失血性休克大鼠血清游離脂肪酸及甘油三酯水平變化分析

許會彬，李國勤，王 青，王化芬，王永清，劉文清，崔 慶

臨床急診創(chuàng)傷患者中，失血性休克（hemorrhagic shock，HS）是引起死亡的首要因素。HS發(fā)生后，機體短期內(nèi)即出現(xiàn)明顯的代謝改變甚至紊亂，包括糖類、脂類、氨基酸、維生素及核酸等物質(zhì)[1-3]。筆者曾用代謝組學(xué)的方法對HS大鼠血清代謝組進行了研究，并篩查出代謝組主成分為乳酸和脂類[4]。脂類的主要功能之一是儲存能量及氧化供能，而執(zhí)行該功能的脂類主要包括游離脂肪酸 （FFA）和甘油三酯（TG）。本研究對不同程度HS及中度HS不同時相的大鼠血清FFA及TG水平進行了檢測（由于重度HS存活時間相對較短，本文未就重度HS不同時相大鼠的相關(guān)指標進行觀測），以探討FFA及TG水平與休克程度及時相的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 動物分組與模型制作 雄性Wistar大鼠50只，體重（250±10）g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物中心提供。隨機分為5組（每組10只）：正常對照（SHS）組；重度失血性休克（RHS）組；中度失血性休克（MHS），按休克后采血時間的不同又分為休克30 min（MHS-30 min）組、休克 60 min（MHS-60 min）組及休克120 min（MHS-120 min）組。各休克組以1%戊巴比妥鈉（35 mgPkg，ip）麻醉，左側(cè)股動脈插管連于恒流泵以備放血，1kUPkg肝素鈉左側(cè)股靜脈注射使全血肝素化，手術(shù)燈照射給動物保溫。以控壓梯度放血模式，分三階段放血。動物手術(shù)后穩(wěn)定10 min后，開始快速放血，此時記為失血模型的0 min。RHS組第一階段：放血 （10±1）min使平均動脈壓降至（35±1）mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），微量調(diào)整失血量維持血壓穩(wěn)定10 min；第二階段：微量調(diào)整失血量維持血壓在（40±1） mmHg，穩(wěn)定 15 min；第三階段：微量調(diào)整失血量維持血壓在（45±1）mmHg，穩(wěn)定30 min，三階段放血完畢，制成RHS模型。模型制成60 min后，快速從股動脈采血。MHS組三階段血壓分別控制在（55±1） mmHg、（60±1） mmHg 及（65±1）mmHg。MHS組按模型制成后采血時間的不同又分為三組（MHS-30 min組、MHS-60 min組及MHS-120 min組），即在模型制成后，分別在30、60和120 min快速從股動脈采血。SHS組除不通過股動脈放血致休克處理外,其余同HS組。

1.2 儀器與試劑 酶標儀由BIO-RAD公司生產(chǎn)，F(xiàn)FA試劑盒由美國ADL公司生產(chǎn)；OLYMPUS AU2700全自動生化分析儀由日本OLYMPUS公司生產(chǎn)。甘油三酯（TG）試劑盒由上海申能-德賽公司提供。

1.3 檢測方法 FFA檢測應(yīng)用ELISA方法；TG檢測試劑盒為酶法。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 用SPSS11.5軟件處理數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)先求出均數(shù)±標準差（±s），各組間比較采用t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 MHS組、RHS組及SHS組比較 ①MHS各組及RHS組FFA水平較SHS組均顯著降低（P<0.01），而TG水平顯著上升（P<0.01）；②RHS組與MHS組比較，F(xiàn)FA及TG水平均顯著下降（P<0.01）。結(jié)果見表1。

表1 三組大鼠血清FFA及TG水平（±s）

表1 三組大鼠血清FFA及TG水平（±s）

與 SHS 組比較，△P<0.01；與 MHS 組比較，＃P<0.01

FFA（μg/ml） TG（mmol/L）178.57±14.54 0.39±0.12 115.16±19.76△ 1.37±0.39△25.11±5.90△＃ 0.66±0.09△＃組別 n SHS組 10 MHS組 30 RHS組 10

2.2 MHS三不同時相組之間比較 FFA水平隨休克時間延長逐漸下降，MHS-60 min組較MHS-30 min 組 顯 著 下 降 （P<0.01），MHS-120 min 組 較MHS-60 min組顯著下降 （P<0.05）；TG水平呈先上升后下降的趨勢，MHS-60 min組TG水平分別是MHS-30 min組及 MHS-120 min組的 2.28倍和1.99倍（P<0.01）。 結(jié)果見表2。

表2 MHS大鼠不同時相組間血清 FFA 及 TG 水平（±s，n=10）

表2 MHS大鼠不同時相組間血清 FFA 及 TG 水平（±s，n=10）

與 SHS 組比較，△P<0.01；與 MHS-30 比較，＃P<0.01；與 MHS-60 比較，▲P<0.05

組別 FFA（μg/ml） TG（mmol/L）SHS 組 178.57±14.54 0.39±0.12 MHS-30 min 組 149.79±18.39△ 0.60±0.20 MHS-60 min 組 115.16±19.76△＃ 1.37±0.39△MHS-120 min 組 104.50±16.06△▲ 0.69±0.18△

