高白細(xì)胞性急性髓系白血病M2a的臨床特性及免疫表型研究

孟予城 杜昊 楊淑蓮 李寶生 雷蕊 周振環(huán) 鄭秀穎 崔元 王東俠 張文藝 徐文江

高白細(xì)胞性急性白血病(hyperleukocytic acute leukemia，HLAL)通常是指患者外周白細(xì)胞計(jì)數(shù)＞100×109/L的急性白血病。發(fā)病率占急性白血病的5% ～20%［1］，是急性白血病中預(yù)后較差的一類，其病情發(fā)展進(jìn)展迅速，緩解率低，易并發(fā)DIC，顱內(nèi)出血等嚴(yán)重的并發(fā)癥，導(dǎo)致患者早期死亡，本文對高白細(xì)胞性急性髓系白血病M2a的臨床特征及免疫表型進(jìn)行了研究，旨在為此型HLAL的臨床診療和研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 高白細(xì)胞性急性髓系白血病M2a(HLAMLM2a)患者20例(HLAML-M2a組)為2002年4月至2009年12月河北省廊坊市中醫(yī)醫(yī)院住院患者，其中男11例，女9例;年齡5～71歲，中位年齡39歲;同時期住院的非高白細(xì)胞性急性髓系白血病M2a(HLAML-M2a)患者37例為對照組，其中男17例，女20例;中位年齡36歲。

1.2 免疫表型分析 無菌操作，抽取骨髓肝素鈉抗凝，常規(guī)分離骨髓單個細(xì)胞，采用直接/間接免疫熒光法標(biāo)記，單克隆抗體選擇以 CD2、CD5、CD7為 T 系標(biāo)記，以 CD13、CD14、CD15、CD33為髓系標(biāo)記，以CD10、CD19、CD20為 B系標(biāo)記，以 CD41為巨核系標(biāo)記，以CD34、HLA-DR為干/祖系標(biāo)記，以美國 Conlter公司 EPICS-XL型流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，相關(guān)試劑購自法國Immunotech公司，所有患者檢測前均未做任何治療。

1.3 結(jié)果判定 白血病細(xì)胞群表面抗原，淋系≥30%，髓系及CD7≥20%，CD34≥10%，HLA-DR≥20%為陽性標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 診斷標(biāo)準(zhǔn) 所有病例均經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞組織化學(xué)、免疫表型等綜合確診，免疫表型的診斷依照白血病免疫學(xué)特征歐洲協(xié)作組(EGIL)推薦的積分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行［2］。除外雙表型及雙系列白血病，對伴有淋系抗原陽性，但又不夠診斷為雙表型或和雙系列白血病的，視為伴淋系抗原表達(dá)的AML(L+AML)。

1.5 化療方案 以DA為主(柔紅霉素+阿糖胞苷)，其他方案有MA(米托蒽醌+阿糖胞苷)，HA(三尖杉酯堿+阿糖胞苷)TA(吡柔比星+阿糖胞苷)，2組均于2個療程結(jié)束后，以骨髓評價緩解情況。療效判斷依據(jù)1987年蘇州會議標(biāo)準(zhǔn)［2］。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SAS 6.12統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，單向有序2×K表資料進(jìn)行Wlcoxon秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HLAML-M2a的主要臨床特征 高白細(xì)胞性M2a與非高白細(xì)胞性M2a相比較，主要臨床指標(biāo)，除外周血白細(xì)胞數(shù)顯著增高外，無明顯差異(P＞0.05)，HLAML-M2a發(fā)病至確診的時間，明顯短于非高白細(xì)胞性M2a(P＜0.01)。見表1。

表1 HLAML-M2a與NHLAML-M2a主要臨床特征分析

2.2 緩解情況比較 HLAML-M2a組中有3例放棄治療，2例死亡，15例完成2療程化療，其中2例緩解，緩解率為11.76%。NHLAML-M2a組中有3例放棄治療，34例完成化療，其中16例緩解，緩解率為47.05%。2組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.182，P ＜0.01)。

2.3 2組骨髓增生情況分析 2組骨髓增生情況Wilcoxon分析結(jié)果顯示，2組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(u=2.2477，P＜0.05)，HLAML-M2a組骨髓增生與NHLAML-M2a組相比較更為活躍。見表2。

