中醫(yī)寒凝血瘀證模型大鼠血清游離鈣和細(xì)胞流變學(xué)變化*

陸一竹，陳曉旭，蔡琦玲，王學(xué)嶺

血瘀證即指多種原因引起的血脈不暢，血行遲緩澀滯,血液壅阻于脈中或離經(jīng)停積的病理狀態(tài)，是多種疾病的發(fā)病基礎(chǔ)或病變結(jié)果，由此血瘀證及其治療成為近代醫(yī)學(xué)研究中最活躍的領(lǐng)域之一。筆者結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中血瘀證模型的研究，制作了大鼠寒凝血瘀證模型，從血清游離鈣及細(xì)胞流變學(xué)方面對該證候的生物學(xué)基礎(chǔ)進行研究。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 SD大鼠26只，雌雄各半，體質(zhì)量（165±10）g，周齡12~15周。購于天津放射醫(yī)學(xué)研究所（實驗動物質(zhì)量合格證編號：0158377；許可證編號：scxk 京 2009-0007）。

1.2 實驗試劑 鹽酸腎上腺素注射液（由天津南開醫(yī)院提供：天津金耀氨基酸有限公司，批號0607091）。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗分組 將26只大鼠隨機分成正常對照組（14只），寒凝血瘀證模型組（12只）。

1.3.2 寒凝血瘀證模型制作 模型組大鼠后肢皮下注射鹽酸腎上腺素[200 μg/(只·次)]，2 h 后將大鼠浸入冰水中（4℃）5 min取出，2 h后再次注射同等劑量鹽酸腎上腺素，2 h后取血檢測[1]。

1.4 指標(biāo)檢測

1.4.1 細(xì)胞流變學(xué)指標(biāo)檢測 大鼠腹主動脈取血進行細(xì)胞流變學(xué)測定，采用LBY-N6C型全自動自清洗血流變儀（北京普利生儀器有限公司）。

1.4.2 血沉測定 溫氏測試法進行血沉測定，采用EHK-40型紅細(xì)胞沉降壓積儀（天津市亞坤電子科技發(fā)展有限公司）。

1.4.3 血清游離鈣濃度測定 大鼠腹主動脈取血，離心制備成血清，以鈣液體試劑盒（偶氮胂Ⅲ法）進行測定，采用日立-7600-010血清鈣分析儀。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)分析采用SPSS 11.5 for windows統(tǒng)計分析軟件處理,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，正態(tài)分布資料進行兩獨立樣本t檢驗，偏態(tài)分布資料進行秩和檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癥狀體征表現(xiàn) 寒凝血瘀證模型組大鼠出現(xiàn)精神萎靡不振，蜷縮少動，寒戰(zhàn)，喜扎堆，弓背聳毛，被毛無光澤，肢涼，反應(yīng)遲鈍，爪尾部紫暗，耳色暗紅或蒼白，呼吸微弱，飲水量少，大便濕爛、肛門污穢等證候表現(xiàn)。

2.2 寒凝血瘀證模型大鼠細(xì)胞流變學(xué)的變化 見表1-2。

表1 寒凝血瘀證模型大鼠細(xì)胞流變學(xué)的變化（s）

表1 寒凝血瘀證模型大鼠細(xì)胞流變學(xué)的變化（s）

注：與正常對照組比較*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 紅細(xì)胞壓積（%）紅細(xì)胞聚集指數(shù)正常對照組 14 42.93±5.11 2.57±0.51寒凝血瘀組 12 47.08±1.73* 3.03±0.18**

表2 寒凝血瘀證模型大鼠細(xì)胞流變學(xué)的變化（s）

表2 寒凝血瘀證模型大鼠細(xì)胞流變學(xué)的變化（s）

注：與正常對照組比較*P<0.05。

組別 n 紅細(xì)胞壓積（%）紅細(xì)胞聚集指數(shù)正常對照組 14 1.00±0.12 7.80±1.23寒凝血瘀組 12 0.92±0.053* 7.80±1.23*

2.3 寒凝血瘀證模型大鼠血沉的變化 見表3。

表3 寒凝血瘀證大鼠血沉的變化（s）

表3 寒凝血瘀證大鼠血沉的變化（s）

注：與正常對照組比較*P<0.05。

組別 n 血沉（mm/h）血沉方程K值正常對照組 14 1.07±0.27 4.65±1.37寒凝血瘀組 12 2.25±1.82* 7.03±3.81*

2.4 寒凝血瘀證模型大鼠血清游離鈣的變化 見表4。

表4 實驗性寒凝血瘀證大鼠血清游離鈣的變化（s）

表4 實驗性寒凝血瘀證大鼠血清游離鈣的變化（s）

注：與正常對照組比較*P<0.05。

組別 n 血清游離鈣（mmol/L）正常對照組 14 2.57±0.12*寒凝血瘀組 12 2.77±0.32*

3 討論

本實驗中，大鼠皮下注射腎上腺素后，皮膚黏膜血管收縮，血流管道變窄，血管收縮為自身陽氣不足的表現(xiàn)，2 h后再行冰水浴，屬于復(fù)感寒冷刺激。該造模方法與中醫(yī)寒證的發(fā)病原因及發(fā)病機制比較接近，均為外感陰寒邪氣，陽氣耗傷，陰寒內(nèi)盛，機體失去溫煦，且運化失司，而致模型大鼠表現(xiàn)出寒證常見的證候特點。本研究結(jié)果顯示模型組大鼠的癥狀體征明顯構(gòu)成中醫(yī)“寒凝血瘀證”證候特點，模型的建立具有科學(xué)客觀性。

有關(guān)血瘀證急性病理狀態(tài)的生物學(xué)基礎(chǔ),目前認(rèn)為與血液流變性、血液凝固性及纖溶活性等病理障礙有密切關(guān)系[2]，而研究表明血瘀證中又存在著血清游離鈣值升高的變化。本實驗結(jié)果表明，在急性寒凝血瘀證大鼠模型中，血清鈣離子呈現(xiàn)明顯增多，該指標(biāo)為“寒凝血瘀證”的生物學(xué)基礎(chǔ)提供了有價值的參考。

筆者的實驗又選用細(xì)胞流變學(xué)作為觀察指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)在模型組中紅細(xì)胞的變形能力下降，剛性指數(shù)增強，紅細(xì)胞的聚集指數(shù)上升，壓積加大，血沉加快。該實驗結(jié)果通過客觀指標(biāo)初步揭示了中醫(yī)“寒凝血瘀證”證候的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)本質(zhì)，為藥物治療機制的探討奠定了科學(xué)基礎(chǔ)。

[1]趙 玲，魏海峰，李雅莉，等.從血液流變學(xué)的改變分析腎上腺素致血瘀證大鼠模型的建立[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2010，8（2）：189-190.

[2]關(guān)現(xiàn)軍，劉 群，枉云峰.用沙門氏菌復(fù)制兔“熱毒血瘀證”病理模型的研究[J].西南民族學(xué)院學(xué)報，1992，18（1）：12－19.