原子吸收分光光度法測(cè)定骨碎補(bǔ)藥材中的重金屬＊

王永來(lái)，熊明玲，陳紅軍

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬深圳市中醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 深圳 518033)

骨碎補(bǔ)(Rhizoma Drynariae)為水龍骨科植物槲厥 Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm的干燥根莖，具有補(bǔ)腎強(qiáng)骨、續(xù)傷止痛的功效，是我國(guó)名貴中草藥之一。隨著中醫(yī)中藥的快速發(fā)展，國(guó)際需求的日益增加，以及我國(guó)綠色中藥材的興起，建立中藥材中重金屬殘留限量檢測(cè)方法、制定合適標(biāo)準(zhǔn)，已成為緊迫工作[1]。在中藥材重金屬殘留檢測(cè)方面，我國(guó)規(guī)定的有鉛(Pb)、鎘(Cd)、砷(As)、汞(Hg)、銅(Cu)等元素。骨碎補(bǔ)是我院傳統(tǒng)制劑滋腎降糖丸的君藥，2009年深圳市科技計(jì)劃立項(xiàng)完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。筆者參考文獻(xiàn)[2]采用原子吸收分光光度法和原子熒光光譜法對(duì)10批不同產(chǎn)地的骨碎補(bǔ)藥材進(jìn)行上述5種元素的重金屬殘留量分析，旨在了解市售骨碎補(bǔ)的安全性，為藥材的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

消解罐為XK96-A型快速混勻器(姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司);Hitachi 180-80型原子分光光度儀(日立);AFS-820型雙道原子熒光光度計(jì)(北京吉天儀器有限公司)。鉛、鎘、砷、汞、銅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(廣東省藥品檢驗(yàn)所提供);骨碎補(bǔ)藥材，購(gòu)自藥材市場(chǎng)或采自中藥材基地;硝酸(色譜純)，高氯酸(色譜純)，鹽酸，硫脲(分析純)和抗壞血酸(分析純)，購(gòu)自汕頭化學(xué)試劑廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

本試驗(yàn)應(yīng)用硝酸-高氯酸進(jìn)行濕法消化，有效消除了有機(jī)成分對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響[3]。精密稱取骨碎補(bǔ)樣品粉末2 g，置100 mL錐形瓶中，加入15 mL硝酸和3 mL高氯酸，用小漏斗蓋住瓶口，浸泡24 h后，置消解罐上，調(diào)節(jié)溫度至120℃，消解至硝酸揮發(fā)完畢(即紅棕色氣體揮發(fā)完畢，此過(guò)程中溫度不能超過(guò)140℃)，再將溫度升高至170℃，使高氯酸分解、揮發(fā)，待錐形瓶中酸液揮發(fā)完畢，用3%鹽酸溶解剩余物，并沖洗錐形瓶合并洗液，定容至25 mL，靜置，使溶液自然沉淀澄清，上清液即為測(cè)定用的供試品溶液。

2.2 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:將各單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液用3%鹽酸溶液分別稀釋成一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，并按2005年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄[4]規(guī)定的方法進(jìn)行稀釋(分別作6個(gè)以上的測(cè)定濃度)，分別測(cè)定各自的吸光度(A)并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果鉛(Pb)、鎘(Cd)、銅(Cu)、砷(As)、汞(Hg)分別在 0 ～40.0 μg/mL，0 ～32.0 μg/mL，0 ～80.0 μg/mL，0 ～40.0 μg/mL，0～60.0 μg/mL 質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為 APb=0.0072CPb+0.005 6(r=0.998 6)，ACd=0.002 3CCd+0.002 9(r=0.996 6)，ACu=0.006 9 CCu+0.009 3(r=0.998 6)，AAs=0.001 9CAs+0.002 5(r=0.996 7)，AHg=0.003 2CHg+0.005 1(r=0.996 9)。

檢測(cè)限確定:分別對(duì)已消化處理的空白溶液進(jìn)行20次重復(fù)測(cè)定，以空白信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)偏差(S)的3倍計(jì)算其檢測(cè)限。結(jié)果銅、鎘、銅、砷、汞的檢測(cè)限分別為 0.000 7，0.000 9，0.000 6，0.0005，0.000 8 μg/mL。

