甲醛足底致痛大鼠脊髓后角神經(jīng)元內(nèi)蛋白激酶C活性改變對一氧化氮合酶的影響

呂興業(yè)

熱痛覺過敏的產(chǎn)生與一氧化氮(nitric oxide，NO)生成有關(guān)。雖然痛覺過敏機制尚未搞清，但目前認為在傷害性因素刺激下，脊髓傷害性信息傳入神經(jīng)元釋放性氨基酸(excitatory amino acids，EAAs)，激活 N-甲基-D-天冬氨酸(CN-methyl-D-aspartic acid，NMDA)受體。NMDA受體激活一方面可引起蛋白激酶(protein kinasec，PKC)激活;另一方面，NMDA受體的激活，也可引起一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的激活并生成NO。但目前尚無直接證據(jù)表明NMDA受體激活后，PKC激活是否影響NOS的活性，即NOS除受NMDA受體直接調(diào)控外，是否也受到PKC活性的調(diào)控。本實驗旨在觀察PKC興奮劑與抑制劑對甲醛炎性痛及痛覺過敏中脊髓后角誘生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)活性的影響，以闡明疼痛及痛覺過敏時脊髓后角神經(jīng)元內(nèi)PKC活性是否影響NO的生成。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 健康純種Sprague-Dawley(SD)大鼠54只，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，體重260～280 g，雌雄不限，分9組，每組6只。(1)正常組:不加任何處理，取材固定觀察;(2)甲醛12 h組:右后掌注射甲醛后12 h取材觀察;(3)甲醛24 h組:右后掌注射甲醛后24 h取材觀察;(4)甲醛12 h加0.9%氯化鈉溶液組:于右后掌注射甲醛前30 min鞘內(nèi)注射0.9%氯化鈉溶液1次，6 h再重復(fù)注射1次，注射甲醛后12 h取材觀察;(5)甲醛24 h加0.9%氯化鈉溶液組:于右后掌注射甲醛前30 min鞘內(nèi)注射0.9%氯化鈉溶液1次，12 h再重復(fù)注射1次，注射甲醛后24 h取材觀察;(6)甲醛12 h加PMA組:于右后掌注射甲醛前30 min鞘內(nèi)注射佛波醇脂(Phobol-12-myristate-13-acetate，PMA)1次，6 h再重復(fù)注射1次;注射甲醛后12 h取材觀察;(7)甲醛24 h加PMA組于右后掌注射甲醛前30 min鞘內(nèi)注射PMA 1次，12 h再重復(fù)注射1次，注射甲醛后24 h取材觀察;(8)甲醛12 h加燈盞花素乙(Chelerythrine chloride，CH)組:于右后掌注射甲醛前30 min鞘內(nèi)注射CH 1次，6 h再重復(fù)注射1次，注射甲醛后12 h取材觀察;(9)甲醛24 h加CH組:于右后掌注射甲醛前30 min鞘內(nèi)注射CH 1次，12 h再重復(fù)注射1次，注射甲醛后24 h取材觀察。

1.2 觀察指標 機械與熱痛閾。脊髓后角免疫組織化學(xué)NOS陽性細胞數(shù)量;脊髓后角免疫組織化學(xué)NOS陽性細胞染色深度變化;脊髓后角免疫組織化學(xué)NOS陽性神經(jīng)纖維染色深度變化。

1.3 儀器 微量進樣器(上海醫(yī)用激光儀器廠，規(guī)格10 μl);Olympus光學(xué)顯微鏡(日本Olympus光學(xué)工業(yè)株式會社，型號IX71);XSJ-2實驗室顯微鏡(重慶光學(xué)儀器廠);顯微攝像裝置(s^msung);切片機(上海醫(yī)療器械總廠，型號DPQ-9010);電子Von Frey測痛儀(2390系列，美國IITC公司，Woodland Hills);熱敏測試儀BME-410C(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)研究所，天津)。

1.4 試劑 PMA;CH;甲醛溶液(formaldehyde solution，石家莊市有機化工廠);標本固定液［磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline，PBS)加10%甲醛，河北醫(yī)大病理實驗室］;DAB(diaminobenzidine，二氨基聯(lián)苯胺)顯色系統(tǒng)(北京中山生物技術(shù)有限公司);兔抗鼠iNOS多克隆抗體(第一抗體，北京中山生物技術(shù)有限公司);通用型工作液(第二抗體，北京中山生物技術(shù)有限公司);辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液(北京中山生物技術(shù)有限公司)。

