復(fù)方獨活糖漿藥效學(xué)實驗研究

河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 陳淑蘭 閆國強(qiáng) 董晶晶 李寶芬 (滄州061001)

復(fù)方獨活糖漿是我院中藥制劑室研制的中藥復(fù)方制劑，是在傳統(tǒng)名方獨活寄生湯的基礎(chǔ)上化裁而來，由江陰天江免煎飲片配制而成。具有補(bǔ)氣血，益肝腎，止痹痛，祛風(fēng)濕的功效。用于肝腎兩虧，氣血不足，腰腿、關(guān)節(jié)疼痛、麻木、屈伸不利;腰椎間盤突出、頸椎病獲得了較好的臨床療效。本研究采用腎上腺素致小鼠耳廓微循環(huán)障礙，用測微尺測量微血管動脈和靜脈管徑、觀察紅細(xì)胞的流速，對大鼠棉球肉芽腫增生的影響，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 復(fù)方獨活糖漿:由獨活、秦艽、地龍、桑寄生、杜仲、牛膝、川芎、人參、天麻、白芍、當(dāng)歸等藥物組成，河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中藥制劑室研制 (100 mL/瓶)，批號030522;腰痛寧膠囊 (國藥準(zhǔn)字Z13020898)，承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司產(chǎn)品，批號031110;醋酸潑尼松片 (5 mg/片)，上海信誼藥業(yè)有限公司，批號020701，使用時用0.5%的羧甲基纖維素鈉配成所需濃度的混懸液備用;鹽酸腎上腺素注射液，天津金耀氨基酸有限公司，批號0207311。

1.2 主要儀器 XTB─A型連續(xù)變倍體顯微鏡，桂林光學(xué)儀器廠;FA2004電子天平，上海精科天平儀器廠。

1.3 動物 昆明種小鼠，雄性，體質(zhì)量18～20 g，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物學(xué)部提供，許可證號 scxk(冀)2004—1—006;合格證號為醫(yī)動字第04056號。SD大鼠，雄性，體質(zhì)量160～170 g，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物學(xué)部提供，許可證號scxk(冀)2004—1—006;合格證號為醫(yī)動字第04057號。

1.4 試驗方法

1.4.1 對小鼠耳廓微循環(huán)的影響:將小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為空白對照組、復(fù)方獨活糖漿小劑量組 (4.5 g生藥/kg，相當(dāng)于人臨床用量的4.5倍)、復(fù)方獨活糖漿中劑量組 (9.0 g生藥/kg，相當(dāng)于人臨床用量的9倍)、復(fù)方獨活糖漿大劑量組 (18.0 g生藥/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)、腰痛寧膠囊組試驗時先腹腔注射12%烏拉坦麻醉 (1.2 g/kg，0.1m L/10 g體重)，以醫(yī)用橡皮膏輕貼輕拉去掉右耳廓軟毛，將小鼠腹部向下固定在小鼠觀察臺上，調(diào)節(jié)耳托高度，使耳廓平展在耳托上，并在耳托及耳廓上涂上液體石蠟。將小鼠觀察臺置顯微鏡載物臺上，調(diào)節(jié)冷光源適當(dāng)亮度，調(diào)整視野選擇微動脈與微靜脈，放大72倍觀察，用測微尺測量微血管動脈和靜脈管徑［1］、觀察微血管內(nèi)紅細(xì)胞的流速，并且按下述標(biāo)準(zhǔn)記分:［2］快速(直線狀):4分;中速 (虛線狀):3分;慢速 (粒狀):2分;停止 (凝滯狀):1分。各組小鼠分別尾靜脈注射1︰1 000腎上腺素，0.1 mL/10 g體質(zhì)量，造成小鼠微循環(huán)障礙，觀察指標(biāo)同前;然后給藥組小鼠分別灌胃給藥，空白對照組給予等量蒸餾水，并分別于給藥后20 min、40 min進(jìn)行觀察，觀察指標(biāo)同前。采用student t檢驗及自身t檢驗比較各組間及自身差異情況。

1.4.2 對大鼠棉球肉芽腫增生的影響:大鼠在乙醚淺麻醉無菌條件下作腹部切口，將20 mg的滅菌棉球植入兩側(cè)腹股溝皮下。術(shù)后隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為模型對照組，復(fù)方獨活糖漿小劑量組 (3.5 g生藥/kg，相當(dāng)于人臨床用量的3.5倍)、復(fù)方獨活糖漿中劑量組 (7.0 g生藥/kg，相當(dāng)于人臨床用量的7倍)、復(fù)方獨活糖漿大劑量組 (9.0 g生藥/kg，相當(dāng)于人臨床用量的14倍)及陽性藥醋酸潑尼松組 (6.0 mg/kg，相當(dāng)于人臨床用量的7倍)，給藥組連續(xù)灌胃給藥7天，末次給藥后30 min，將大鼠斷頭處死，剝離并取出棉球肉芽組織，于60℃烘箱內(nèi)干燥12 h后稱重，減去原棉球質(zhì)量，即肉芽腫凈重。

