火棘對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究

覃紅斌,魏蕾

(湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院,湖北 恩施 445000;武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,湖北 武漢 430071）

火棘對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究

覃紅斌,魏蕾

(湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院,湖北 恩施 445000;武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,湖北 武漢 430071）

目的研究火棘對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化的作用。方法將小鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)生理鹽水組），AD模型組（簡(jiǎn)稱(chēng)模型組），藥物（低、高劑量）組，每組10只，共40只。連續(xù)胃飼小鼠8周后取血液、肝臟，并將小鼠斷頭處死，制作海馬10%組織勻漿，分別取血液、肝臟、腦，測(cè)定超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力、丙二醛含量及單胺氧化酶活力。結(jié)果與對(duì)照組比較，藥物顯著增加血液和肝臟中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力，顯著降低丙二醛含量；顯著降低腦中丙二醛含量，顯著降低腦中單胺氧化酶活力；單胺氧化酶活力未見(jiàn)顯著差異。結(jié)論火棘能增加血液和肝臟中超氧化物歧化酶活力，能降低血液、肝臟和腦組織中丙二醛活性，具有一定的抗氧化作用。

火棘；AD模型小鼠；抗氧化

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用雌性Wistar小鼠，4～6月齡，，由武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑 火棘果實(shí)采摘于恩施市雙河鄉(xiāng)，由湖北中醫(yī)學(xué)院藥用植物鑒定研究所鑒定為火棘，挑選上好的果實(shí)并曬干磨粉；D-半乳糖（上海試劑二產(chǎn)）；SOD、MAO、MDA GSH-Px試劑盒（南京建成生物工程研究所）；酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀DG3022（華東電子管廠(chǎng)）。

1.3 造模及實(shí)驗(yàn)分組 隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)生理鹽水組），AD模型組（簡(jiǎn)稱(chēng)模型組），藥物（低、中、高劑量）組，每組10只。生理鹽水組每天頸背部皮下注射等量生理鹽水，模型組、藥物組每天頸背部皮下注射1%D-半乳糖100mg/kg。造模成功后，第二天開(kāi)始灌胃給藥，藥物（低、高劑量）組每天分別給予（20mg/kg、80mg/kg）火棘灌胃，模型組、生理鹽水組每天給予80mg/kg生理鹽水灌胃，連續(xù)8周。

1.4 酶活性測(cè)定 連續(xù)胃飼8周后，取血液、肝臟，并將小鼠斷頭處死，取出海馬組織，制作海馬10%組織勻漿，測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）活力、丙二醛（MDA）含量及單胺氧化酶（MAO）活力。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)以表示，采用統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 火棘對(duì)小鼠腦中SOD、GSH-Px、MDA、MAO的影響 造模后，小鼠海馬中SOD、GSH-Px活性降低，MAO的活性增高及MDA的含量增加，且模型組與生理鹽水組相比有顯著性差異（P＜0.01）；用藥后各組小鼠海馬中SOD、GSH-Px活性增高，MAO的活性降低及MDA的含量減少，且改變程度與藥物劑量呈正相關(guān)，藥物高劑量組與模型組相比有顯著性差異（P＜0.01）；而在藥物低劑量組與模型組相比無(wú)顯著性差異（見(jiàn)表1）。

2.2 火棘對(duì)小鼠肝臟SOD、GSH-PX、MDA、MAO的影響 與生理鹽水組比較，AD模型組肝臟中SOD、GSH-Px活力顯著降低，MDA含量顯著增高；火棘低、高劑量組顯著增高肝臟中SOD、GSH-Px活力，顯著降低MDA含量，MAO活力未見(jiàn)顯著差異（見(jiàn)表2）。

2.3 火棘對(duì)小鼠血液SOD、GSH-PX、MDA的影響與生理鹽水組比較，模型組血液中SOD、GSH-Px活力顯著降低，MDA含量顯著增高；火棘低、高劑量組顯著增高血液中SOD、GSH-Px活力，顯著降低MDA含量（見(jiàn)表3）。

