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    飼料磷水平對(duì)草魚(yú)形體的影響及其骨骼畸形的判定

    2011-06-06 10:39:20肖順應(yīng)葉元土蔡春芳金素雅姚仕彬姚林杰
    關(guān)鍵詞:肉眼魚(yú)體草魚(yú)

    肖順應(yīng) 葉元土蔡春芳 金素雅 朱 磊 姚仕彬 姚林杰

    (蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院,江蘇省水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,蘇州 215123)

    飼料磷在魚(yú)體形體上主要表現(xiàn)在對(duì)骨骼系統(tǒng)的影響,如出現(xiàn)骨骼鈣化不全、骨骼形變以及脊椎側(cè)彎、鰓蓋殘缺等現(xiàn)象。Uyan等[1]研究發(fā)現(xiàn),在給牙鲆飼喂低磷飼料后,試驗(yàn)前期鰓蓋及骨組織的微結(jié)構(gòu)已經(jīng)發(fā)生變化。Sugiura等[2]和Baeverfjord等[3]在試驗(yàn)中也觀察到了磷缺乏導(dǎo)致的由鰓蓋畸變到骨骼形變的過(guò)程。本試驗(yàn)擬在純化飼料中添加不同濃度的磷酸二氫鈣,旨在研究飼料磷水平對(duì)草魚(yú)形體的影響,并對(duì)魚(yú)體的骨骼畸形狀況進(jìn)行判定。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    草魚(yú)(Ctenopharyngodon idellus)幼魚(yú)由江蘇省蘇州市相城區(qū)特種水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)提供,磷酸二氫鈣由無(wú)錫華諾威動(dòng)物保健品有限公司提供,酪蛋白、糊精、明膠、羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素、無(wú)水氯化鈣購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,玉米淀粉購(gòu)于江蘇省蘇州市蓮花五區(qū)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。

    1.2 試驗(yàn)飼料

    根據(jù)草魚(yú)的配合飼料營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(SC/T 1024—1997)設(shè)計(jì)配方,在以酪蛋白、豆油、淀粉、糊精和纖維素為原料的純化飼料中分別添加0、13、29、45、61、77 g/kg磷酸二氫鈣,試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。飼料原料經(jīng)粉碎過(guò)60目篩,混合均勻,用小型面條加工機(jī)加工成1.5 mm粗細(xì)的條狀料,電風(fēng)扇條件下干燥后再手工搓碎,篩選3~4 mm長(zhǎng)的顆粒飼料置于冰箱中4℃密封保存。

    1.3 飼養(yǎng)管理

    試驗(yàn)草魚(yú)初始平均體重為22.29 g,為池塘養(yǎng)殖的1冬齡魚(yú)種。試驗(yàn)魚(yú)經(jīng)1周暫養(yǎng)、馴化后,選擇體格健壯、規(guī)格整齊的魚(yú)種270尾,隨機(jī)分為6個(gè)組,每組設(shè)3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)放魚(yú)15尾,分別投喂飼料Ⅰ~Ⅵ。正式養(yǎng)殖試驗(yàn)持續(xù)75 d。

    養(yǎng)殖設(shè)施為室內(nèi)養(yǎng)殖系統(tǒng),單缸直徑70 cm,養(yǎng)殖容積0.23 m3,以曝氣自來(lái)水為水源,使用間歇性控電開(kāi)關(guān)調(diào)節(jié)水體,每進(jìn)水20 min關(guān)閉40 min,反復(fù)循環(huán),缸內(nèi)出水直接排走。定期使用水博士水質(zhì)測(cè)定盒測(cè)量水質(zhì)。養(yǎng)殖期間水質(zhì)條件為:水溫20~26℃、溶解氧含量在6.0 mg/L以上、pH 7.0 ~7.4、氨氮含量 0.20 ~0.40 mg/L、亞硝酸鹽氮含量0.05~0.10 mg/L。試驗(yàn)飼料于每天08:00、12:00、17:30各投喂1次,投喂量為各試驗(yàn)組魚(yú)體體重的2%~3%。

    表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(DM basis) g/kg

    1.4 樣品采集與分析

    養(yǎng)殖試驗(yàn)開(kāi)始前,取10尾草魚(yú)測(cè)定魚(yú)體體重、體長(zhǎng)、吻-鰓蓋長(zhǎng)。養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí),從每個(gè)養(yǎng)殖缸中隨機(jī)取8尾魚(yú)測(cè)定魚(yú)體體重、體長(zhǎng)、吻-鰓蓋長(zhǎng),計(jì)算體長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率、吻-鰓蓋長(zhǎng)/體長(zhǎng)(吻端至鰓蓋末端長(zhǎng)與體長(zhǎng)的比值)以及肥滿度;每組隨機(jī)取魚(yú)3尾用X光機(jī)進(jìn)行魚(yú)體骨骼的觀察。