表2 2組骨髓增生情況分析 例

2.4 高白組與對照組非淋系抗原的表達(dá) 在HLAML-M2a組非淋系抗原陽性率最高是CD33有17例(85%)，其余依次為CD1313例(80%)、CD348例(40%)、HLA-DR 6 例(30%)、CD14、CD15各1例(5%)。在NHLAML-M2a組中非淋系抗原的陽性率最高的是CD3335例(94.59%)，其余依次為CD1330例(81.08%)、CD3426 例(70.27%)、HLA-DR 16 例(43.24%)、CD155 例(13.51%)、CD143 例(8.1%)。兩者比較，CD34的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.492，P ＜0.05)，其余差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

2.5 HLAML-M2a組與對照組中CD7抗原的表達(dá) 在本組病例中，共有 17例表達(dá) CD7抗原，陽性率為 29.82%，其中HLAML-M2a組中CD7有4例陽性(20%)，NHLAML-M2a組中有13例陽性(35.14%)，兩者間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.790，P ＞0.05)CD7+M2a的平均外周血白細(xì)胞數(shù)為(52±56)×1012/L，CD7-M2a組的平均外周血白細(xì)胞數(shù)為(72±79)×109/L，2 組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.0785，P ＞0.05)。

3 討論

急性白血病是造血干細(xì)胞惡性克隆性增生所導(dǎo)致的疾病，具有高度的異質(zhì)性，高白細(xì)胞性急性白血病是其中的高危類型。本組20例HLAML-M2a除外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著增高外，其余主要臨床指標(biāo)與對照組相比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。但是，該組患者由自覺不適，到確診的時間明顯短于對照組，提示本組患者病情進(jìn)展迅速。而且，HLAML-M2a組的緩解率明顯低于對照組，提示本組患者對化療藥物不敏感，預(yù)后不良，這與國內(nèi)外學(xué)者的研究結(jié)論相一致［3，4］。

HLAML-M2a與NHLAML-M2a比較骨髓增生更為活躍。這應(yīng)是造成HLAML-M2a患者外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)異常增高的重要原因之一。

本研究2組中，膜分化抗原表達(dá)陽性率依次CD33、CD13、CD34、HLA-DR，與國內(nèi)研究者報(bào)道的陽性率差別不大［5，6］。在CD13、CD33陽性率次序，不同實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果略有不同，應(yīng)與各實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)方法、試劑的選擇有關(guān)。本組HLAML-M2a患者CD34的表達(dá)陽性率顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.492，P ＜0.05)。CD34是人類造血干/祖細(xì)胞標(biāo)志，屬于鈣黏蛋白家族，通過調(diào)節(jié)干細(xì)胞與骨髓外基質(zhì)細(xì)胞或與基質(zhì)細(xì)胞的黏附，在造血過程中發(fā)揮作用［5，8］。研究認(rèn)為 CD34表達(dá)，可作為髓系白血病預(yù)后不良的指標(biāo)［9－11］。在本組病中CD34的陽性率在 HLAML-M2a中較低而在 NHLAML-M2a組中較高，而HLAML-M2a的緩解率又明顯低于對照組。由于對高白細(xì)胞性急性白血病免疫表型方面的研究極少，具體到HLAML-M2a則國內(nèi)未見相關(guān)的大樣本研究，因此CD34在HLAML-M2a中的表達(dá)，以及與HLAML-M2a發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系有待于進(jìn)一步探討。

CD7是一種單鏈跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族，基因定位于17q25，分子量40 kDa，表達(dá)于胸腺細(xì)胞、T細(xì)胞及NK細(xì)胞表面，可作為T系早期的標(biāo)志，用于T系淋巴細(xì)胞白血病的診斷，但特異性不強(qiáng)，部分AML細(xì)胞表面也有CD7的表達(dá)，陽性率在不同研究中差異較大，文獻(xiàn)報(bào)道在10% ～58%［12，13］。本組研究的陽性率也在此范圍之內(nèi)。文獻(xiàn)報(bào)道的對于AML外周血白血病計(jì)數(shù)的影響存在爭議［14，15］。本組研究結(jié)果與胡曉梅等［16］的研究結(jié)論一致，CD7在HLAML-M2a中的表達(dá)與HLAML-M2a的發(fā)生無關(guān)。

綜上所述，HLAML-M2a與NHLAML-M2a相比，起病急、進(jìn)展快。T系抗原CD7在M2a型白血病的表達(dá)與HLAML-M2a的發(fā)生關(guān)系不大。在HLAML-M2a中CD34的表達(dá)陽性率低于NHLAML-M2a，其原因尚需進(jìn)一步探討。

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