1.5 實驗程序及方法 將實驗動物置于有鋸末覆蓋盒底的鼠盒內(nèi)，給予充足的水和飼料，并在實驗室內(nèi)飼養(yǎng)2～3 d，動物適應(yīng)實驗室環(huán)境后開始實驗，然后在預(yù)定的時間內(nèi)取材，制備組織切片，進行預(yù)定指標的觀察。

1.5.1 炎性疼痛模型:大鼠右后掌底面皮下注射5%甲醛0.2 ml。

1.5.2 鞘內(nèi)注射:鑒于傳統(tǒng)的枕骨大孔插管留置給藥法操作難度大、干擾因素多等，參照Terence［1］所建立的方法，大鼠用乙謎作短暫麻醉后，在L4～5腰椎直接穿刺。鞘內(nèi)注射采用微量進樣器進行。穿刺針用2 ml或5 ml注射器針頭燒去底座制成。穿刺針與微量進樣器之間用拉制的細塑料管(直徑小于0.5 mm)相連。先用已連接好的微量進樣器抽取 PMA(0.136 nmol)或 CH(0.324 nmol)至 10 μl刻度，然后從大鼠L4～5穿刺進入椎管，以有輕度脊髓刺激征為標志，固定穿刺針，緩慢推入藥液，時程不少于1 min。該操作法為本實驗首創(chuàng)。

1.5.3 取材:在1%戊巴比妥鈉(pentobarbital sodium)腹腔麻醉(40 mg/kg)下進行。逆行(因椎板呈疊瓦式結(jié)構(gòu))打開椎板，暴露脊髓，末根肋骨下為第1腰椎，依次向下找到L5，在椎間孔處找到L5神經(jīng)節(jié)，從神經(jīng)節(jié)處沿后根向上找到此后根相連的脊髓節(jié)段即為該神經(jīng)節(jié)所對應(yīng)的腰髓。在L5后根的上下端根絲處切斷脊髓，取出L5節(jié)段，置于同定液中24 h。

1.5.4 iNOS免疫組織化學(xué)法:先將標本梯度乙醇脫水:70%乙醇4 min→80%乙醇5 min→90%乙醇5 min→95%乙醇10 min→100%乙醇(無水乙醇)10 min，其中100%乙醇2次。2次二甲苯(dimethyl benzene)透明，石蠟包埋。取脊髓石蠟切片，厚度5 μm，用兔抗大鼠iNOS多克隆抗體為第一抗體，生物素標記的羊抗兔抗體為第二抗體，辣根標記的鏈霉素卵白素為第三抗體來檢測脊髓組織的iNOS。步驟:石蠟切片用二甲苯及系列乙醇脫蠟至水→PBS沖洗5 min→3%過氧化氫室溫孵育10 min，滅活內(nèi)源性過氧化酶→PBS沖洗5 min→10%正常山羊血清(PBS)稀釋封閉，室溫孵育10 min→滴加1∶50兔抗大鼠iNOS一抗，4℃冰箱過夜→PBS沖洗，5 min×3次→滴加生物素標記的二抗，37℃孵育30 min→PBS沖洗，5 min×3次→滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素→37℃孵育30 min→PBS沖洗，5 min×3次→DAB顯色→自來水沖洗，終止顯色→蘇術(shù)素復(fù)染，脫水、封片(用DAB顯色，陽性信號呈黃色或棕褐色)。

1.6 觀察指標

1.6.1 疼痛行為學(xué)檢測:①機械痛覺過敏測量:實驗動物測試在一組22 cm×22 cm×23 cm的籠中進行，動物適應(yīng)1 h處于安靜狀態(tài)后，用測痛儀刺大鼠足底柔軟的部分，2～3 s，出現(xiàn)縮足反應(yīng)時的讀數(shù)為機械痛痛閾。每次測試至少間隔5 min，重復(fù)3次取平均值。左右足分別測定作為自身對照。②熱痛覺過敏試驗:在所有機械痛覺過敏試驗結(jié)束后，大鼠放入測試籠中，底部換成3 mm透明玻璃，適應(yīng)30 min，待大鼠安靜不再走動時開始測試。用熱敏測試儀照射大鼠足底，記錄開始照射至出現(xiàn)縮足逃避反應(yīng)的潛伏期時間。光輻照強度先用8只未經(jīng)任何處理的空白對照大鼠調(diào)定至潛伏期(15±3)s，cut-off時間設(shè)定為30 s以免造成大鼠足底部損傷，每只大鼠測試間隔10 min以上，測試3次取平均值。