    1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

    試驗(yàn)結(jié)果用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用Duncan氏多重比較檢驗(yàn)組間差異,以P<0.05表示差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 對(duì)草魚(yú)體長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率的影響

    由表2可知,草魚(yú)體長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率最高的是Ⅲ組,達(dá)到 0.65%/d,顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P <0.05);最低的是Ⅰ組,為0.34%/d,顯著低于除Ⅱ組外的其他試驗(yàn)組(P<0.05);其余各試驗(yàn)組間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。上述結(jié)果說(shuō)明當(dāng)飼料磷酸二氫鈣水平低于29 g/kg時(shí),體長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率隨飼料磷水平的增加而升高,當(dāng)磷酸二氫鈣水平高于45 g/kg時(shí),體長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率保持比較穩(wěn)定的狀態(tài)。

    表2 各試驗(yàn)組草魚(yú)的體長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率、吻-鰓蓋長(zhǎng)/體長(zhǎng)和肥滿度Table 2 The specific growth rate of length,snout-gill cover length/body length and condition factor of grass carp in different experimental groups

    2.2 對(duì)草魚(yú)肥滿度的影響

    由表2可知,飼料磷水平對(duì)草魚(yú)的肥滿度沒(méi)有顯著影響(P>0.05),但以Ⅲ組的肥滿度最高,為2.00%。這說(shuō)明當(dāng)飼料中磷酸二氫鈣的水平為29 g/kg時(shí),草魚(yú)能獲得較高的肥滿度。

    2.3 對(duì)吻-鰓蓋長(zhǎng)/體長(zhǎng)的影響

    由表2可知,各試驗(yàn)組草魚(yú)的吻-鰓蓋長(zhǎng)/體長(zhǎng)沒(méi)有顯著差異(P >0.05),均在 0.26 ~0.28 范圍內(nèi)。這說(shuō)明飼料磷水平對(duì)草魚(yú)鰓蓋骨的發(fā)育沒(méi)有造成顯著的影響,沒(méi)有出現(xiàn)因磷的缺乏或者過(guò)量而導(dǎo)致的鰓蓋骨畸形情況。

    2.4 對(duì)草魚(yú)畸形程度的影響

    在養(yǎng)殖的過(guò)程中,試驗(yàn)魚(yú)沒(méi)有出現(xiàn)諸如出血等體表受傷的病狀。養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后,肉眼觀察可發(fā)現(xiàn)部分魚(yú)的骨骼出現(xiàn)了畸形,畸形的主要部位在魚(yú)的尾柄。各試驗(yàn)組草魚(yú)在X射線照射下的骨骼狀況見(jiàn)圖1。

    由X射線照射結(jié)果可知,飼料中磷水平對(duì)6個(gè)試驗(yàn)組的草魚(yú)頭骨沒(méi)有明顯的影響,肉眼不能觀察到頭骨出現(xiàn)畸形的狀況。飼料磷水平對(duì)草魚(yú)脊椎骨有明顯的影響,主要表現(xiàn)為引起了草魚(yú)脊椎骨的變形,發(fā)生脊椎骨彎曲的部位約在脊椎骨末端1/5處。由X線片及采樣時(shí)的觀察可知:Ⅰ組草魚(yú)的脊椎骨在肉眼和X射線下觀察都沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的畸形情況(圖1-Ⅰ);Ⅱ和Ⅲ組草魚(yú)的脊椎骨在肉眼觀察時(shí)基本沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的畸形情況,但是在X射線下觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)部分魚(yú)的脊椎骨已經(jīng)有了一定的畸形情況(圖1-Ⅱ和圖1-Ⅲ);Ⅳ組草魚(yú)的脊椎骨在肉眼觀察時(shí)可見(jiàn)部分魚(yú)的尾部稍微有些上翹,在X射線下觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)部分魚(yú)的脊椎骨已經(jīng)有了一定的畸形情況(圖1-Ⅳ);Ⅴ和Ⅵ組草魚(yú)的脊椎骨在肉眼觀察時(shí)就能發(fā)現(xiàn)一些草魚(yú)尾部上翹,尤其是Ⅵ組草魚(yú)尾部已經(jīng)嚴(yán)重彎曲上翹,在X射線下觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)尾部脊椎骨也有了畸形的情況(圖1-Ⅴ和圖1-Ⅵ)。由此可以判斷:Ⅰ組草魚(yú)沒(méi)有出現(xiàn)畸形或者畸形的程度不嚴(yán)重,肉眼還不能準(zhǔn)確判斷;Ⅱ和Ⅲ組草魚(yú)已經(jīng)開(kāi)始出現(xiàn)輕微的畸形,因?yàn)榛蔚某潭炔粐?yán)重,所以只能在X射線條件下觀察到脊椎骨的畸形而不能肉眼識(shí)別體形的不正常,畸形的程度只視為輕度畸形;Ⅳ組草魚(yú)已經(jīng)開(kāi)始出現(xiàn)畸形,肉眼能識(shí)別出體形的不正常,在X射線條件下可觀察到脊椎骨的畸形,畸形的程度可視為中度畸形;Ⅴ和Ⅵ組草魚(yú)出現(xiàn)的畸形情況比較嚴(yán)重,不只是脊椎骨出現(xiàn)明顯的畸形情況,就連魚(yú)體的外表形態(tài)也發(fā)生明顯的畸形變化,并可通過(guò)肉眼觀察判斷,可視為重度畸形。

