脂必泰膠囊中紅曲的含量測(cè)定＊

溫中明 ，張 法 ，黃 毅 ，謝 靜 ，羅江秀 ，魏照星 ，原文鵬

(1.廣東省深圳市光明新區(qū)公明人民醫(yī)院藥劑科，廣東 深圳 518106;2.廣東省深圳市沙灣醫(yī)院藥劑科，廣東 深圳 518114;3.廣東省深圳市人民醫(yī)院·暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院藥學(xué)部，廣東 深圳 518020)

紅曲為禾本科植物稻 Oryza satira L.的種子經(jīng)人工接種紫紅曲霉菌 Monascus Purpureus Went.發(fā)酵后打粉而成，在我國(guó)食品和醫(yī)藥上的應(yīng)用至少有1 800年的歷史[1-2]。近年來，我國(guó)應(yīng)用現(xiàn)代科技手段模擬古代紅曲生產(chǎn)工藝，以紅曲發(fā)酵而得的特制紅曲提取物生產(chǎn)了一些新制劑并應(yīng)用于臨床。脂必泰膠囊是我國(guó)開發(fā)的含紅曲的新型中藥制劑，對(duì)高脂血癥的臨床療效肯定[3]，其調(diào)血脂的主要有效成分已明確為在發(fā)酵過程中產(chǎn)生的天然成分洛伐他汀(lovastatin)[4]。筆者建立了測(cè)定脂必泰膠囊中洛伐他汀含量的高效液相色譜法，對(duì)于確保制劑質(zhì)量、充分發(fā)揮其療效具有重要意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

戴安Ultimate 3000型高效液相色譜儀;Diode Array二極管陣列檢測(cè)器;XS205型電子天平(瑞士梅特勒-托利多集團(tuán));KQ2200B型超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。洛伐他汀對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量為99.4%，批號(hào)為100600-200301);脂必泰膠囊(成都地奧九泓制藥廠，批號(hào)分別為080105，090103，090204);甲醇為色譜純，乙醇等試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

取脂必泰膠囊6粒，將內(nèi)容物混合均勻，取約0.15 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加75%乙醇約80 mL，超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)10 min，取出，冷至室溫，加75%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱取洛伐他汀對(duì)照品0.011 83 g，置25 mL量瓶中，加入75%乙醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.473 2 g/L的對(duì)照品溶液。取按處方及制法制成缺紅曲的陰性對(duì)照樣品，取相當(dāng)于供試品0.15 g的量，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.2 樣品處理方法選擇

2.2.1 提取方法和提取時(shí)間

取脂必泰膠囊(批號(hào)為080105)6粒，傾出內(nèi)容物混合均勻，取約0.15 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加75%乙醇80 mL，分別超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)10，20，30 min和回流提取20，40，60 min，取出，放冷，加75%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，分別測(cè)定洛伐他汀的含量。結(jié)果見表1?？梢?，超聲20，40，60 min所得供試品溶液中洛伐他汀含量無明顯差異，而超聲10 min與回流提取20 min結(jié)果相當(dāng)，因此選擇超聲提取10 min。

表1 樣品提取方法和時(shí)間考察

2.2.2 提取溶劑

取脂必泰膠囊(批號(hào)為080105)內(nèi)容物約0.15 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，分別加30%乙醇、75%乙醇、95%乙醇、甲醇溶劑各20 mL，超聲(功率500 W，頻率40 kHz)處理10 min，取出，冷至室溫，加相應(yīng)溶劑至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，分別測(cè)定洛伐他汀的含量。結(jié)果采用30%乙醇、75%乙醇、95%乙醇、甲醇為提取溶劑時(shí)，洛伐他汀的含量分別為 2.9，8.0，7.5，8.4 mg/粒。從環(huán)境保護(hù)和資源節(jié)約角度考慮，選取75%乙醇作為提取溶劑。

2.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，即Dionex-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 -水(75∶25);流速:1 mL/min;柱溫:22℃;檢測(cè)波長(zhǎng):236 nm;進(jìn)樣量:10 μL;定量方法:外標(biāo)法。在此色譜條件下，洛伐他汀峰無雜質(zhì)干擾，峰形對(duì)稱，保留時(shí)間適中，色譜圖見圖1。