1.6.2 免疫組織化學(xué)結(jié)果觀測:于光學(xué)顯微鏡下進行定性觀察。采用ZL-2000型細胞分析系統(tǒng)進行定量分析，包括iNOS陽性細胞數(shù)量、陽性細胞及背景的染色深度。后者用吸光度來表示。吸光度(A值)=1 g空白灰度值/標本灰度值，吸光度越大，染色越深。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計量資料以表示，組間比較、行樣本均數(shù)采用非配對t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 痛覺比較 足底注射甲醛后1～2 min，動物即出現(xiàn)疼痛相關(guān)反應(yīng)如舔、搖動后掌、后掌抬離盒面等。30 min后注射部位出現(xiàn)炎性反應(yīng)，如紅、腫等。炎性反應(yīng)于注射甲醛后24 h左右達高峰。各試驗組均出現(xiàn)相應(yīng)的行為學(xué)變化。見表1。

鞘內(nèi)注射PMA后3～5 min后，動物出現(xiàn)煩躁不安，搔抓盒底，舔咬食物及其它物品等，個別大鼠發(fā)出尖叫，互相撕咬。鞘內(nèi)注射CH 30 min后，動物運動減少，安靜臥于盒底。各試驗組均出現(xiàn)相應(yīng)的行為學(xué)變化。見表1。

2.2 免疫組織化學(xué)比較 L5脊髓后角NOS陽性細胞多呈菱形，有些為圓形或橢圓形，部分細胞可見明顯突起，提示為神經(jīng)細胞。正常組中iNOS陽性細胞數(shù)目較少，染色較淺。此外，還可見交錯的陽性-染色神經(jīng)纖維(圖1)。甲醛加0.9%氯化鈉溶液組與甲醛組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表2，圖2～5。與正常組比較，甲醛12 h組及24 h組L5脊髓后角iNOS陽性細胞數(shù)均顯著增加(P＜0.01)，以24 h增加更明顯，且細胞及神經(jīng)纖維染色深度也明顯增加(P＜0.01)。見表2，圖1～3。與甲醛12 h組比較，甲醛12 h加PMA組iNOS陽性細胞數(shù)明顯增加(P＜0.01)，細胞及神經(jīng)纖維染色也明顯加深(P＜0.01)。見表2，圖4、5，接近于甲醛24 h水平，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05)。見表2，圖6;甲醛12 h加CH組iNOS陽性細胞數(shù)明顯減少(P＜0.01)，細胞及神經(jīng)纖維染色明顯變淺(P ＜0.01)。見表2，圖4、7。與甲醛24 h比較，甲醛24 h加PMA組iNOS陽性細胞數(shù)增加不明顯(P＞0.05)，細胞及神經(jīng)纖維染色也無明顯加深(P ＞0.05)。見表2，圖5、8甲醛24 h加CH組NOS陽性細胞明顯減少(P＜0.01)。細胞及神經(jīng)纖維染色也明顯變淺(P ＜0.01)。見表2，圖6、9。此外，各試驗組變化結(jié)果注射甲醛側(cè)均高于對側(cè)。