1.4.3 對0.6%醋酸致小鼠疼痛的影響:將小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半，分別為模型對照組、復(fù)方獨活糖漿小劑量組 (4.50 g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的4.5倍)、復(fù)方獨活糖漿中劑量組 (9.00 g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的9倍)、復(fù)方獨活糖漿大劑量組 (18.00 g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)、及陽性藥腰痛寧膠囊組 (0.47 g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)，各給藥組連續(xù)灌胃給藥7天，每日1次，容量為0.1 mL/10 g體質(zhì)量，模型對照組給予等量蒸餾水，末次給藥后30 min，每鼠分別由腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL/只，觀察并記錄注射醋酸溶液后30 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù) (腹腔收縮內(nèi)凹，伸展后肢，臀部抬高，蠕動)。并采用student s t檢驗比較給藥組與空白對照組間差異情況。

2 結(jié)果

2.1 對小鼠耳廓微循環(huán)動脈管徑的影響 各組小鼠尾靜脈注射腎上腺素后，小鼠耳廓微循環(huán)動脈管徑明顯較造模前窄 (P＜0.01);對照組小鼠給水后20 min、40 min小鼠耳廓微循環(huán)動脈管徑均無明顯變化 (P＞0.05);復(fù)方獨活糖漿 (4.5 g生藥/kg、9 g生藥/kg、18 g生藥/kg)組小鼠給藥后20 min、40 min小鼠耳廓微循環(huán)動脈管徑均明顯較造模后及空白對照組增大 (P＜0.05或P＜0.01)。復(fù)方獨活糖漿各組與陽性藥腰痛寧膠囊組比較差異無顯著性(P ＞0.05)。見表1。

2.2 對小鼠耳廓微循環(huán)靜脈管徑的影響 各組小鼠尾靜脈注射腎上腺素后，小鼠耳廓微循環(huán)靜脈管徑明顯較造膜前窄 (P＜0.01);對照組小鼠給水后20 min、40 min小鼠耳廓微循環(huán)靜脈管徑均無明顯變化 (P＞0.05);復(fù)方獨活糖漿 (4.5 g生藥/kg、9 g生藥/kg、18 g生藥/kg)小鼠給藥后20 min、40 min小鼠耳廓微循環(huán)靜脈管徑均明顯較造膜后及空白對照組增加 (P＜0.05或P＜0.01)。見表2。

表1復(fù)榮通脈膠囊對小鼠耳廓微動脈管徑的影響(±s，n=10，μm)

表1復(fù)榮通脈膠囊對小鼠耳廓微動脈管徑的影響(±s，n=10，μm)

注:與造模前自身比較，△P＜0.01;與空白對照組比較，*P＜0.01;與造模后自身比較，▲P＜0.01

組別 劑量 (g生藥/kg) 造模前 造模后 給藥后20 min 給藥后40 min空白對照組 9.80±2.78 7.70±1.25△8.00±1.15 8.40±1.70低劑量組 4.50 10.30±1.83 7.70±0.95△ 10.10±1.91▲＊ 12.90±2.28▲＊中劑量組 9.00 9.90±1.85 7.70±1.34△ 10.20±1.87▲＊ 12.60±1.65▲＊大劑量組 18.00 10.50±2.32 7.60±1.50△ 10.80±1.55▲＊ 11.50±1.72▲＊腰痛寧膠囊組 0.47 10.50±1.84 6.80±1.40△ 10.20±2.39▲＊ 11.40±2.01▲＊

表2復(fù)方獨活糖漿對小鼠耳廓微靜脈管徑的影響(±s，n=10，μm)

表2復(fù)方獨活糖漿對小鼠耳廓微靜脈管徑的影響(±s，n=10，μm)

注:與造模前自身比較，△P＜0.01;與空白對照組比較，*P＜0.01;與造模后自身比較，▲P＜0.01

組別 劑量 (g生藥/kg) 造模前 造模后 給藥后20 min 給藥后40 min空白對照組 16.20±2.62 12.3±1.57△12.60±1.58 12.70±1.77小劑量組 4.50 16.80±1.62 11.4±1.78△ 14.50±1.78▲＊ 16.00±1.63▲中劑量組 9.00 16.20±1.62 11.2±2.30△ 15.20±1.81▲＊ 16.20±1.32▲＊大劑量組 18.00 17.00±1.82 11.3±1.77 15.40±2.22▲＊ 16.20±2.20▲＊腰痛寧膠囊組 0.47 16.20±2.57 11.7±2.16△ 14.80±1.55▲＊ 15.70±1.49▲＊

