ml，加水稀釋至 10 ml，0.22 μm尼龍膜過濾后，過ONGUAR RP柱，即可進樣。

1.3 離子色譜參考條件

色譜柱：強親水性陰離子交換柱。IONPACAS16，4.0 mm×250 mm 分析柱；IONPAC AG16，4.0 mm×50 mm保護柱；或其他相當者。

流動相：KOH溶液，梯度淋洗。淋洗液由淋洗液在線發(fā)生器在線產(chǎn)生。KOH梯度程序如下：

表1 流動相梯度

流速：1.0 ml/min；抑制器：ASRS-300型抑制器，4 mm；抑制器抑制模式：外接水模式，抑制電流175 mA；柱溫：30 ℃；進樣體積：100 μl。

1.4 標準曲線的繪制

按2.4建立的儀器條件，取濃度范圍在0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/ml的硫氰酸根標準溶液各加 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml，用水定容于10 ml容量瓶中，上機測定，峰面積是：0.0478、0.1021、0.2672、0.5673、1.1523，所得標準曲線，方程分別為Y=0.6199-0.0092X，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。

1.5 回收率試驗

在2.4項建立儀器條件下對添加了0.25、0.5、1.25 mg/kg硫氰酸的牛奶進行了回收率的測定試驗和批內(nèi)相對標準偏差，重復(fù)測定3次，計算批間相對偏差，結(jié)果見表2。

表2 牛奶中硫氰酸不同添加濃度的回收率測定結(jié)果

圖1 硫氰酸根標準曲線

圖2 硫氰酸根標準品圖譜

圖3 標準添加樣1圖譜

圖4 標準添加樣2圖譜

圖5 牛奶樣品平行樣1圖譜

圖6 牛奶樣品平行樣2圖譜

1.6 樣品分析與結(jié)果（見表3）

表3 樣品測定結(jié)果

2 結(jié)果計算

X=(C-C0)×9×10/4

式中：X——液態(tài)牛奶中硫氰酸的含量(μg/ml)；

C——由標準曲線得到試樣溶液中硫氰酸的濃度(μg/ml)；

9——液態(tài)奶的體積與乙腈體積之和(ml)；

4——液態(tài)奶的體積(ml)；

10——稀釋倍數(shù)；

3 精密度

在重復(fù)性條件下，獲得的硫氰酸根的獨立測試結(jié)果能夠滿足標準要求。

4 討論

4.1 在測定樣品前，如果實驗室溫度較低，應(yīng)等待柱溫升至30℃后再開泵。

4.2 配制好的樣品和流動相使用前0.45 μm或0.2 μm的水系濾膜過濾，可以獲得相對穩(wěn)定的回收率。

4.3 方法中“只加水”淋洗液技術(shù)，能夠自動產(chǎn)生需要的淋洗液濃度，替代了傳統(tǒng)人工配制的方式，克服了因手動配制帶來的濃度不準確，操作繁復(fù)缺點。