Caveolin-1在前列腺癌中的表達及臨床意義

盧桂堯 楊永強 范小明

前列腺癌(prostatic carcinoma，PCa)是一種嚴重威脅男性健康的惡性腫瘤，目前在美國前列腺癌的發(fā)病率已經(jīng)超過肺癌成為第一位危害男性健康的腫瘤[1]，近年來我國人前列腺癌發(fā)病率有明顯上升趨勢，但是目前前列腺癌病因及發(fā)病機制尚未完全明確。Caveolin-1(小窩蛋白)是caveolae膜結(jié)構(gòu)的標記性蛋白，它與細胞信號傳導(dǎo)、物質(zhì)轉(zhuǎn)運、細胞增殖等密切相關(guān)，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系也非常密切[2]。Caveolin-1在大多數(shù)腫瘤形成中可能發(fā)揮抑癌基因樣作用[3];而在極少數(shù)腫瘤中能促進癌細胞增殖和轉(zhuǎn)移。本實驗通過免疫組化來研究caveolin-1在前列腺癌中的表達情況，以探討caveolin-1與前列腺癌臨床預(yù)后意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院1999～2003年前列腺癌石蠟標本50例(均取自腫瘤原發(fā)灶)，經(jīng)病理學(xué)確診。年齡45～78歲，中位年齡59歲;于手術(shù)中取得后經(jīng)4%多聚甲醛固定，并制成石蠟標本。

1.2 試劑 兔抗人Caveolin-1蛋白多克隆抗體為Santa cruz產(chǎn)品，稀釋度為1:50;EnVision免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)公司。

1.3 方法 采用免疫組化EnVision法。石蠟標本4 μm連續(xù)切片，其中一片用做常規(guī)HE染色，其余用做免疫組化。切片脫蠟至水，3%H2O25～10 min滅活內(nèi)源性酶，蒸餾水洗3遍。微波修復(fù)抗原，滴加抗原修復(fù)液室溫10 min，蒸餾水洗3遍。滴加正常山羊血清封閉液室溫10 min，甩去血清后滴加1:50 caveolin-1多抗，4℃過夜，0.5 mol/L PBS洗5 min×3次。滴加辣根過氧化物酶(HRP)抗兔二抗，37℃，50 min，0.5 mol/L PBS洗5 min×3次。經(jīng)DAB顯色，蘇木素輕度復(fù)染，脫水、透明、封片。陰性對照用PBS代替一抗。

1.4 結(jié)果判定 采用Olympus光學(xué)顯微鏡觀察caveolin-1的表達強度，標準為0分:0% ～5%腫瘤細胞染色，1分:6% ～25%腫瘤細胞染色，2分:21% ～50%腫瘤細胞染色，3分:50%以上腫瘤細胞染色。0分被認為為陰性，而1，2，3分則為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件分析數(shù)據(jù)。Kaplan-Meier法進行生存分析并繪制生存曲線，log-rank檢驗比較各組生存率，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Caveolin-1在前列腺癌組織中的表達 免疫組化結(jié)果顯示Caveolin-1在前列腺癌組織中的表達明顯高于正常前列腺黏膜(圖1)。在50例前列腺癌組織中，陰性為15例，陽性為35例。Caveolin-1在前列腺癌組織中的陽性表達率為70%。

圖1 免疫組化顯示Caveolin-1在前列腺癌組織中的表達，定位于包膜胞漿。(箭頭所示為腫瘤間質(zhì))

2.2 Caveolin-1與前列腺癌患者預(yù)后的關(guān)系 對50例前列腺癌患者進行生存預(yù)后分析，Kaplan-Meier分析顯示Caveolin-1陽性的前列腺癌患者的預(yù)后差，而陰性的前列腺癌患者預(yù)后好。Log-rank比較兩組生存率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(圖2)(P=0.028)。

圖2 Kaplan-Meier評估Caveolin-1在前列腺癌組織中的表達與預(yù)后

3 討論

Caveolae是1953年由Palade發(fā)現(xiàn)的，當時命名為質(zhì)膜囊泡(Plasmalemmal vesicles)。在Caveolae的組裝過程中Caveolin及膽固醇起關(guān)鍵作用，如果敲除Caveolin的基因，即不能形成Caveolae，所以 Caveolin作為 Caveolae的標記蛋白[4]。Caveolin-1是20世紀90年代中期開始的克隆，其基因定位于7q31.1[5]，而此位點在多種腫瘤中(如肝癌、卵巢癌、乳腺癌、子宮肌瘤、胃腺癌等)出現(xiàn)缺失或斷裂，提示Caveolin-1與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究提示Caveolin-1過表達與腫瘤分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，在一些抗藥性癌細胞株中，如抗紫杉醇肺癌細胞系、Caveolin-1抗雄激素大鼠前列腺癌細胞株，Caveolin-1亦表達上調(diào)。這些研究說明，Caveolin-1可能與一些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移及腫瘤細胞的耐藥性有一定的關(guān)系。近年的研究顯示，在膀胱上皮癌中，Caveolin-1表達明顯升高，且有促進癌細胞的增殖及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移的作用[6，7]。這提示 Caveolin-1在不同的腫瘤中發(fā)揮著不同的作用。

本研究結(jié)果顯示，Caveolin-1在前列腺癌組織中呈高表達，而在正常組織中不表達或弱表達，腫瘤組織中表達強度顯著高于正常組織，且腫瘤患者的Caveolin-1的表達水平與患者預(yù)后相關(guān)。說明Caveolin-1可能為前列腺癌診斷及預(yù)后提供新的依據(jù)。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)Caveolin-1在大部分前列腺癌組織中高表達(陽性率為70%)，提示其可能參與了前列腺癌的發(fā)生或發(fā)展。這不僅為研究前列腺癌的發(fā)病機制提供了線索，而且對前列腺癌的診斷和治療也具有一定的重要意義。該基因在前列腺及前列腺癌織中的具體作用及究竟如何發(fā)揮功能有待后續(xù)研究。

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