表1 對(duì)小鼠腦中SOD、GSH-Px、MDA、MAO的影響（±s)

表1 對(duì)小鼠腦中SOD、GSH-Px、MDA、MAO的影響（±s)

注：與生理鹽水組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；火棘低、高劑量組與AD模型組比較，*P＜0.05。

組別 n SOD GSH-Px MDA MAO（U/mgprot） （活力單位） （nmol/mgprot） （U/h/mgprot）生理鹽水組 10108.42±26.57199.25±48.5415.37±6.8565.38±16.25AD模型組 1078.49±36.55# 144.90±47.3227.68±10.43## 104.31±27.67##火棘低劑量組 10101.85±28.52156.45±38.42# 5.54±2.33* 79.48±18.56*火棘高劑量組 10120.53±38.58158.92±30.858.87±4.53* 76.39±14.68*

表2 對(duì)小鼠肝臟中SOD、GSH-Px、MDA、MAO的影響（±s)

表2 對(duì)小鼠肝臟中SOD、GSH-Px、MDA、MAO的影響（±s)

注：與生理鹽水組比較，＃＃P＜0.01，＃P＜0.05；火棘低、高劑量組與AD模型組比較，*P＜0.05,**P＜0.01。

組別 n SOD GSH-Px MDA MAO（U/mgprot） （活力單位） （nmol/mgprot） （U/h/mgprot）生理鹽水組 10115.79±35.57286.81±143.3764.37±29.58151.25±67.12AD模型組 1074.53±21.51＃ 167.25±81.46＃ 97.57±23.56＃＃ 127.83±22.95火棘低劑量組 10119.68±31.59* 197.01±121.4158.23±17.43* 127.77±24.53火棘高劑量組 10121.79±25.32** 296.48±143.35* 49.92±17.42** 140.10±21.49

表3 對(duì)小鼠血液中SOD、GSH-Px、MDA的影響（±s)

表3 對(duì)小鼠血液中SOD、GSH-Px、MDA的影響（±s)

注：與生理鹽水組比較，＃＃P＜0.01：火棘低、高劑量組與AD模型組比較，·P＜0.05，··P＜0.01。

組別 n SOD GSH-Px MDA（U/mgprot） （活力單位） （nmol/mgprot）生理鹽水組 10118.25±19.45247.14±67.343.79±0.76AD模型組 1071.35±13.38## 121.66±43.42## 9.50±2.34##火棘低劑量組 1095.46±21.84* 207.47±94.68* 3.81±0.85**火棘高劑量組 10107.10±19.94** 224.39±89.65** 3.90±1.10**