表1 大鼠右前爪注射甲醛再分別鞘內(nèi)注射PMA或CH后機械痛閾和熱痛閾比較n=6，

表1 大鼠右前爪注射甲醛再分別鞘內(nèi)注射PMA或CH后機械痛閾和熱痛閾比較n=6，

注:與正常組比較，*P ＜0.01;與甲醛12 h組比較，#P ＜0.01;與甲醛24 h組比較，△P ＜0.01

組別 機械痛閾(g)熱痛閾(s)左右左右64.8 ±3.7 63.9 ±3.4 15.8 ±1.4 15.6 ±1.8甲醛12 h 組 39.7 ±2.4* 37.6 ±2.2* 10.7 ±1.9* 10.2 ±1.5*甲醛24 h 組 17.6 ±1.8* 16.9 ±1.6* 6.3 ±2.1* 5.9 ±1.7*甲醛12 h+0.9 氯化鈉溶液組 28.9 ±2.8 27.4 ±2.5 11.4 ±2.2 10.9 ±1.9甲醛24 h+0.9 氯化鈉溶液組 17.9 ±1.4 16.7 ±1.6 6.4 ±2.7 6.8 ±2.0甲醛12 h+PMA 組 18.1 ±1.7# 17.6 ±2.1# 5.7 ±1.4# 4.9 ±1.8#甲醛24 h+PMA 組 14.4 ±1.6 13.2 ±2.2 5.2 ±1.5 5.0 ±1.4甲醛12 h+CH 組 57.3 ±4.8# 55.2 ±5.2# 14.8 ±2.3# 14.5 ±1.8#甲醛24 h+CH 組 49.6 ±3.4△ 47.5 ±2.9△ 10.8 ±2.3△ 10.6 ±2.1正常組△

表2 大鼠右前爪注射甲醛再分別鞘內(nèi)注射PMA或CH后脊髓L5水平NOS陽性細胞數(shù)、陽性細胞及背景染色深度(吸光度)值比較n=6，

表2 大鼠右前爪注射甲醛再分別鞘內(nèi)注射PMA或CH后脊髓L5水平NOS陽性細胞數(shù)、陽性細胞及背景染色深度(吸光度)值比較n=6，

注:與正常組比較，*P ＜0.01;與甲醛12 h 組比較，#P ＜0.01;與甲醛24 h 組比較，△P ＜0.01;與左側(cè)比較，☆P ＜0.01

組別 陽性細胞數(shù) 陽性細胞吸光度(×10－3)背景吸光度(×10－3)左右左右左右正常組 8.2 ±1.3 11.2 ±1.7 208.3 ±2.4 214.4 ±2.6 131.3 ±2.2 129.6 ±1.9甲醛12 h組 15.2 ±1.6* 18.6 ±1.1＊☆ 226.1 ±2.9* 247.4 ±2.7＊☆ 158.8 ±2.1* 183.8 ±2.8＊☆甲醛24 h組 21.7 ±2.3* 32.4 ±1.4＊☆ 255.8 ±1.9* 284.7 ±2.7＊☆ 177.4 ±2.4* 198.4 ±2.2☆甲醛12 h+0.9氯化鈉溶液組 14.3±1.6 19.4±1.9☆ 247.2±2.8 254.2±2.3☆ 168.4±2.1 171.7±1.5☆甲醛24 h+0.9氯化鈉溶液組 22.1±1.7 23.4±1.6☆ 247.2±2.9 259.2±2.4☆ 156.4±2.5 172.8±1.8☆甲醛12 h+PMA 組 21.0 ±1.8# 28.5 ±2.3#☆ 268.2 ±1.7# 295.1 ±2.1#☆ 173.7 ±2.3# 182.3 ±2.9#☆甲醛24 h+PMA 組 23.6 ±1.7 35.2 ±2.1☆ 268.5 ±1.9 289.4 ±2.7☆ 179.3 ±2.4 199.3 ±1.6☆甲醛12 h+CH 組 11.5 ±1.7# 13.5 ±1.8#☆ 212.3 ±1.3# 230.6 ±2.8#☆ 139.8 ±2.2# 141.8 ±1.9#☆甲醛24 h+CH 組 13.2±1.4△ 19.5±1.5△☆ 219.7±1.7△ 238.6±2.0△☆ 137.2±1.7△ 141.8±2.2△☆