2.4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:分別精密吸取對(duì)照品溶液25，50，100，250，500，1 000 μL，置1 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取上述溶液各10 μL，依次進(jìn)樣、測(cè)定，記錄峰面積積分值(A)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)，得洛伐他汀回歸方程 A=531.97 C-0.506 2，r=0.999 9(n=3)。結(jié)果表明，洛伐他汀質(zhì)量濃度在0.011 83～0.473 2 g/L范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗(yàn):取樣品(批號(hào)為080105)內(nèi)容物約0.15 g，共6份，精密稱定，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果樣品中洛伐他汀含量為8.3 mg/粒，RSD為1.0%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取樣品(批號(hào)為080105，含量為8.344 mg/粒)約0.075 g，共6份，分別精密加入2.502 g/L的對(duì)照品溶液1 mL，按含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

表2 洛伐他汀加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

穩(wěn)定性考察:取樣品(批號(hào)為080105)約0.3 g，依法制備供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，10 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果平均峰面積為30.466 3，RSD為0.8%(n=6)，表明供試品溶液在制備后10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5 樣品含量測(cè)定

取樣品3批，依法制備供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，依法測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算洛伐他汀的含量。結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

用二極管陣列檢測(cè)器采集3D數(shù)據(jù)，洛伐他汀對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖中，洛伐他汀色譜峰的最大吸收波長(zhǎng)為235.9 nm。綜合考慮，選用236 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。用二極管陣列檢測(cè)器采集3D數(shù)據(jù)，檢查峰純度，結(jié)果供試品溶液色譜中洛伐他汀峰的純度因子在±50%峰寬處值均大于比閾值900，表明該峰純度良好，出峰位置無其他雜質(zhì)。

參照文獻(xiàn)[5]以甲醇-水-磷酸(72∶28∶0.5)為流動(dòng)相Ⅰ，參考文獻(xiàn)[6]以甲醇-水(75∶25)為流動(dòng)相Ⅱ，分別進(jìn)行色譜分析，結(jié)果對(duì)照品溶液及供試品溶液中洛伐他汀色譜峰純度均達(dá)到要求，對(duì)照品峰均能達(dá)到基線分離、峰形對(duì)稱。鑒于流動(dòng)相Ⅱ配制簡(jiǎn)便，且甲醇較乙腈價(jià)廉、毒性小，故選擇流動(dòng)相Ⅱ。

對(duì)樣品采用直接的處理方法，與文獻(xiàn)[5-6]相比更簡(jiǎn)單，雖未過中性氧化鋁柱和堿化處理，但分離效果較好且基線平穩(wěn)，譜峰尖銳，測(cè)定結(jié)果較滿意。

脂必泰膠囊是復(fù)方中藥制劑，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[7]規(guī)定含量測(cè)定指標(biāo)是熊果酸。但脂必泰膠囊中治療高脂血癥的主要成分是紅曲，紅曲中調(diào)血脂活性成分主要是洛伐他汀[4]。因此，對(duì)洛伐他汀進(jìn)行含量測(cè)定是控制脂必泰膠囊質(zhì)量的必然方法。本試驗(yàn)建立的方法樣品的處理簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確，適用于脂必泰膠囊中洛伐他汀的含量測(cè)定。

[1]李 東，劉 源，謝 靜，等.紅曲的起源、分類學(xué)及生藥學(xué)鑒定[J].中國(guó)藥業(yè)，2009，18(3):1-2.

[2]李 東，謝 靜，王 敏，等.紅曲起源新考[J].中藥材，2007，30(4):484-487.

[3]魯衛(wèi)星，王俊顯，朱建貴，等.脂必妥膠囊治療高脂血癥多中心臨床試驗(yàn)[J].中國(guó)新藥與臨床雜志，1999，18(6):365-367.

[4]宓鶴鳴，宋洪濤，陳 磊，等.紅曲中降血脂活性成分的研究[J].中草藥，1999，30(3):172-174.

[5]羅仁才，孫開奇，謝申猛，等.紅曲中洛伐他汀總量的測(cè)定方法[J].衛(wèi)生研究，2003，32(2):157-158.

[6]張小茜，周富榮，石濟(jì)民.高效液相色譜法測(cè)脂必泰膠囊及紅曲中洛伐他汀的含量[J].中國(guó)中藥雜志，1997，22(4):222-224.

[7]WS3-119(Z-119)-2004(Z)，衛(wèi)生部頒國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].