健脾止嗽顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

楊水清，洪志勇，張麗芬，曾 斌，劉志承

(廣東省深圳市中醫(yī)院，廣東 深圳 518000)

健脾止嗽顆粒由陳皮、桔梗、蒼術(shù)、白術(shù)、木香、神曲、檳榔、茯苓等藥物組方，具有益氣健脾、化痰止嗽等功效，主要用于治療脾虛咳嗽、痰多白稀、咳聲低微、汗多食少、肢軟神疲、大便軟溏等癥。為保證制劑質(zhì)量，筆者用薄層色譜法和高效液相色譜法研究其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國(guó))，Agilent Elipse XDBC18柱，VWD檢測(cè)器，四元梯度泵;CAMAG ATS 4型薄層自動(dòng)點(diǎn)樣儀(瑞士);硅膠G薄層板(浙江省路橋四甲生化塑料廠)。健脾止嗽顆粒(自制中試產(chǎn)品，批號(hào)分別為100801，100802，100803);健脾止嗽顆粒陰性對(duì)照制劑(自制);蒼術(shù)(茅蒼術(shù))對(duì)照藥材、木香對(duì)照藥材、橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)分別為120932-200405，120921-200506，110721-200512，中國(guó)藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 蒼術(shù)

取本品5包，研勻，稱(chēng)取10 g，加乙醇50 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液置水浴蒸干，殘?jiān)靡掖? mL溶解，作為供試品溶液;另取蒼術(shù)對(duì)照藥材0.5 g，加乙醇15 mL，同法制成對(duì)照藥材溶液;再取缺蒼術(shù)的其他各味藥，按制備工藝制成蒼術(shù)陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液制備方法制成蒼術(shù)陰性對(duì)照品溶液。照2005年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10 μL，對(duì)照藥材溶液4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(50∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾[1](圖1 A)。

2.1.2 木香

取本品5包，研勻，稱(chēng)取10 g，加甲醇40 mL，超聲處理5 min，濾過(guò)，濾液置70℃水浴蒸干，殘?jiān)眉状? mL溶解，作為供試品溶液;取木香對(duì)照藥材1 g，加甲醇10 mL，同法制成對(duì)照藥材溶液;再取缺木香的其他各味藥，按制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液制備方法制成木香陰性對(duì)照溶液。照2005年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各 10 μL，對(duì)照藥材溶液6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-甲醇(27∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾[2-3](圖 1 B)。

圖1 薄層色譜圖

2.2 橙皮苷含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Elipse XDB-C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水(60∶40);檢測(cè)波長(zhǎng):283 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:5 μL。

2.2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取橙皮苷對(duì)照品適量，用甲醇溶解，制成每1 mL含橙皮苷0.388 mg的對(duì)照品貯備液。精密吸取此液10 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，得每1 mL含橙皮苷38.8 μg的對(duì)照品溶液。取本品約1 g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加甲醇40 mL，加熱回流提取2 h，放冷，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):按制劑工藝制備不含陳皮的陰性對(duì)照樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。按含量測(cè)定項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果在對(duì)照品溶液保留時(shí)間處沒(méi)有色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照樣品無(wú)干擾。對(duì)照品溶液供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液的色譜見(jiàn)圖2。

圖2 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:分別精密吸取對(duì)照品貯備溶液0.2，0.8，1.2，1.6，2.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，分別精密吸取5 μL注入液相色譜分析儀，測(cè)定峰面積。以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 Y=21.534 X+741.48(r=0.999 6)。結(jié)果表明，橙皮苷質(zhì)量濃度在31.04～155.20 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液(38.8 μg/mL)5 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果峰面積積分值的 RSD為1.12%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液5 μL，按含量測(cè)定項(xiàng)下方法，分別于0，2，4，8，12 h時(shí)各測(cè)定1次。結(jié)果峰面積積分值的 RSD為1.08%(n=5)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一樣品，分別制備供試品溶液，測(cè)定其峰面積并計(jì)算橙皮苷含量。結(jié)果的 RSD為1.93%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品，按低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度分別精密加入一定量的橙皮苷對(duì)照品，依法制成供試品溶液并測(cè)定其含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 橙皮苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.2.4 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 μL，依法進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果批號(hào)為100801，100802，100803的3批樣品中，橙皮苷平均含量分別為9.35，9.41，9.39 mg/g，RSD分別為0.89%，0.80% ，1.20%(n=3)。

3 討論

按藥典方法[4]鑒別處方中的蒼術(shù)時(shí)，蒼術(shù)陰性對(duì)照品溶液在相應(yīng)位置上有干擾，而以乙醇為提取溶劑、石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(50∶1)為展開(kāi)劑時(shí)，不但色譜斑點(diǎn)清晰，且陰性對(duì)照無(wú)干擾;用藥典方法[4]鑒別處方中的木香時(shí)，木香陰性對(duì)照品溶液在相應(yīng)位置上也有干擾，而以環(huán)己烷-甲醇(27∶1)為展開(kāi)劑時(shí)，色譜斑點(diǎn)清晰，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。采用高效液相色譜法測(cè)定含量的過(guò)程中，比較了甲醇、乙醇、無(wú)水乙醇、水飽和正丁醇等溶劑，結(jié)果甲醇的提取較完全，可以滿(mǎn)足含量測(cè)定要求;還比較了加熱回流、超聲處理、索氏提取等提取方法，甲醇直接加熱回流和超聲處理法得到的供試品溶液的液相色譜中雜質(zhì)峰較多，而索氏提取法大大減少了雜質(zhì)峰;索氏提取時(shí)間優(yōu)選試驗(yàn)結(jié)果顯示，提取2 h后橙皮苷含量不再增加。色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果顯示，所用方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于控制健脾止嗽顆粒的質(zhì)量。

[1]王曉瓊，李家琳.木香順氣丸鑒別與含量測(cè)定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29(2):243-244.

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[3]余曉琴，李 鷗，董 林.加味爛積丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(7):1 773-1 775.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:41，111.