地塞米松長期間斷用藥對大鼠骨骼的影響

盧 麗 ，王秀麗 ，蔡惠寧 ，陳 珺 ，楊國柱 ，程 晴 ，李青南 *

1.廣東藥學(xué)院生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院，廣東廣州 510006；2.北京海軍總醫(yī)院門診部，北京 100048

地塞米松（Dexamethasone，Dex）屬于糖皮質(zhì)激素（Glucocorticoids，GCs）類藥物，在臨床上應(yīng)用極為廣泛，療效顯著。但Dex的長期、持續(xù)使用可造成一系列嚴(yán)重的不良反應(yīng)，其中包括骨質(zhì)疏松癥，其發(fā)病急、病情重，增加了原發(fā)病的治療難度[1]。為使Dex在臨床上發(fā)揮更好的作用，需尋求一種適當(dāng)使用Dex的方法，既能夠保證原發(fā)病治療的同時，又可以預(yù)防藥物引發(fā)的副作用。本文通過觀察長期、間斷應(yīng)用Dex對大鼠骨形態(tài)及骨質(zhì)量的影響情況，來探討一種能避免骨丟失且可安全應(yīng)用Dex的方法。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗動物

3 月齡 SPF 級雄性 SD 大鼠 20只，體重（200±20）g，動物由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗動物中心供應(yīng)，質(zhì)量合格證編號：SCXK（粵）20080020。隨機(jī)將其分為兩組：①NC組，給予等體積的生理鹽水；②Dex組，給予地塞米松磷酸鈉，0.25 mg/100 g肌注，1周2次，共給藥90 d。

1.2 骨標(biāo)本不脫鈣包埋及制片

動物處死前第14、13天和第3、2天分別注射鈣黃綠素5 mg/kg作體內(nèi)熒光標(biāo)記。實(shí)驗結(jié)束時，取其左脛骨（LT）及左股骨（LF），將 LT 鋸出脛骨上段（PTM）和脛骨中段（TX），行不脫鈣骨包埋。PTM包埋塊切出5 μm和9 μm薄片，切片采用Masson-Goldner Trichrome 染色；TX 段鋸出 40 μm 厚片[2]。

1.3 骨組織形態(tài)計量學(xué)檢測

骨組織形態(tài)計量學(xué)參數(shù)分為靜態(tài)參考和動態(tài)參數(shù)。靜態(tài)參數(shù)可以分析骨量和骨的結(jié)構(gòu)；而動態(tài)參數(shù)則可反映骨形成和骨吸收的指標(biāo)[3]。

1.4 股骨生物力學(xué)檢測

將股骨置于三點(diǎn)彎曲器內(nèi)，加載點(diǎn)位于股骨中段測量處，兩施壓點(diǎn)間距為20 cm，壓頭以2 mm/min的速率加載，電子萬能試驗機(jī)記錄并得出最大載荷，最大應(yīng)力和最大應(yīng)變，以反映其生物性能。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用 SPSS 11.5軟件包進(jìn)行分析，運(yùn)用t檢驗檢測兩組之間的變量差異，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Dex對TX骨形態(tài)的影響

靜態(tài)參數(shù)示：Dex組皮質(zhì)骨骨量明顯低于NC組，骨髓腔面積增大。動態(tài)參數(shù)示：Dex不但降低骨外膜的礦化沉積率、熒光周長百分率和骨形成率，且還使骨內(nèi)膜的礦化沉積率和骨形成參數(shù)降低。另外，Dex還促進(jìn)了骨內(nèi)膜的骨吸收。見表1。

2.2 Dex對PTM骨形態(tài)的影響

與NC組相比，Dex并沒使PTM靜態(tài)參數(shù)出現(xiàn)明顯變化，見表2。但Dex造成了PTM動態(tài)參數(shù)的改變，使骨礦化率及成骨細(xì)胞周長百分率明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05 或 P＜0.01），見表 3。

2.3 股骨生物力學(xué)檢測

兩組最大載荷、最大應(yīng)力與最大應(yīng)變比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表 4。

3 討論

以往的實(shí)驗[4-7]均提示長期持續(xù)（0.25 mg/100 g，1 次/d）使用Dex會使大鼠皮質(zhì)骨和松質(zhì)骨的骨量都丟失，令全身負(fù)荷骨的力學(xué)性能下降，骨質(zhì)量降低。本研究以用藥頻率為切入點(diǎn)，維持用藥劑量不變，頻率降為2次/周，給藥90 d，采用骨形態(tài)計量學(xué)與骨生物力學(xué)評價長期、間斷使用Dex對骨骼的影響。

表 1 Dex 對 TX 骨形態(tài)的影響（x±s，n＝10）

表2 PTM骨形態(tài)學(xué)靜態(tài)參數(shù)的比較（x±s，n＝10）

經(jīng)分析Dex對骨量的影響與用藥劑量有關(guān)，研究表明高劑量Dex抑制成骨細(xì)胞增殖與分化活性，但低劑量Dex呈促進(jìn)作用[8-9]。因此導(dǎo)致骨丟失是Dex的超生理劑量應(yīng)用的結(jié)果，它使成骨細(xì)胞數(shù)目減少，分化受抑制，影響成骨細(xì)胞的正常功能，使骨形成作用延遲，從而造成骨量丟失。而Dex使用的時間長短是眾所周知的另一個原因，臨床患者長期持續(xù)使用Dex，易致糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松癥。筆者認(rèn)為除了Dex的用藥劑量和時間，用藥頻率應(yīng)該也起關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)長期間斷性使用Dex僅使皮質(zhì)骨骨量丟失，未對松質(zhì)骨造成明顯的影響。Dex對皮質(zhì)骨的影響主要是使骨內(nèi)外膜的骨形成減少，同時骨內(nèi)膜面的骨吸收增加，從而出現(xiàn)皮質(zhì)骨變薄，骨髓腔增大的情況。然而，這種幾何形狀的變化，并沒有明顯改變骨生物力學(xué)的性能，使骨質(zhì)量得以維持。長期、間斷應(yīng)用Dex為何能避免骨丟失的機(jī)制仍有待探討，可能的原因是間斷用藥減少了Dex對成骨細(xì)胞的抑制作用，從而減弱了Dex引起的骨量丟失，維持了骨生物性能。

表3 PTM 骨形態(tài)學(xué)動態(tài)參數(shù)的比較（x±s，n＝10）

表 4 Dex 對股骨骨生物力學(xué)的影響（x±s，n＝10）

綜上所述，對于Dex這一類藥物，用藥劑量、時間及頻率變化對骨骼的效應(yīng)不同，提示臨床上在需要長期、大量服用Dex時，可考慮采用間歇性用藥方法，以減少骨丟失的程度。

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