    3 討論

    魚(yú)類在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中,魚(yú)體會(huì)發(fā)生一系列結(jié)構(gòu)和功能上的變化。魚(yú)類在發(fā)育的過(guò)程中容易出現(xiàn)骨骼的非健康狀態(tài),骨骼的發(fā)育畸形包括脊柱側(cè)凸、脊柱前彎、鰓蓋彎曲、尾椎畸形和頜畸形等,同時(shí),出現(xiàn)畸形的魚(yú)往往生長(zhǎng)緩慢、抗病能力弱[4]。影響魚(yú)類骨骼發(fā)育的因素主要有飼料中鈣、磷、維生素及氨基酸含量以及脂肪的含量和種類等。Geurden 等[5-6]研究報(bào)道,不同類型的磷脂對(duì)鯉魚(yú)的生長(zhǎng)和發(fā)育有不同的影響,卵磷脂具有促生長(zhǎng)的作用,而肌醇酸磷脂則能顯著降低骨骼畸形。陳彥等[7]的研究表明,磷脂及其代謝產(chǎn)物能提高作為生物膜Ca2+轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)重要組成部分的Ca2+-ATP酶的活性,Ca2+-ATP酶不僅參與骨組織有機(jī)質(zhì)的鈣化,還直接參與成骨細(xì)胞向骨組織的分化,是決定骨骼正常發(fā)育的重要因素。Gapasin等[8]研究報(bào)道,投喂添加高不飽和脂肪酸的飼料能顯著降低比目魚(yú)的鰓蓋畸形率,其鰓蓋畸形率由未添加時(shí)的27.3% ~33.5%降低到了添加后的15.8% ~23.5% 。Gapasin[9]報(bào)道,二十二碳六烯酸(DHA)和維生素C都能影響比目魚(yú)骨骼的發(fā)育,投喂添加DHA的飼料后比目魚(yú)的畸形率由33%降低到了17%,而投喂添加DHA和維生素C飼料后比目魚(yú)的畸形率只有8.4% ~13.7%。Dedi等[10]報(bào)道,在日本比目魚(yú)飼料中添加高劑量的維生素A后,比目魚(yú)的生長(zhǎng)速度降低,出現(xiàn)脊柱彎曲、椎骨縮短等骨骼畸形情況。Takeuchi等[11]在比目魚(yú)飼料(車輪蟲(chóng))中添加幾種維生素A后,比目魚(yú)出現(xiàn)了嚴(yán)重的骨骼畸形。Dabrowski[12]研究報(bào)道,鯉魚(yú)飼料中缺乏維生素C時(shí)會(huì)出現(xiàn)脊柱側(cè)凸、鰓絲扭曲、鰓蓋變短等畸形的癥狀。Dabrowski等[13]研究表明,維生素C缺乏會(huì)引起鯉魚(yú)幼苗鰓弓變形和尾鰭腐爛。Hilomen-Garcia[14]報(bào)道,當(dāng)飼料中維生素C缺乏時(shí),會(huì)影響比目魚(yú)鰓蓋的發(fā)育,從而導(dǎo)致比目魚(yú)的鰓蓋膜裂開(kāi)。Akiyama等[15]報(bào)道,色氨酸缺乏將會(huì)引起紅馬哈魚(yú)、虹鱒魚(yú)、大馬哈魚(yú)和銀大馬哈魚(yú)的脊柱側(cè)凸,色氨酸能有效治愈大馬哈魚(yú)的骨骼畸形。

    圖1 各試驗(yàn)組草魚(yú)的X線片F(xiàn)ig.1 X-ray film of grass carp in different experimental groups