3 討論

外周傷害信息傳入可導(dǎo)致疼痛及痛覺過敏。研究表明，痛及痛覺過敏的產(chǎn)生，與脊髓后角神經(jīng)元內(nèi)NMDA受體的激活及由此引起的細胞內(nèi)PKC激活及NO生成增多有關(guān)。結(jié)扎大鼠坐骨神經(jīng)引起的熱痛覺過敏，其脊髓內(nèi)PKC活性明顯升高［2］。大鼠后掌皮下注射蜂毒引起的痛覺過敏可被PKC抑制劑CH所減弱［3］。PKC參與了前列腺素2(prostaglandin E-2，PGE2)誘導(dǎo)的機械性痛覺過敏［4］。Ca2+依賴性第二信使PKC激活可加劇炎性大鼠的傷害性反應(yīng)，可能與脊髓sigma-1受體激活有關(guān)［5］。事先抑制大鼠大腦內(nèi)PKC和PKA可阻止嗎啡耐受作用(morphine tolerance，是指長時間使用嗎啡后，其鎮(zhèn)痛作用逐漸減弱以至消失，但其具體機制仍不清楚)［6］。以上說明了PKC參與了熱痛覺過敏的形成。鞘內(nèi)注射亞硝基化合物-18［2，2-(hydroxynitrosohydrazino)bis-ethanamine，NOC-18，一種 NO 供體］，可使結(jié)扎坐骨神經(jīng)所造成的熱痛覺過敏的開始時間提前，并加速痛覺過敏的發(fā)展［7］。經(jīng)腹腔、靜脈或口服給小鼠一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)抑制劑硝基左旋精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methylester，L-NAME)，在 甲 醛 足 底 注射［8］、坐骨神經(jīng)結(jié)扎［9］所致的疼痛模型上，均表現(xiàn)出明顯而持久的抗傷害性作用。免疫組織化學(xué)證實NO供體硝普鈉可使大鼠三叉神經(jīng)脊束核(spinal trigeminal nucleus，STN)NOS陽性細胞增多，染色加深［10］。三種 NOS:誘生型(induciable NOS，iNOS)、神經(jīng)型(neuronal NOS，nNOS)、內(nèi)皮型(endothelial NOS，eNOS)在辣椒素誘發(fā)咬肌痛覺過敏(capsaicin-induced masseter hypersensitivity)中表達上調(diào)［11］。

皮下注射甲醛為常用的化學(xué)性致痛和痛覺過敏的方法。

圖1 iNOS陽性細胞數(shù)目較少，染色較淺，可見交錯的陽性染色神經(jīng)纖維，左右無差別(免疫組化×200)

圖2 甲醛12 h組，iNOS陽性細胞數(shù)目較正常組明顯增多，染色加深，神經(jīng)纖維染色加深，右側(cè)略強于左側(cè)(免疫組化×250)

圖3 甲醛24 h組，iNOS陽性細胞數(shù)目較甲醛12 h明顯較多，染色加深，神經(jīng)纖維染色加深，右側(cè)強大左側(cè)(免疫組化×400)

圖4 甲醛12 h+0.9氯化鈉溶液組與甲醛12 h組接近，無明顯變化(免疫組化×400)

圖5 甲醛12 h+PMA組iNOS陽性細胞數(shù)目較甲醛12 h組明顯增多，染色加深，神經(jīng)纖維染色加深，右側(cè)略強于左側(cè)(免疫組化×400)

圖6 甲醛24 h+0.9氯化鈉溶液組與甲醛24 h組接近，無明顯變化(免疫組化×400)

鞘內(nèi)注射PMA后3～5 min后，動物出現(xiàn)煩躁不安，搔抓盒底，舔咬食物及其他物品等，個別大鼠發(fā)出尖叫，互相撕咬，這說明PMA對大鼠有強烈的致痛和致痛覺過敏作用。鞘內(nèi)注射CH 30 min后，動物運動減少，安靜臥于盒底。這說明CH對痛及痛覺過敏有明顯的抑制作用。

圖7 甲醛12 h+CH組iNOS陽性細胞數(shù)目較甲醛12 h組明顯減少，染色變淺，神經(jīng)纖維色變淺，左側(cè)弱于右側(cè)(免疫組化×400)

圖8 甲醛24 h+PMA組iNOS陽性細胞數(shù)較甲醛24 h明顯增多，染色加深，神經(jīng)纖維染色加深，右側(cè)強于左側(cè)(免疫組化×400)

圖9 甲醛24 h+CH組iNOS陽性細胞數(shù)目較甲醛24 h組明顯減少，染色變淺，神經(jīng)纖維色變淺，左側(cè)略弱于右側(cè)(免疫組化×400)

本研究觀察PKC激動劑及抑制劑對甲醛炎性大鼠脊髓后角神經(jīng)元iNOS活性的影響。發(fā)現(xiàn)L5脊髓后角iNOS陽性細胞多呈菱形，有些為圓形或橢圓形，部分細胞可見明顯突起，提示為神經(jīng)細胞。正常組中NOS陽性細胞數(shù)目較少，染色較淺。此外，還可見交錯的陽性染色神經(jīng)纖維，這說明正常神經(jīng)組織中在生理狀態(tài)下即有一定的NOS活性。