2.3 對大鼠棉球肉芽腫形成的影響 復(fù)方獨活糖漿(3.5 g生藥/kg、7 g生藥/kg、14 g生藥/kg)組大鼠肉芽腫干重均較模型對照組大鼠低 (P＜0.01)，表明其灌胃給藥可抑制慢性肉芽腫的增生。見表3。

表3復(fù)方獨活糖漿對大鼠棉球肉芽腫形成的影響(±s)

表3復(fù)方獨活糖漿對大鼠棉球肉芽腫形成的影響(±s)

注:與空白對照組比較，*P＜0.01

組別 劑量 (g生藥/kg)動物數(shù) (只) 肉芽干重 (mg)模型對照組10 83.70±11.69小劑量組 3.5 10 62.40±6.55*中劑量組 7.0 10 58.20±5.93*大劑量組 14.0 10 61.80±8.27*醋酸潑尼松組 6.0mg 10 65.10±7.04*

2.4 對0.6%醋酸致小鼠疼痛的影響 復(fù)方獨活糖漿(4.5 g生藥/kg、9.0 g生藥/kg、18.0 g生藥/kg)組，扭體反應(yīng)次數(shù)明顯少于模型對照組 (P＜0.01)，表明其灌胃給藥對0.6%醋酸所致小鼠疼痛有明顯鎮(zhèn)痛作用。見表4。

表4復(fù)方獨活糖漿對0.6醋酸所致小鼠疼痛的影響(±s)

表4復(fù)方獨活糖漿對0.6醋酸所致小鼠疼痛的影響(±s)

注:與空白對照組比較，*P＜0.01

組別 劑量 (g生藥/kg)動物數(shù) (只)扭體次數(shù)模型對照組10 25.10±4.86小劑量組 4.5 10 15.10±4.25*中劑量組 9.0 10 13.30±3.94*大劑量組 18.0 10 14.00±4.08*醋酸潑尼松組 5.0 mg 10 17.20±2.25*

3 討論

椎間盤突出、頸椎病、增生性脊柱炎、風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎主要表現(xiàn)為筋、骨、肉、腰腿關(guān)節(jié)疼痛、麻木、活動不利等，屬于中醫(yī)的痹癥范疇。痹癥又根據(jù)其主要特點和感受邪氣的不同分為行痹、痛痹、著痹。風(fēng)寒濕邪痹著筋骨肌肉，日久不愈，以致肝腎不足，氣血虧虛。故本方獨活長于祛下半身之風(fēng)寒濕邪，并善于通痹止痛為君藥;臣以秦艽、防風(fēng)、地龍祛風(fēng)除濕，散寒止痛，地龍入絡(luò)通經(jīng)活絡(luò);佐以桑寄生、牛膝、杜仲補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨;當(dāng)歸、川芎、白芍養(yǎng)血活血;地黃清熱涼血養(yǎng)陰;人參、甘草補(bǔ)氣健脾;天麻熄風(fēng)止痙，平肝潛陽;甘草調(diào)和諸藥兼為使藥。

現(xiàn)代藥理研究表明，獨活具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用，［3］有很好的抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用;［4］秦艽提取物對二甲苯所致耳廓腫脹有明顯的抑制作用，可抑制毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性增加滲出性水腫為主的急性炎癥反應(yīng);［5］牛膝有明顯鎮(zhèn)痛效果，且作用與劑量呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系;［6］獨活寄生湯可抑制毛細(xì)血管通透性增加，減輕或抑制滑膜組織炎癥而達(dá)到減輕或消除關(guān)節(jié)腫脹的作用，［7］鎮(zhèn)痛作用及抗炎作用極其顯著。［8］研究結(jié)果表明，復(fù)方獨活糖漿具有顯著的增加小鼠耳廓微循環(huán)、動靜脈管徑，抑制慢性肉芽腫的增生。這一結(jié)果為臨床用該藥提供了必要的藥理學(xué)依據(jù)。

［1］田牛.微循環(huán)［M］.北京:科學(xué)技術(shù)出版社，1980.90

［2］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1996.500

［3］范莉，李林，何慧風(fēng)，等.獨活揮發(fā)油抗炎、鎮(zhèn)痛藥理作用的研究 ［J］.安徽醫(yī)藥，2009(2):133－134

［4］趙琦，張軍武.短毛獨活抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥效學(xué)研究［J］.吉林中醫(yī)藥，2010，30(9):816－818

［5］楊建宏，王莉.馬風(fēng)才，等.秦艽提取物鎮(zhèn)咳祛痰抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究 ［J］.中藥藥理與臨床，2010，26(1):51－52

［6］李小川，郭勝民.孫海燕，等.懷牛膝總皂苷鎮(zhèn)痛作用研究［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，1999，28(12):735－736

［7］王愛武，劉婭.雒琪，等.獨活寄生湯抗炎、鎮(zhèn)痛作用的藥效學(xué)研究［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2008，14(12):61－64

［8］莫新.獨活寄生湯的鎮(zhèn)痛和抗炎作用［J］.中草藥，1992，23(3):133