3 討論

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)火棘的藥理作用進(jìn)行了較多的研究，火棘始載于《滇南本草》，其果實(shí)性味甘酸，藥用具有健脾消積，生津止渴，清熱解毒，活血止血的功效[3]。正常機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的氧化酶有SOD、GSH-Px等，SOD能將組織細(xì)胞的超氧陰離子自由基歧化生成過(guò)氧化氫，減少自由基對(duì)細(xì)胞組織的損傷；GSH-Px是機(jī)體的一種含硒清除自由基和抑制自由基反應(yīng)的酶系統(tǒng)，可以將過(guò)氧化氫分解，清除MDA和其它過(guò)氧化氫產(chǎn)物，阻止體內(nèi)自由基引起的膜脂質(zhì)過(guò)氧化。作為脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，MDA能直接反應(yīng)體內(nèi)自由基損傷情況，現(xiàn)已經(jīng)明確許多疾病或者癥狀如腫瘤、炎癥、心腦缺血、動(dòng)脈粥樣硬化等，都與自由基有關(guān)[4]。本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：火棘明顯對(duì)AD模型小鼠血液、肝臟的酶活性產(chǎn)生改變，顯著增高，低、高劑量組抗氧化酶活力，同時(shí)降低血液、肝臟及腦組織中MDA含量，顯示其明顯的抗氧化作用；AD患者超氧化物歧化酶活性減弱，腦組織中葡萄糖-6磷酸脫氫酶增多，都會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激增加，自由基增多淤積。由于神經(jīng)元富含對(duì)自由基敏感的不飽和脂肪酸，因此它容易受到自由基的傷害，最終使神經(jīng)細(xì)胞死亡和AD的發(fā)生[5]。如在過(guò)量運(yùn)動(dòng)期間添加具有抗氧化作用的營(yíng)養(yǎng)素（如維生素A、維生素C及硒等），能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)作用，使機(jī)體免受自由基的損傷，增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)能力，如小鼠補(bǔ)充還原型谷胱甘肽后，游泳能力提高20%～40%[6]。在本實(shí)驗(yàn)研究中，通過(guò)造模后，小鼠海馬中SOD、GSH-Px活性降低，MAO的活性增高及MDA的含量增加，且模型組與生理鹽水組相比有顯著性差異（P＜0.01）；用藥后各組小鼠海馬中SOD活性增高，MAO的活性降低及MDA的含量減少，且改變程度與藥物劑量呈正相關(guān)，藥物高劑量組與模型組相比有顯著性差異（P＜0.01）；而在藥物低劑量組與模型組相比則沒(méi)有顯著性差異。這說(shuō)明AD模型小鼠腦中MAO活力顯著增高，火棘使之顯著降低，而不影響肝臟MAO活力；同時(shí)與生理鹽水組比較時(shí)，模型組血液中SOD、GSH-Px活力顯著降低，MDA含量顯著增高；火棘低、高劑量組顯著增加血液中SOD、GSH-Px活力，顯著降低MDA含量，這對(duì)抗氧化藥物的研制具有積極的意義?；鸺瑢?duì)抗氧化作用的機(jī)理目前則還不十分清楚，有待于進(jìn)一步研究。目前對(duì)火棘的研究工作主要集中在對(duì)火棘營(yíng)養(yǎng)成分和化學(xué)成分的研究方面，對(duì)火棘有關(guān)成分的藥理、毒理、人體對(duì)其吸收和利用程度及臨床研究不夠。有必要研究火棘有關(guān)成分對(duì)脂代謝、糖代謝、肥胖癥、腫瘤、衰老和疲勞以及消化功能的影響及作用機(jī)理，在此基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑或有關(guān)疾病的預(yù)防或治療劑，使火棘真正實(shí)現(xiàn)它的價(jià)值。

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R332

A

1008-4118（2011）04-0006-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2011.04.03

湖北省自然科學(xué)基金2008CDB222

覃紅斌（1966-），男（土家族），湖北恩施人，副教授，武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)部研究生主要從事組織學(xué)、病理生理學(xué)及中藥抗衰老研究?；鸺≒yracantha fortuneana）為薔薇科蘋(píng)果亞科火棘屬的野生灌木果樹(shù)植物，又名赤陽(yáng)子、火把果、紅火棘、小紅果等，湖北恩施地區(qū)叫紅果泡、救命糧、紅殼刺等?！侗静菥V目》中詳載火棘可以“通十二經(jīng)脈脈，除五臟惡氣，久服可輕身耐老”。目前已有研究表明，火棘具有抗疲勞、抗應(yīng)激、抗缺氧、抗氧化和增強(qiáng)免疫功能等作用[1]。老年癡呆癥即阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD），是慢性進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性病導(dǎo)致的癡呆，是癡呆最常見(jiàn)的病因。AD以漸進(jìn)性記憶障礙、認(rèn)知功能障礙、人格改變以及語(yǔ)言障礙等神經(jīng)精神癥狀為特征，目前已經(jīng)成為僅次于心血管病、腫瘤、腦卒中的第四大老年學(xué)疾病[2]。本文通過(guò)觀察火棘對(duì)AD模型小鼠血液、肝臟、腦組織酶活性的調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而探討火棘的作用機(jī)理，為其用于臨床抗氧化、抗衰老提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2011-10-08