根據(jù)已有資料，脊髓后角的iNOS表達在甲醛注射12 h后明顯增加，24 h達到高峰，72 h恢復(fù)正常［12］。本實驗選擇注射甲醛后12 h及24 h 2個時間點為鞘內(nèi)注射PMA和CH的對照組，來觀察激動與抑制PKC對脊髓NOS的影響。

與正常組比較，甲醛12 h組及24 h組機械痛閾與熱痛閾明顯降低，以24 h降低更明顯。與甲醛組比較，鞘內(nèi)注射PMA組機械痛閾與熱痛閾降低，以12 h更明顯。鞘內(nèi)注射CH組機械痛閾與熱痛閾明顯升高。

與正常組比較，甲醛12 h組及24 h組L5脊髓后角iNOS陽性細胞數(shù)均顯著增多，以24 h增加更明顯，且陽性細胞及神經(jīng)纖維染色深度也明顯增加。與甲醛組比較，鞘內(nèi)注射PMA組iNOS陽性細胞數(shù)明顯增多，細胞及神經(jīng)纖維染色也明顯加深，以12 h更明顯。這表明激動PKC能明顯增加iNOS的活性。鞘內(nèi)注射CH組iNOS陽性細胞數(shù)明顯減少，細胞及神經(jīng)纖維染色明顯變淺，這表明抑制PKC能明顯降低iNOS的活性。本實驗結(jié)果表明，在甲醛所致的炎性痛及痛覺過敏中，iN-OS活性與PKC活性有關(guān)，PKC激活可促進iNOS進一步激活。

已有實驗表明，在甲醛炎性疼痛及痛覺過敏時，脊髓后角神經(jīng)元內(nèi)有PKC激活，并有NOS的活性增強，二者都與痛及痛覺過敏的產(chǎn)生有關(guān)［13］。一般認為，iNOS激活及NO生成是由于NMDA受體激活及隨后鈣離子內(nèi)流所致。本研究中，在甲醛注射前后鞘內(nèi)注射CH(一種PKC抑制劑)，可抑制PKC激活，這一藥物并未改變NMDA受體的功能，但卻發(fā)現(xiàn)iNOS活性受到抑制。這表明在甲醛炎性痛時，脊髓后角PKC的激活是iNOS激活的另一原因，即NOS活性不僅受到NMDA受體的影響，也受到其它因素的影響。如本實驗通過觀察PKC的活性，從而進一步證實了PKC在痛及痛覺過敏產(chǎn)生中的具體作用。其可通過影響NO生成而改變神經(jīng)元的興奮性。

為進一步確定PKC對iNOS的影響，本研究觀察PKC興奮劑對iNOS的影響，結(jié)果進一步支持上述觀察。PMA，一種PKC興奮劑，有類似二脂酰甘油(diacylglycerol，DAG)樣作用，可持續(xù)激活PKC。在甲醛12 h組，此時單純炎癥并未使PKC充分激活，而甲醛注射前后鞘內(nèi)注射PKC興奮劑PMA可進一步增加PKC的活性，使相同時間點的iNOS活性增強，也進一步證實iNOS激活受PKC活性的調(diào)控。

眾所周知，PKC和NO為細胞內(nèi)兩個不同信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的信號分子，以往觀點認為，它們?yōu)閮蓚€不同信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)。但兩個系統(tǒng)之間是否存在著相互影響尚缺乏充足的證據(jù)。本研究證明甲醛引起的炎性痛及痛覺過敏時，不僅NMDA受體的激活可以使PKC激活及NO生成增多［14］，同時PKC的活化也對神經(jīng)元內(nèi)iNOS活性及NO生成起促進作用，即NO生成在受NMDA受體激活影響的同時也受PKC調(diào)控。

甲醛炎性大鼠鞘內(nèi)注射PKC興奮劑PMA與抑制劑CH可分別明顯地促進脊髓后角NOS或明顯抑制NOS的生成，大鼠表現(xiàn)出相應(yīng)的行為學(xué)變化。這表明大鼠脊髓后角中PKC是NOS生成的一條重要調(diào)節(jié)途徑。

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