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    應(yīng)用改進ELISA檢測干血棉球HIV抗體的可行性研究

    2011-06-05 02:33:06趙紅玉
    中國醫(yī)藥科學(xué) 2011年21期
    關(guān)鍵詞:弱陽性棉球儲存

    趙紅玉 李 穎

    1.甘肅省靈臺縣疾病預(yù)防控制中心,甘肅靈臺 744400;2.甘肅省平?jīng)鍪械诙嗣襻t(yī)院,甘肅平?jīng)?744000

    目前我國HIV抗體篩查實驗室都采用ELISA法檢測血清樣品中HIV抗體,而血清在常溫下存放容易變質(zhì);雖然用濾紙干血斑樣品便于儲存和運輸,但因樣品載量?。總€濾紙片載體僅容納50~100 μL血清),其應(yīng)用范圍受到限制。選擇何種載體既具有較大的樣品載量,以便進行多項目檢測,又便于在常溫下容易儲存和運輸;又用何種方法檢測這種特殊載體的HIV抗體,這是本研究要探討的兩個問題。醫(yī)用脫脂棉柔軟膨松,吸水性極強,有容易獲得,是血清樣品的最佳載體。將血清滴于干棉球上制成干血棉球,具有較大的血清容量(每克棉球可吸納約200~400 μL血清),儲存和運輸都比較方便,而且樣品的前處理也非常容易。為研討干血棉球代替血清樣品檢測HIV抗體的可行性,筆者用ELISA法對298份干血棉球與相同血清樣品進行了實驗對比。為彌補干血棉球處于較高溫度、儲存較長時間可能會引起HIV抗體陽性樣品OD值降低,導(dǎo)致弱陽性出現(xiàn)假陰性結(jié)果,本實驗又對檢測干血棉球HIV抗體的ELISA法進行改進,以提高檢測方法的靈敏度。

    1 材料與方法

    1.1 樣品來源

    HIV抗體陽性樣品來自筆者所在縣隨訪管理的艾滋病患者和HIV感染者及用HIV抗體陰性血清稀釋HIV抗體陽性血清制成的弱陽性樣品,共100份,其中S/CO比值在1~3的弱陽性樣品20份;HIV抗體陰性樣品為自愿咨詢檢測及公共場所從業(yè)人員,共198份。

    1.1.1 血清樣品制備 采集靜脈血5 mL,室溫放置2 h,自然凝固后3 000 r/min離心15 min分離血清,置-20 ℃保存使用。

    1.1.2 干血棉球 器材:干棉球[2],在具有圓形凹槽塑料膜一面,固定一個或幾個適當(dāng)大小的醫(yī)用脫脂棉球作為血清樣品的載體,在紙殼板的另一面可注明樣品來源、檢測目的、采血日期等項目。

    制備:將血清樣品200 μL滴于1個棉球載體上,每份血清可滴于一至數(shù)個棉球載體,37℃干燥過夜,干燥器干燥后后置密封袋中,即為干血棉球。37℃儲存3周。

    1.2 試劑

    珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn),ELISA法檢測HIV-1/HIV-2抗體試劑,批號為2010100708。

    1.3 儀器

    美國產(chǎn)Stat Fax 2 100型全自動酶標(biāo)分析儀,美國產(chǎn)Stat Fax 2 600型洗板機。

    1.4 方法

    1.4.1 按試劑盒說明書操作 采用450/630 nm雙波長,不設(shè)空白對照。用美國產(chǎn)Stat Fax 2 100型全自動酶標(biāo)分析儀比色,結(jié)果以說明書給定參考值設(shè)置的酶標(biāo)儀判斷結(jié)果為準(zhǔn)。

    1.4.2 干血棉球樣品處理液 取含有200μL血清樣品的干血棉球置于試管中,加生理鹽水200μL,混勻,溶解20~30 min,3 000 r/min離心15 min,取上清液(樣品處理液)備用。

    1.4.3 改進ELISA 在ELISA法中,第1步加入陰性、陽性對照,待檢樣品由50μL改為100μL,溫育時間由30 min改為60 min;其他步驟和試劑用量同試劑說明書。

    1.4.4 20份37℃儲存3周S/CO 比值在1~3的弱陽性血清,按ELISA說明書和改進ELISA兩種方法檢測。

    2 結(jié)果

    298份血清樣品用ELISA試劑盒說明書方法檢測,HIV抗體陽性100份;經(jīng)37℃儲存3周的298份相同血清干血棉球樣品處理液,用改進ELISA方法檢測,HIV抗體陽性99份。兩種樣品HIV抗體檢測結(jié)果符合率為99.0 %,經(jīng)x2檢驗,相同的血清干血棉球與血清樣品檢測結(jié)果之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

    表1 兩種方法檢測相同血清樣品HIV抗體結(jié)果比較

    20份S/CO值在1~3的HIV抗體弱陽性樣品,其37℃儲存3周的干血棉球樣品處理液用ELISA法檢測,HIV抗體陽性11份,而用改進ELISA檢測,HIV抗體陽性20份。經(jīng)x2檢驗,兩種檢驗方法結(jié)果有所不同(P<0.05);說明用ELISA法檢測37℃儲存3周的干血棉球樣品處理液,有部分弱陽性樣品出現(xiàn)假陰性結(jié)果,而用ELISA改進方法檢測結(jié)果均為陽性。見表2。

    表2 干血棉球用說明書和用改進方法檢測HIV抗體弱陽性結(jié)果比較

    3 討論

    干血棉球樣品處理液在37℃儲存3周,用改進ELISA檢測HIV抗體,與相同血清樣品按ELISA法說明書操作,檢測結(jié)果比較,兩種樣品HIV抗體檢測結(jié)果符合率為 99%,經(jīng)x2檢驗,兩種檢驗方法差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);干血棉球集合了血清樣品和濾紙片樣品二者的優(yōu)點,既有容量大、易于儲存和運輸?shù)葍?yōu)點,也可用干血棉球代替血清樣品用于HIV抗體的檢測。

    37℃儲存3周的干血棉球,會引起HIV抗體活性降低,用生理鹽水溶解,又會引起HIV抗體濃度降低,HIV抗體弱陽性樣品,按ELISA檢測,會出現(xiàn)假陰性結(jié)果;但通過對ELISA方法稍作改進,即增加待檢樣品量(50~100 μL),同時延長抗原-抗體反應(yīng)(溫育)時間(30~60 min),可避免這一現(xiàn)象發(fā)生。用改進ELISA檢測干血棉球與相同血清樣品按試劑說明書檢測結(jié)果比較,經(jīng)x2檢驗,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);改進ELISA在實驗原理、操作步驟與試劑盒說明書完全相同,可用改進ELISA檢測干血棉球HIV抗體。

    [1] 張俊平,馬改娣,張孟尚,等.抗人球蛋白法與酶法檢測ABO血型免疫抗體效價的比較[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生,2009,47(30):59.

    [2] 孔繁生.一種保存干燥血清標(biāo)本的器具:中國,200520028244 [P].2006-04-05.

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