3 討 論

無論是戰(zhàn)時還是平時，失血性休克（HS）均是引起急診創(chuàng)傷死亡的首要因素。隨著人們對HS發(fā)生、發(fā)展病理生理機制認識的日漸深入以及多種救治措施的綜合應(yīng)用，使得HS的救治效果大為改善，救治成功率不斷提高。但臨床急診中仍有部分患者，即使救治及時、控制出血、聯(lián)合應(yīng)用多種救治措施，卻仍然難以擺脫死亡的威脅。原因之一在于HS是一種全身性、多系統(tǒng)、多器官參與的嚴重綜合征，其有效救治的“黃金時間”非常短暫，另外其病程進展的病理生理機制尚未徹底闡明，救治措施尚需進一步完善。因此，對HS病程發(fā)展機制的探討及如何改進救治措施一直是臨床工作人員及科研工作者關(guān)注的熱點[5-7]。

HS發(fā)生后，機體出現(xiàn)高代謝狀態(tài)，同時機體出現(xiàn)胰島素抵抗，交感神經(jīng)末梢釋出的去甲腎上腺素抑制胰島素釋放，使血循環(huán)中胰島素水平降低。主要表現(xiàn)為胰島素對促進全身和/或肌肉攝取葡萄糖的能力降低，細胞對糖的氧化利用受阻，導(dǎo)致高血糖。另外，胰高血糖素、皮質(zhì)醇、兒茶酚胺濃度升高也是血糖升高的因素；而脂肪動員增強，血中FFA增多同時氧化增強。此時，F(xiàn)FA成為主要的供能物質(zhì)。除腦組織以外，大多數(shù)組織均能氧化脂肪酸，尤其以肝臟和心臟最為活躍。正常情況下，肝僅氧化少量葡萄糖，主要由氧化脂酸獲得能量；心臟主要利用脂肪酸作為能量底物，其能量供應(yīng)的60%～70%來自于 FFA 的 β-氧化[8，9]。另外，F(xiàn)FA 在脂肪代謝中起到樞紐作用。一方面外源性的脂肪（TG）通過血漿轉(zhuǎn)運，以FFA形式進人脂肪細胞，再合成脂肪儲存，而體內(nèi)的內(nèi)源性脂肪主要在肝臟中合成，也通過血漿轉(zhuǎn)運而進入脂肪細胞儲存。另一方面儲存的脂肪不斷降解，以FFA形式進入各組織被氧化利用，使TG代謝處于動態(tài)平衡中。

本文中對不同程度HS及MHS不同時相大鼠血清FFA及TG檢測結(jié)果顯示：①MHS各組及RHS組FFA水平較SHS組均顯著降低（P<0.01），而TG水平顯著上升（P<0.01）；②RHS組與MHS組比較，F(xiàn)FA及TG水平均顯著下降（P<0.01）；③MHS三不同時相組之間比較：FFA水平隨休克時間延長逐漸下降，MHS-60 min組較MHS-30 min組顯著下降 （P<0.01），MHS-120 min 組較 MHS-60 min 組顯著下降 （P<0.05）；TG水平呈先上升后下降的趨勢，MHS-60 min組TG水平分別是MHS-30 min組及 MHS-120 min組的 2.28倍和 1.99倍 （P<0.01）。以上結(jié)果提示：①血清TG水平變化，說明HS發(fā)生后，脂質(zhì)儲存池（脂肪細胞、肝臟等）釋出TG，使外周血中TG水平升高，以適應(yīng)機體的高代謝狀態(tài)，脂肪動員加強，從而補充血漿FFA的含量，從能量消耗的角度可認為是機體的應(yīng)激保護機制，而隨著休克的加重，TG水平出現(xiàn)下降，一方面提示隨著脂肪動員的持續(xù)，機體脂質(zhì)儲存池中TG含量不斷減少；另一方面提示了TG向FFA的轉(zhuǎn)化水平與FFA消耗相比，明顯不足；②隨著HS進程的延續(xù)，血清TG水平呈雙相變化，即先上升后下降，說明HS發(fā)生后，一方面，脂質(zhì)儲存池（脂肪細胞、肝臟等）釋出TG，使外周血中TG水平升高；另一方面，TG不斷被氧化供能，以適應(yīng)機體的高代謝狀態(tài)。在HS初期，TG的釋放量大于消耗量，因此呈現(xiàn)上升趨勢；而隨著HS病程的延長，TG的消耗量大于釋出量，血漿濃度下降。該結(jié)果提示HS發(fā)生后，機體出現(xiàn)高代謝狀態(tài)，F(xiàn)FA的消耗急劇增加，機體代償對FFA的補充仍難以抵消機體高代謝所致FFA的減低；FFA的消耗量隨著HS程度的加重而增加，能量的來源愈發(fā)不足；隨著HS時間的延長，F(xiàn)FA的消耗量隨之增加，能源物質(zhì)的缺失愈發(fā)嚴重。因此，F(xiàn)FA及TG水平的變化大致反映了HS過程中能量代謝狀況（圖1）。

圖1 HS狀態(tài)能量代謝特點

綜上所述說明，HS條件下的高代謝狀態(tài)，F(xiàn)FA的消耗顯著增加，機體的代償機制難以緩解FFA的不足，提示補充或增加能量儲備可能是一條有效的抗休克途徑。

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