精密度試驗(yàn):分別精密量取線性關(guān)系考察項(xiàng)下的鉛、鎘、銅、砷和汞標(biāo)準(zhǔn)液各10.0 μg/mL，分別在各自最佳測(cè)定條件測(cè)定吸光度。結(jié)果鉛、鎘、銅、砷和汞精密度的 RSD分別為1.2%，0.6%，1.4% ，0.7%，0.8%(n=5)。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批(廣東河源)樣品，依法平行制備5份供試品溶液并測(cè)定吸光度。結(jié)果鉛、鎘、銅、砷和汞的 RSD分別為1.7% ，1.5%，1.6%，1.3% ，1.4%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密量取線性關(guān)系考察項(xiàng)下的鉛、鎘、銅、砷和泵的標(biāo)準(zhǔn)液各 10.0 μg/mL，分別于各自最佳測(cè)定條件下的 0，1，2，4，8，10 h時(shí)測(cè)定吸光度。結(jié)果鉛、鎘、銅、砷和泵的 RSD分別為0.7%，0.9%，0.8%，0.6%，0.5%(n=6)，表明溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):精密取已知鉛、鎘含量的同一批樣品(廣東河源骨碎補(bǔ))適量，分別精密加入高、中、低3個(gè)量級(jí)的鉛、鎘標(biāo)準(zhǔn)液各2份，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。同法對(duì)廣東河源骨碎補(bǔ)分別加銅、坤、汞高、中、低3個(gè)量級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液各2份，依法測(cè)定。結(jié)果銅的平均回收率為98.22%，RSD=1.67%;砷的平均回收率為97.63%，RSD=1.66%;汞的平均回收率為98.06%，RSD=1.92%。

表1 鉛、鎘加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.3 樣品含量測(cè)定

采用原子吸收分光光度法測(cè)定樣品中銅、鉛、鎘的含量，采用原子熒光光譜法測(cè)定樣品中砷、汞的含量，經(jīng)試驗(yàn)選擇的最佳測(cè)定條件見(jiàn)表2和表3。按線性關(guān)系考察項(xiàng)下方法測(cè)定，每個(gè)樣品10次重復(fù)，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，根據(jù)所測(cè)吸光度得供試品溶液質(zhì)量濃度，再換算得所測(cè)中藥中銅、鉛、鎘的含量[5]，結(jié)果見(jiàn)表4。取2.1項(xiàng)下供試品液2 mL，置10 mL試管內(nèi)，加入1 mL還原劑(2.5 g硫脲+2.5 g抗壞血酸，用超純水定容50 mL，現(xiàn)用現(xiàn)配)，再加入7 mL 3%的鹽酸溶液，用震蕩混勻器混勻，作為供試品溶液。按砷、汞標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法測(cè)定，每種樣品均重復(fù)3次測(cè)定，取均值作為測(cè)定結(jié)果。結(jié)果見(jiàn)表4?？梢?jiàn)，10批骨碎補(bǔ)中重金屬殘留量測(cè)定結(jié)果銅為 2.687 5～8.521 7 mg/kg，鎘為 0.200 6～0.270 8 mg/kg，鉛為 0.250 4～1.000 mg/kg，汞為 0.003 4～0.029 4 mg/kg，砷為0.006 6～0.053 3 mg/kg。

表2 原子吸收法測(cè)定銅、鉛、鎘的最佳測(cè)定條件

表3 雙道原子熒光光譜法測(cè)定砷、汞的最佳測(cè)定條件

表4 10批骨碎補(bǔ)中重金屬殘留量(mg/kg)

3 討論

2005年版《中國(guó)藥典(一部)》和香港《中成藥注冊(cè)申請(qǐng)手冊(cè)》有關(guān)重金屬標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定:鉛(Pb)≤5.0 mg/kg，鎘(Cd)≤0.3 mg/kg，汞(Hg)≤0.2 mg/kg，砷(As)≤2.0 mg/kg，銅(Cu)≤20.0 mg/kg。本研究結(jié)果顯示，由全國(guó)各地收集的10批骨碎補(bǔ)藥材樣品中，5種重金屬的殘留量均符合此規(guī)定[2]，且比闞連娣等[6]用同一方法對(duì)瓜蔞中鉛、鎘和汞的含量測(cè)定更全面，更能反映所測(cè)中藥材中的重金屬殘留量。

2005年版《中國(guó)藥典(一部)》首次對(duì)西洋參、白芍、甘草、丹參、金銀花、黃芪等提出了重金屬和有害元素的限量要求，而其他藥材尚未涉及，還需進(jìn)一步完善。根據(jù)本研究結(jié)果，建議對(duì)骨碎補(bǔ)提出重金屬限量要求:銅(Cu)≤9.00 mg/kg，鉛(Pb)≤1.00 mg/kg，鎘(Cd)≤0.30 mg/kg，汞(Hg)≤0.03 mg/kg，砷(As)≤0.06 mg/kg。

中藥材重金屬殘留來(lái)自內(nèi)源和外源，中藥內(nèi)源的重金屬是植物吸收來(lái)自土壤、水源的重金屬，外源污染主要來(lái)自藥材加工、運(yùn)輸和生產(chǎn)過(guò)程，控制中藥材重金屬殘留要從這兩方面因素著手。

[1]張春盛，吳舜芳，林炳國(guó).西洋參等8種中藥中重金屬檢測(cè)[J].中國(guó)藥業(yè)，2009，18(17):20.

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