    在已有的文獻(xiàn)中,研究的主要方向都是營(yíng)養(yǎng)素對(duì)魚(yú)類骨骼發(fā)育的影響,一系列營(yíng)養(yǎng)素的缺乏或過(guò)量可能會(huì)引起骨骼系統(tǒng)的畸形,尤其是脊椎骨的畸形;而對(duì)于魚(yú)體畸形的判定主要是通過(guò)肉眼的觀察,看其與正常魚(yú)體的形態(tài)特征是否有差別來(lái)加以判斷。在本試驗(yàn)中出現(xiàn)了肉眼觀察魚(yú)體體形正常,但在X射線條件下觀察魚(yú)體脊椎骨已經(jīng)出現(xiàn)了一定程度畸形的現(xiàn)象。因此,對(duì)魚(yú)體畸形情況的判定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)科研試驗(yàn)的進(jìn)行具有很大的指導(dǎo)意義。本文把魚(yú)類的骨骼畸形程度作以下的區(qū)別。

    健康魚(yú)體:通過(guò)肉眼觀察魚(yú)體體形正常,在X射線或其他方式條件下直接觀察脊椎骨形態(tài)正常的魚(yú)體為健康魚(yú)體。

    輕度畸形:通過(guò)肉眼觀察魚(yú)體體形正常,在X射線或其他方式條件下可直接觀察到脊椎骨在某一點(diǎn)開(kāi)始偏離脊椎骨主軸,但魚(yú)體體形仍基本保持正常,與主軸之間形成一定的角度,當(dāng)角度低于時(shí)20.0°時(shí),認(rèn)為該尾魚(yú)為輕度畸形,如圖2-A所示。

    中度畸形:通過(guò)肉眼可觀察到魚(yú)體的尾柄已經(jīng)出現(xiàn)了一定程度的畸形,在X射線或其他方式條件下可直接觀察到脊椎骨在某一點(diǎn)開(kāi)始偏離脊椎骨主軸,并與主軸之間形成一定的角度,角度大小在 20.0°~45.0°時(shí),認(rèn)為該尾魚(yú)為中度畸形,如圖2-B所示。

    重度畸形:通過(guò)肉眼可觀察到魚(yú)體體形已經(jīng)出現(xiàn)了嚴(yán)重的畸形,在X射線或其他方式條件下可直接觀察到脊椎骨某點(diǎn)偏離主軸角度大于45.0°,或者出現(xiàn)不止一次的偏離主軸時(shí),認(rèn)為該尾魚(yú)為重度畸形,如圖2-C所示。

    圖2 草魚(yú)骨骼畸形圖示Fig.2 Graphical representation of grass carp bone deformity

    在本試驗(yàn)中,Ⅰ組草魚(yú)形體健康,沒(méi)有發(fā)現(xiàn)畸形情況;Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組草魚(yú)出現(xiàn)了輕度或者中度畸形的情況;Ⅴ和Ⅵ組草魚(yú)出現(xiàn)了重度畸形情況。在形態(tài)學(xué)上,魚(yú)類的骨骼包括頭部膜骨、體內(nèi)骨骼和鱗片。在本試驗(yàn)中,從形態(tài)學(xué)觀察來(lái)看,養(yǎng)殖結(jié)束后魚(yú)體的頭骨、鰓蓋骨及鱗片沒(méi)有發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象,但是飼料含磷量高的組出現(xiàn)了尾柄畸形的情況,從X射線下觀察脊椎骨可知高磷組草魚(yú)的畸形情況比較嚴(yán)重,而低磷組草魚(yú)脊椎骨反而正常,這與眾多研究中認(rèn)為飼料中磷含量偏低會(huì)引起魚(yú)體骨骼畸形的觀點(diǎn)相悖。這可能是因?yàn)?,在養(yǎng)殖過(guò)程中,低磷組草魚(yú)的攝食率偏低,攝入的磷酸二氫鈣含量低于高磷組草魚(yú),又由于純化飼料的適口性較差,硬度較大,不利于魚(yú)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用,從而阻礙了魚(yú)體的生長(zhǎng),因此低磷組草魚(yú)的生長(zhǎng)性能不好,畸形情況沒(méi)有體現(xiàn)出來(lái),而高磷組草魚(yú)攝入了過(guò)量的磷酸二氫鈣,從而導(dǎo)致了魚(yú)體的畸形。

    4 結(jié)論

    ①本試驗(yàn)條件下,飼料中磷酸二氫鈣添加過(guò)量(超過(guò)29 g/kg)時(shí)容易影響草魚(yú)形體發(fā)育,導(dǎo)致魚(yú)體骨骼的畸形。

    ②按魚(yú)體的脊椎骨畸形情況可以把草魚(yú)形體分為4個(gè)等級(jí)(健康魚(yú)體、輕度畸形、中度畸形和重度畸形),魚(yú)體脊椎骨的畸形情況可作為飼料磷水平的一個(gè)判斷標(biāo)準(zhǔn)。

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