乙肝患者 DNA含量與免疫學標志物相關性研究

吳卉

目前感染乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)的檢測方法主要有 ELISA法檢測免疫學血清標志物和熒光定量PCR法檢測 DNA。ELISA法主要檢測 HBV血清標志物，即乙肝五項(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)，反映病毒的表達水平，也間接地反映了病毒復制水平，在乙型肝炎的病因分析、疾病進程和預后判斷上有著不可替代的作用，是臨床診斷、治療、分析和判斷HBV感染者病程及傳染性的重要依據(jù)。熒光定量PCR法檢測的是體內病毒的拷貝數(shù)，具有高度的靈敏性和特異性，并且重復性好、檢測范圍寬，其目的主要是判斷目前患者病毒復制程度的大小、傳染性大小，尤其在判斷乙肝的轉歸以及用藥前后的療效判斷上有很重要的作用，同時也是重要的抗病毒治療用藥指征之一。

本研究就以上兩種方法對HBV檢測結果進行分析，以探討ELISA法與PCR法檢測結果的相關性及不同的臨床意義，從中了解乙型肝炎感染情況，為臨床判斷乙型肝炎患者病情和療效觀察提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2008年6月至2009年6月間吉林省醫(yī)院住院及門診乙型肝炎患者500例，其中男334例，女166例，年齡10～70歲，診斷符合2000年9月西安全國傳染病寄生蟲病學術會議修訂《病毒性肝炎防治方案》所定的標準［1］。同時收集100例乙肝病毒標志物全陰性的健康體檢者血清標本作為對照組。根據(jù)檢出的常用模式將研究對象分為10組，見表1的分組欄(每組中的項目均為陽性)。

1.2 試劑與儀器 ELISA檢測試劑由上?？迫A生物技術有限公司提供。HBV DNA含量檢測試劑盒由深圳匹基生物技術開發(fā)有限公司提供。羅氏熒光定量PCR儀LightCycler。

表1 ELISA檢測HBVm和FQ-PCR檢測HBV DNA的結果

1.3 實驗方法 HBV DNA含量檢測及乙肝病毒感染血清學標志物檢測均嚴格按照試劑盒說明書要求進行。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用 SPSS11.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，HB-sAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)組與其他各組的比較采用χ2檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

通過 χ2檢驗發(fā)現(xiàn) HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)組患者血清HBV DNA陽性檢出率明顯高于除 HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb-IgM(+)組以外的其他各組(P＜0.001)見表1。HBeAg和HBV DNA陽性檢出率見表2。

表2 HBeAg和HBV DNA陽性檢出率比較

3 討論

實驗結果表明，HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)組患者血清HBV DNA的陽性檢出率最高，為91.8%，經統(tǒng)計學處理與其他各組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)，說明HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)患者 HBV DNA 具有較高的復制水平，是具有傳染性的重要標志。這一結果還說明HBeAg陽性與HBV DNA陽性存在一致性。值得注意的是，在HBeAg陽性患者血清中仍有13例HBV DNA結果為陰性，考慮可能是由于患者體內HBV DNA復制水平低，而在此之前所表達的HBeAg尚未被完全降解，仍處于較高水平，故形成了HBV DNA與HBeAg時相分離的現(xiàn)象［2］。這就提示僅以HBV DNA的檢測來判斷是否感染可能存在漏診的情況。

180 例 HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)組患者血清HBV DNA陽性檢出率為 38.3%;57例 HBsAg(+)、HBcAb(+)組患者血清HBV DNA陽性檢出率為59.7%，這一結果說明 HBeAg陰性、HBeAb或 HBcAb陽性者仍可以有 HBV DNA陽性檢出，提示患者體內仍有 HBV存在或復制，故HBeAg的消失，HBeAb或HBcAb的出現(xiàn)并不能代表病毒停止復制或病情好轉，只能說明復制水平的降低。分析其原因可能與HBV發(fā)生前C區(qū)基因突變或機體發(fā)生特異性的免疫耐受有關［3］。

31例 HBsAb(+)患者中 HBV DNA陽性率為9.7%，其原因可能為:長期多次反復小劑量接觸 HBV未見或少見發(fā)病，出現(xiàn) HBsAb(+)，但體內仍可存在低拷貝的HBV顆粒;或者存在其他 HBV血清學亞型感染［4］。

陰性對照組也檢出8例 HBV DNA陽性，檢出率為8.0%，其原因可能是:①HBV發(fā)生前C區(qū)基因突變或機體發(fā)生特異性免疫耐受有關。②HBsAg確已清除，但 HBV DNA仍持續(xù)存在［5］。③PCR方法存在假陽性。

綜上所述，F(xiàn)Q-PCR和ELISA兩種檢測方法具有良好的相關性和互補性。長春市的500例患者各模式分組中HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)組患者血清 HBV DNA 陽性檢出率和含量明顯高于其他各組。HBeAg和HBV DNA陽性檢出率有較高的一致性。

［1］病毒性肝炎防治方案(試行)(2000年西安全國傳染病寄生蟲病學術會議修訂).中華傳染病雜志，2000，8(6):324.

［2］丁柳，劉麗，雷學忠.5600例血清標本乙肝病毒 DNA定量與免疫學標志物檢測的對比分析.四川大學學報(醫(yī)學版)，2006，37(2):313.

［3］朱傳武.HBV前C/C基因變異與宿主T細胞免疫的關系.國外醫(yī)學免疫學分冊2001，24(6):289.

［4］朱艷賓，劉增佑.乙型肝炎孕婦早期血清 HBV DNA含量與胎兒宮內感染關系研究.河北醫(yī)藥，2008，30(12):1928-1929.

［5］湯立新.血清HBV DNA熒光定量 PCR檢測與乙肝病毒標志物模式的相關性.職業(yè)衛(wèi)生與病傷，2007，22(2):141.