高效液相色譜法測(cè)定銀翹解毒片中連翹酯苷A的含量

趙昱瑋 于 淼▲ 南敏倫 李志強(qiáng) 何 偉 張 倩

1.吉林天藥藥物研發(fā)有限公司，吉林長(zhǎng)春 130012；2.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林長(zhǎng)春 130012；3.首都醫(yī)科大學(xué)附屬復(fù)興醫(yī)院，北京 100045；4.吉林天藥本草堂制藥有限公司，吉林長(zhǎng)春 130012

銀翹解毒片具有疏風(fēng)解表，清熱解毒功效，用于風(fēng)熱感冒，癥見發(fā)熱頭痛、咳嗽口干、咽喉疼痛。由金銀花、連翹、薄荷、荊芥、淡豆豉、牛蒡子、桔梗、淡竹葉、甘草等9味藥組成，銀翹解毒片收載于《中華人民共和國藥典》（2010年版）[1]，連翹為木犀科連翹屬植物連翹的干燥果實(shí)[2]，主要活性成分為以連翹苷為代表的木脂素類及連翹酯苷為代表的苯乙醇苷類[3]，具有抗菌、強(qiáng)心、利尿、鎮(zhèn)吐等藥理作用，常用連翹治療急性風(fēng)熱感冒、癰腫瘡毒、淋巴結(jié)結(jié)核、尿路感染等癥[4]，為銀翹解毒片的主要藥味；連翹苷和連翹酯苷A為連翹特征成分，對(duì)金黃色葡萄球菌等11種致病菌均有極強(qiáng)的抑制作用，并具有抗病毒、抗炎、解熱、抗氧化等作用，是迄今為止從連翹中發(fā)現(xiàn)的藥理活性最強(qiáng)的活性成分之一[5-6]。2010年版藥典連翹中增加了測(cè)定連翹酯苷A含量的方法。本試驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)連翹酯苷A進(jìn)行了含量測(cè)定，方法簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度等指標(biāo)均符合要求，可作為檢測(cè)和控制該制劑的含量指標(biāo)。

1 儀器和試藥

美國安捷倫1100（VWD）高效液相色譜儀；Diamonsil（鉆石）C18（5μm，250 mm×4.6 mm）色譜柱；BS2010S型電子天平，北京賽多利斯天平有限公司；KQ-100型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；連翹酯苷A對(duì)照品（南通飛宇生物科技，批號(hào)FY10010622，純度＞98.0%）；銀翹解毒片（吉林天藥本草堂制藥有限公司，Z22025699）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

Diamonsil（鉆石）C18 （5μm，250mm×4.6 mm）色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-0.4%冰醋酸溶液（17︰83）；流速1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)330 nm；進(jìn)樣量10 μL，等梯度洗脫，理論達(dá)板數(shù)按連翹酯苷A峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。依上述色譜條件，精密吸取連翹酯苷A對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL，分別進(jìn)樣。在對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖相應(yīng)位置上，有相同保留時(shí)間的色譜峰。見圖1、2。

圖1 連翹酯苷A對(duì)照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備溶液 精密稱取干燥至恒重的連翹酯苷A對(duì)照品10.50 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.2 樣品溶液 取本品10片，研細(xì)，混勻，取3 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 Hz）30 min，放冷，稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密量取 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL 置 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。按實(shí)驗(yàn)條件依法測(cè)定，以峰面積與濃度計(jì)算回歸方程為：Y=8.5124×103-6.3257X，r=0.999 96；表明連翹酯苷A在10.5～63.0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 中間精密度試驗(yàn)

取批號(hào)20110609的銀翹解毒片制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，根據(jù)峰面積計(jì)算，得連翹酯苷A的RSD為1.21%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取批號(hào)20110609的銀翹解毒片制備供試品溶液，分別在0、2、4、6、10 h進(jìn)樣 10 μL，測(cè)定連翹酯苷 A 的 RSD 為 1.23%。

表1 連翹酯苷A準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)20110609的銀翹解毒片粉末6份，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，進(jìn)樣分析，結(jié)果制劑中連翹酯苷A的RSD為0.82%，表明該法重復(fù)性良好。

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取批號(hào)20110609的銀翹解毒片粉末6份，每份約1.5g，精密稱定，各精密加入一定量的連翹酯苷A對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備，按2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣10 μL測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果測(cè)得回收率在99.0%～102.7%之間，平均回收率為100.75%，RSD為1.37%。見表1。

2.8 樣品分析

取本品3批，每批進(jìn)樣5次，分別按2.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下進(jìn)行HPLC分析，測(cè)定各指標(biāo)成分的峰面積并計(jì)算含量。見表2。

表2 供試品中連翹酯苷A含量測(cè)得結(jié)果

3 討論

銀翹解毒片收載于《中華人民共和國藥典》2010年版，規(guī)定以檢測(cè)連翹苷為其質(zhì)量控制指標(biāo)；2010年版藥典連翹中增加了測(cè)定連翹酯苷A含量的方法。連翹酯苷A和連翹苷為連翹的主要成分，并未發(fā)現(xiàn)對(duì)銀翹解毒片中連翹酯苷A進(jìn)行含量測(cè)定的報(bào)道。本研究參考藥典中連翹酯苷A含量測(cè)定的方法進(jìn)行了測(cè)定，本法樣品處理方法、測(cè)定方法簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，結(jié)果表明本法可用于銀翹解毒片生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1008-1009.

[2] 李倩.連翹的化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，20（117）：78-80.

[3] 李玉蘭.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地連翹中連翹苷和連翹酯苷的含量[J].中國醫(yī)學(xué)工程，2010，18（2）：46-52.

[4] 張海燕.連翹化學(xué)成分及藥理活性的研究進(jìn)展[J].中藥材，2001，23（10）：657-660.

[5] 馮淑怡.連翹酯苷抗感染、解熱作用研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2006，6（10）：73-75.

[6] 胡克杰.連翹酯苷體外抗病毒作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中醫(yī)藥科技，2001，8（2）：89-91.?